DICP103DICP103 Seminar Ⅱ 植物雌激素的研究进展 博士生：张岩 导 师：梁鑫淼 专 业：分析化学.

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1 DICP103DICP103 Seminar Ⅱ 植物雌激素的研究进展 博士生：张岩 导 师：梁鑫淼 专 业：分析化学

2 DICP103DICP103 主要内容  雌激素的定义及其功能  为什么研究植物雌激素  植物雌激素的种类及来源  植物雌激素的作用机制  植物雌激素的生物检测  植物雌激素的化学分析  植物雌激素的生物识别 - 化学检测  展望

3 DICP103DICP103 雌激素的定义及其功能 雌激素（ estrogen): 由内分泌系统产生的类 固醇性激素，是生物体内 一类必不可少的微量有机 物质。它们对机体的代谢 和各种正常生命活动、对 人类及动物的生殖、骨骼 以及大脑的发育息息相关。 estradiol estrone

4 DICP103DICP103 雌激素的定义及其功能 雌激素不足： 心血管收缩 骨质疏松 皮肤干燥 智力减退 更年期综合症 雌激素过量： 焦虑 体重增加 偏头痛 浮肿 子宫纤维瘤 激素替代疗法（ HRT ），不仅缓解了绝经期症状，还可使 心血管疾病的死亡率降低 35 ％，骨质疏松危险性降低 50 ％然而存在潜在的提高乳腺癌发病率的危险

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6 DICP103DICP103 为什么研究植物雌激素 植物雌激素（ phytoestrogen): 植物体内具有抗氧化作用，在动 物和人体内发挥弱雌激素作用的化合物，通过与雌激素受体 （ ER ）以低亲和力结合而发挥微弱的雌激素样效应（ agonist ） 和／或抗雌激素 (antagonist) 效应 植物雌激素对相关疾病的防治作用  改善绝经期综合症  预防心血管疾病  抗骨质疏松  对雌激素依赖性肿瘤的作用 特点：双向调节 当雌激素分泌不足时，植物雌激素可以发挥弱雌激素样作用； 当雌激素分泌过量时，植物雌激素削弱内源雌激素的作用，起到 抗激素作用。

7 DICP103DICP103 植物雌激素的种类及来源

8 DICP103DICP103 植物雌激素的作用机制

9 DICP103DICP103 植物雌激素的生物检测 体外检测（ in vitro assay) 受体竞争结合（ receptor competitive binding) 受体竞争结合 细胞增殖 (E-screen) 细胞增殖 转基因酵母细胞 (yeast screen assay) 转基因酵母细胞 体内检测 （ in vivo assay) 子宫生长试验（ uterus growth test ） 阴道角质化实验

10 DICP103DICP103 植物雌激素的分析方法 GC-MS 基于 HPLC 分离基础上的分析方法 毛细管电泳 免疫分析

11 DICP103DICP103 植物雌激素的生物识别 — 化学分析法 活性成分筛选、分离以及结构鉴定一体化

12 DICP103DICP103  LC-BCD 植物雌激素的生物识别 — 化学分析法 LC-BCD 方法的联用提供了高灵敏性和选择性分析鉴定复杂混合物中雌 激素化合物的方法。 LC 系统的分离功能能够解决生物分析中交叉反应 的问题, 另一方面, 生物分析固有的选择性和灵敏性又提高了 LC 的适用 性。

13 DICP103DICP103  超滤与 LC-MS 联用 植物雌激素的生物识别 — 化学分析法 生物识别与分离鉴定实现一体化

14 DICP103DICP103 展望 植物雌激素是天然的雌激素受体调节剂，安全，廉价，副作用小， 可以有效缓解更年期综合症，发展成为 HRT 的替代品将具有巨大 的潜在市场； 增加植物雌激素的摄入量对人类健康大有裨益，可以从单纯的治 疗药物向预防保健药物等多功能发展； 我国中药资源丰富，有传统医学作为基础，从中药当中寻找开发 具有雌激素效应的药物是一条快捷的途径； 应对植物雌激素进行系统的研究，确定其有效成分，确切有效剂 量以及对人体存在的潜在的副作用进行研究，使植物雌激素充分 发挥预防与保健的作用

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16 DICP103DICP103 植物雌激素的分析方法 - 免疫分析 优点：高通量筛选，高灵敏性和特异性，成本低廉。 原理：一个或一类化合物作为抗原，利用抗体和抗原 的特异性反应对分析物进行检测。 原理： 类型 : 放射性免疫分析 (radimmunoassay, RIA) 酶联免疫分析 (Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)

17 DICP103DICP103 植物雌激素的分析方法 -RIA

18 DICP103DICP103 Wang et al. J. Agric. Food Chem., 42, 1584, 1994

19 DICP103DICP103 植物雌激素的分析方法 -ELISA

20 DICP103DICP103 Fortune et al. Nutr. Cance., 35(1)96-103,1999

21 DICP103DICP103 参考文献 [1] Harlow BL, Signorello LB. Factors associated with early menopause. Maturitas, 2000, 35, 3–9. [2] Grodstein F, Stampfer MJ, Manson JE, et al. Postmenopausal estrogen and progestin use and the risk of cardiovascular disease. N Engl J Med 1996; 335, 453-61. [3] Anderson JB, Garner SC. Phytoestrogen in bone. Baillierre’s Clin Endocrinol Metab 1998;12, 543–57. [4] McLachlan J A. Functional toxicology: a new approach to detect biologically active xenobiotics. Environmental Health Perspectives. 1993, 101, 386-387. [5] Colborn T. Vom Saal F S. Soto A M. Developmental effects of endocrine- disruption chemicals in wildlife and humans. Environmental Health Perspectives. 1993, 101, 378-384. [6] Cassidy A, Bingham S, Setchell KD. Biological effects of a diet of soy protein rich in isoflavones on the menstrual cycle of premenopausal women. Am J Clin Nutr ， 1994 ， 60(3), 333-340.

22 DICP103DICP103 参考文献 [7] shimi Y, Arai N, Wang X, et al. Difference in effective dosage of genistein on bone and uterus in ovariectomized mice[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2000, 274 (3), 697-701. [8] A.J. Oosterkamp, M.T. Villaverde Herraiz, H.Irth, U. R. Tjaden, J. van der Greef, Anal. Chem. 1996, 68, 1201-1206. [9] Jianghua Liu, Joanna E. Burdettθ, Haiyan Xu, Chungang Gu, Richard B. van Breemen, Krishna P.L.Bhat, Nancy Booth, Andreas I.Constantinou, John M. Pezzuto, Harry H.S.Fong, Norman R. Farnsworth, Judy L. Bolton, Evaluation of Estrogenic activity of plant extracts for the potential treatment of menopausal symptoms, J. Agric. Food Chem. 2001, 49, 2472-2479. [10] Schmitt E, Dekant W, Stopper H., assaying the estrogenicity of phytoestrogens in cells of different estrogen sensitive tissues, Toxicol In Vitro, 2001, 15 (4-5), 433-439. [11] Wang W, Tanaka Y, Han ZK, Cheng J, radioimmunoassay for quantitative analysis of formononetin in blood plasma and rumen fluid of wethers fed red clover, J. Agric. Food Chem. 1994, 42, 1584-1587. [12] Kohen F, Gayer B, Amir-Zaltsman Y, Ben-Hur H, Thomas E, Lu LJ, A nonisotopic enzyme-based immunoassay for assessing human exposure to genistein, Nutr Cancer, 1999; 35 (1), 96-103.

23 DICP103DICP103 植物雌激素的生物检测 - 受体结合 E.Schmitt et al.Toxicology in Vitro 15 (2001) 433-439 back

24 DICP103DICP103 植物雌激素的生物检测 - 细胞增殖 E.Schmitt et al.Toxicology in Vitro 15 (2001) 433-439 back

25 DICP103DICP103 植物雌激素的生物检测 - 转基因酵母

26 DICP103DICP103 实验流程 新融转基因酵母转入三角锥瓶中培养 30 o C, 130rph 培养 24h 转入细胞培养板 加入标准及样品 30 o C, 130rph, 培养 2h 测定 OD600 测定 OD420 转至 EP 管 加入破碎及反应液 标准反应 30min 样品至黄色，最多 3h 转基因酵母筛选法操作示意图

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