等温滴定量热法(ITC) 美国通用电气公司 英国马尔文公司 报告人：宾艳南（安徽大学健康院）.

Presentation on theme: "等温滴定量热法(ITC) 美国通用电气公司 英国马尔文公司 报告人：宾艳南（安徽大学健康院）."— Presentation transcript:

1 等温滴定量热法(ITC) 美国通用电气公司 英国马尔文公司 报告人：宾艳南（安徽大学健康院）

2 等温滴定量热法(Isothermal Titration Calorimetry，简称ITC)
什么是等温滴定量热法？ 等温滴定量热法(Isothermal Titration Calorimetry，简称ITC) 定义： 将反应物逐次滴定到含有反应所必须的另一反应物的样品溶液中，ITC测量每次滴定后反应所放出或吸收的热量的一门技术。 等温滴定量热法所测得的 曲线称为ITC曲线 横坐标：时间t，单位为s 纵坐标：热量Q， 单位通常为μcal/s Q=f（t）

3 ITC重要概念 重要概念 滴定溶液(injectant)：反应所需的一种反应物 样品溶液(sample)：反应所需的另一种反应物
反应过程的热量的检测： 通过测量使样品池和 参比物池达到等温状 态(ΔT~0)所需的功率 变化来实现。

4 ITC的工作原理

5

6

7 ITC检测实验 “配体”放在进样针中，“大分子”放于样品池，测量反应热 引起结合反应的可能作用包括： 范德华作用 疏水作用 氢键 ……
亲和常数(KD) 反应引起的焓变(ΔH) 结合位点的数目(N) 反应引起的熵变(ΔS)

8 进行ITC实验

9 进行ITC实验

10 进行ITC实验

11 进行ITC实验

12 进行ITC实验

13 进行ITC实验

14 进行ITC实验

15 进行ITC实验

16 ITC实验解析 反应完成前：每次滴加会产生一个ITC峰；随着反应进行，被测分子逐步被配体饱和，ITC峰减小。
逐次，等量滴加 通过将原始ITC曲线积分，可计算： 解离常数(KD) 反应的化学计量比(N) 反应焓变(ΔH) 反应吉布斯自由能(ΔG) 反应熵变(ΔS)

17 ITC实验解析 通过将原始ITC曲线积分，可计算： 解离常数(KD) 反应的化学计量比(N) 反应焓变(ΔH) 反应吉布斯自由能(ΔG)
反应熵变(ΔS)

18 ITC实验解析 Wiseman c-parameter 解离常数与ITC实验设计的关系

19 ITC的应用范围

20 ITC实验解析：结合机制的探索 疏水作用 氢键和范德华力

21 ITC实验举例 促凋亡多肽BAD-like比BAX强接近6倍。

22 ITC实验举例

23 ITC实验举例

24 ITC实验举例

25 ITC实验举例

26 The End！