汇报人：张 蕾 导 师：何俏军 教授 杨 波 教授 浙江大学 药学院 药理毒理与生化药学研究所. 研究背景 ——ATRA  肿瘤的诱导分化疗法是肿瘤治疗学研究的新领域。诱导分化 ( induction of differentiation ) 是指恶性肿瘤细胞在体内外分化诱导 剂的作用下，向正常或接近正常细胞方向分化逆转的现象。

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1 汇报人：张 蕾 导 师：何俏军 教授 杨 波 教授 浙江大学 药学院 药理毒理与生化药学研究所

2 研究背景 ——ATRA  肿瘤的诱导分化疗法是肿瘤治疗学研究的新领域。诱导分化 ( induction of differentiation ) 是指恶性肿瘤细胞在体内外分化诱导 剂的作用下，向正常或接近正常细胞方向分化逆转的现象。  全反式维甲酸 ( ATRA ) 诱导分化治疗已成为治疗急性早幼粒细胞白 血病的首选手段。  维甲酸耐药的机制可能与维甲酸分解代谢作用增强、与胞浆维甲 酸结合蛋白的结合增强等作用相关。

3 MDM2 p53 Apoptosis Cell cycle arrest DNA repair … DegradationNuclear export 23 1 研究背景 ——Nutlins MDM2 p53 Stratege1 Stratege2 Stratege3 （ Nutlins ）

4 研究结果及结论 1 MTT 法 PI 单染结合流式细胞术 * Nutlin-1 仅对 p53 野生型的白血病细胞具有一定的增殖抑制及凋亡 诱导作用，对 p53 突变或缺失的白血病细胞无细胞毒作用。 ？ Nutlin-1 是否与 ATRA 具有协同诱导白血病细胞分化的作用？若有， 则其分子机制是否与 p53 相关？

5 研究结果及结论 2 CD11b% Counts CD11b 表面抗原检测 NBT 还原实验 CD11b 表面抗原检测

6 台盼蓝染色结合细胞计数 * Nutlin-1 仅对 HL60 或 NB4 细胞株（ p53 突变或缺失）具有一定的增 强 ATRA 分化诱导能力的作用，而对 U937 （ p53 野生型）无增强作用。 ？ Nutlin-1 增强 ATRA 分化诱导能力的作用是否必须在 p53 无功能的 细胞株中才能体现？

7 研究结果及结论 3 Western Blotting 法 CD11b 表面抗原检测 * Nutlin-1 增强 ATRA 分化诱导能力的作用与 p53 无关。 ？ Nutlin-1 增强 ATRA 分化诱导能力的作用机制是什么？

8 研究结果及结论 4 Real Time PCR 法 JC1 、 Rhodamine123 外排实验 MTT 法

9 Western Blotting 法 * ATRA 能够在 HL60 及 NB4 细胞中诱导 p-gp 的高表达，但不能在 p53 野生型或 p53 缺失的 U937 细胞中诱导 p-gp 的高表达。 ？ ATRA 诱导 p-gp 高表达的现象是否与 Nutlin-1 增强 ATRA 分化诱导 能力的作用相关？

10 研究结果及结论 5 p-gp ATPase 活性检测 Nutlin-1aNutlin-1b

11 Western Blotting 法 Real Time PCR 法 * Nutlin-1 与 ATRA 均为 p-gp 的底物， Nutlin-1 与 ATRA 共同作用时能 够抑制 ATRA 的外排，增强 ATRA 的分化诱导作用。

12 研究结论 ATRA Nutlin-1 HL60/NB4 cells p-gp ATRA Nutlin-1 增强分化能力 的作用仅在经 ATRA 诱导 高表达 p-gp 的细胞株中 发挥，而与 p53 通路无关。

13 Thank you ！