人工甘味劑之鑑別試驗 目的 以薄層層析法(TLC)鑑別食品中是否含有非法人工甘味劑－甘精(dulcin)。

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1 人工甘味劑之鑑別試驗 目的 以薄層層析法(TLC)鑑別食品中是否含有非法人工甘味劑－甘精(dulcin)。

2 原理 常見的食品添加物之人工甘味劑有：糖精(saccharin)、甜精(sodium cylamate)和甘精等，前二者為規定內甘味劑，但甘精則為規定外之添加物。甘精為白色結晶或粉末，其甜度約為蔗糖之200~300倍，分子式為C9H12O2N2，分子量180.21，化學結構式如下：

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4 甘精難溶於冷水，熱水溶解度約2%，易溶於酒精，尤其乙醚、氯仿和乙酸乙酯。甘精具強毒性，動物試驗中發現會造成肝臟損害，故國內食品法規規定可使用之人工甘味劑並不包括甘精。
在小三通之後，大陸製蜜餞充斥於金門的食品市場，有關當局發現許多食品中含有被禁用之甘精，因為其甜度高且價格便宜，故不肖業者會偷偷使用它，消費者不可不慎，更顯出本試驗方法之重要。

5 甘精在254 nm下無螢光反應，故螢光吸收之TLC片展開後背景呈綠色螢光，而甘精則呈「灰黑色」，再利用對－二甲胺基苯甲醛呈色可呈現黃色spot。

6 材料與儀器 抽氣過濾裝置與濾紙。 活性碳（顆粒狀）。 10% HCl。 NaCl。 NaCl飽和溶液。
矽膠TLC片(10x20 cm)(F254)。 無水硫酸鈉。

7 乙酸乙酯。 甘精(dulcin)標準溶液(0.40%)：0.020 g dulcin溶於5.0 ml酒精。 展開劑為正丁醇：25%濃氨水=4：1 (v/v)。 果汁A、B、C。 UV box（254 nm波長之暗箱）。 展開槽：22x8x22 cm。

8 噴霧器。 分液漏斗(200 mL)。 毛細管／酒精燈。 發色液：稱取1 g之對－二甲胺基苯甲醛，以1N HCl定量至100 mL。 氨性乙醇溶液。

9 方法及步驟 樣品之前處理 檢液之TLC分析

10 樣品之前處理 取30 mL之果汁樣品倒入250 mL燒杯中，加入約5 g之活性碳攪拌脫色。
以抽氣過濾裝置過濾之，取濾液10 mL加入分液漏斗中，再加入10% HCl至藍色石蕊試紙變紅（呈酸性）。 加入NaCl(S)至溶液呈飽和狀態。 每次加入約10 mL乙酸乙酯萃取甘精，合併三次乙酸乙酯萃取液。

11 萃取液以5 mL飽和食鹽水洗滌2次，再加入無水硫酸鈉脫水。
以減壓濃縮機濃縮至乾。 殘渣（乾）以氨性乙醇溶液1 mL溶解作為TLC之檢液。

12 檢液之TLC分析 取20X20 cm TLC片(F254)，以鉛筆在底部3 cm處及頂端2 cm輕輕畫上一條直線（起跑線及終止線）。
在線上每隔2 cm作一“X”之記號，在相鄰“X”之中心點上以毛細管點上樣品A、B、C三種檢液，與甘精標準液，一邊點樣品，一邊以冷風吹乾（圖37-1）。 樣品點在TLC上的點“spot”愈小愈好，直徑勿超過0.3 cm。

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14 展開槽裝入正丁醇：25%濃氨水4：1之濃展開劑，高度約1.0 cm，預先飽和之。
點好樣品之TLC片輕輕置入，展開槽蓋子以凡士林密蓋之（展開期間勿搖動展開槽），此時TLC開始展開(running)。 當展開劑前緣線展至TLC片頂端終止線（約18 cm）時，打開槽蓋，小心取出TLC片，以鉛筆描出其「前緣線」。 以吹風機吹乾TLC片。

15 放入UV box中以254 nm紫外光檢視TLC片，以筆標記所有「灰黑色」斑點之輪廓。
以直尺量出溶質距離（斑點中心點至起跑點之距離，以公分為單位，記錄至小數點後第2位），記錄距離與顏色於表37-1中。 計算Rf值（小數點後第3位），與標準溶液之Rf值、顏色比較之。 噴以發色液噴霧器在抽氣櫃中對TLC片噴霧呈色，出現「黃色」斑點時可確認含有對位－乙氧苯（甘精）。

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19 結果