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肝脏谷丙转氨酶活力测定
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一、实验目的 掌握谷丙转氨酶的测定方法。 二、实验原理 谷丙转氨酶作用于丙氨酸及 α- 酮戊二酸，生成谷氨酸与丙 酮酸。丙酮酸与 2.4- 二硝基苯肼作用，生成二硝基苯腙，此 物在碱性溶液呈红棕色，与经同样处理的标准丙酮酸比色， 求得丙酮酸的生成量以表示酶的活性。
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三、实验器材 1. 剪刀 或 组织捣碎机 2. 37 ℃水浴 3. 分光光度计（ 520nm ） 4. 比色皿 5. 计算纸（ 9 cm×9 cm ）
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四. 实验试剂 1. 标准丙酮酸 现配 2. 谷丙转氨酶底物 4 ℃， 1 周 3.0.1M pH7.4 PB 4.0.02% 2,4- 二硝基苯肼溶液 5.0.4M NaOH 6. 新鲜肝脏（或取小白鼠肝脏）
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五、实验步骤 1. 肝匀浆 处理： 20g 肝先用生理盐水洗净，滤纸吸干水，再用预冷的 0.1M pH7.4 PB 捣 碎，并定容至 200ml ，供全班用 2. 谷丙转氨酶活力的测定 1 ）取 4 支试管，标注名称，按照下表操作 2 ）计算酶活力 本法规定：酶在 37 ℃ 与底物作用 30 分钟，产生 2.5μg 丙酮酸为一个谷丙转氨 酶活性单位。
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五、实验步骤 3. 计算 1 ）每 ml 肝匀浆谷丙转氨酶活力单位（ U/ml ） D = （ A—B ） × 500 S ×2.5 2 ）每 g 肝脏谷丙转氨酶活力单位（ U/g ） D’ = D × 200 / 20 说明： A ：样品 A 520nm B ：对照 A 520nm S ：标准 A 520nm 500 ：标准丙酮酸浓度 2.5 ：谷丙转氨酶换算单位 200 ： 200ml 肝匀浆 20 ： 20g 肝
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五、实验步骤
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六. 附注 2.4- 二硝基苯肼与丙酮酸的颜色反并不是特异性的， α- 酮戌二酸也能与 2.4- 二硝基苯肼作用而显色。 2.4- 二硝基苯肼身也有类似的颜色，因此空白管颜色较 深。
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