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分子生物学部分开发实验 植物遗传亲缘关系研究
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实验目的 运用PCR-RAPD 分子标记技术，对不同种植物的基因组DNA进行PCR扩增，获得指纹图谱。同时运用统计分析方法，计算不同物种的遗传距离，得出物种间的亲缘关系。
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实验材料 植物样品: 花椰菜1，花椰菜2，花椰菜3
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实验试剂及仪器 10×buffer: 500mM KCl 100mM Tris-HCl (pH9.0) 0.1% 明胶
0.1% 明胶 1% TritonX-100 MgCl mM ４×dNTP: mM 引物： 种RAPD引物 uM 模板： ng/μl Taq酶： u/μl PCR仪，凝胶成像系统，电泳系统
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实验方法 １．向无菌的500μl Eppendorf管中依次加入以下溶液。 反应物 体积 10×buffer 2.5μl
反应物 体积 10×buffer μl 4×dNTP(1mM) μl MgCl2 (25mM) μl 无菌水 μl Taq酶 (1U/ul) μl 引物 μl 模板DNA(20ng) μl 总体积 μl
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2．反应体系混匀，离心 3．在ＰＣＲ仪上按以下方式循环 94℃变性 １分钟 36℃退火 １分钟 72℃延伸 ２分钟 经过40个循环
94℃变性 １分钟 36℃退火 １分钟 72℃延伸 ２分钟 经过40个循环 4．７２℃延伸反应7分钟。 5．取20μl反应液加4μl Loading buffer在 ％琼脂糖凝胶上120伏，电泳2小时。 7. 在凝胶成像系统上观察记录实验结
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结果分析 根据RAPD扩增结果计算: 1.遗传相似性系数 S S = 2 Nxy / (Nx + Ny)
Nxy为种间共有的扩增带，Nx为X种具有的扩增带，Ny为Y种具有的扩增带 2.遗传距离（D） D = 1 － S
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