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琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制 目的与要求: 了解琥珀酸脱氢酶的作用及酶促反应 中的竞争性抑制作用 了解琥珀酸脱氢酶的作用及酶促反应 中的竞争性抑制作用.

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1 琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制 目的与要求: 了解琥珀酸脱氢酶的作用及酶促反应 中的竞争性抑制作用 了解琥珀酸脱氢酶的作用及酶促反应 中的竞争性抑制作用

2 实验原理:  肌肉组织中含有琥珀酸脱氢酶,能催化琥珀酸脱氢转变为延胡 索酸(三羧酸循环,线粒体)。反应中生成的 FADH 2 可使甲烯蓝 还原为甲烯白。  丙二酸是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂,与琥珀酸的分子结构 相似,与酶的亲合力高。丙二酸与酶结合后,酶活性受到抑制, 则不能催化琥珀酸的脱氢反应。  本实验以甲烯蓝为受氢体,在隔离空气条件下,以甲烯蓝褪色 程度来观察、判断丙二酸对琥珀酸脱氢酶活性的抑制作用。

3 操作步骤:  酶提取液的制备  酶促反应管的制备  37 ℃酶促反应,观察甲烯蓝褪色程度

4 实验结果: 间隔 10 分钟,记录各管甲烯蓝褪色程度,解释结果。注意事项:  充分碾磨家兔肌肉,碾磨器械、纱布要及时清洗。  滴加液体石蜡时,倾斜试管,避免产生气泡。  观察结果时不能振摇试管,避免甲烯白重新氧化变蓝。

5 改良 Mohum 法测定谷 - 丙转氨酶活性 目的与要求: 了解 Mohum 法测定谷 - 丙转氨酶活性的原理及测定方法

6 实验原理:  利用丙氨酸和 α- 酮戊二酸为底物,在转氨酶作用下生成 丙酮酸和谷氨酸,再利用 2, 4- 二硝基苯肼与丙酮酸反应,生 成棕色的丙酮酸二硝基苯肼,在 520nm 波长测定其光密度, 与经同样处理标准丙酮酸溶液比较,即可计算谷 - 丙转氨酶的 活性。  血清谷 - 丙转氨酶活性单位定义:每毫升血清在 pH 值 7.4 , 37 ℃保温条件下与底物作用 30min 后,每生成 2.5ug 的丙酮 酸为 1 谷 - 丙转氨酶单位,正常值为 2-40 单位 /ml 。

7 实验步骤: 见书 Page 77 酶活性测定表格。实验结果: 谷丙转氨酶活性单位 =A 测定管 /A 标准管 * 标准管中丙酮 酸含量 *10/2.5 。

8 注意事项:  保温温度和时间要精确,即谷丙转氨酶发 挥催化作用环境。  酶活性单位。  微量移液器的使用。


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