第十一章 胚胎移植

雄性生殖内分泌调控

雌性生殖内分泌调控1

雌性生殖内分泌调控2

发 情 周 期 在生理或非妊娠条件下，雌性动物每间隔一定时期均会出现一次发情，通常将这次发情开始至下次发情开始、或这次发情结束至下次发情结束所间隔的时期，称为发情周期。

通常根据动物的精神状态、雌性动物对雄性动物产生的性欲表现、卵巢内卵泡的生长发育、排卵和黄体形成的情况及雌性生殖道（子宫、阴道等）的生理变化等几个主要方面，将发情周期划分为： 发情前期（前情期） 发情期 发情后期（后情期） 间情期（休情期）

胚 胎 移 植 胚胎移植（embryo transfer,ET）也称受精卵移植，是指将一头良种母畜配种后的早期胚胎取出，或者由体外受精及其他方式获得的胚胎，移植到另一头同种的生理状态相同的母畜体内，继续发育成为新个体，所以又称之为人工授胎或借腹怀胎。 提供胚胎的个体称为------供体（donor） 接受胚胎的个体称为------受体（recipient）

胚 胎 移 植 的 意 义 1.发挥优良母畜的繁殖潜力，提高繁殖效率。 2.促进家畜改良的速度 3.产生双胎和使不孕母畜获得生殖能力 4.濒危动物的拯救和保护 5.研究手段

胚 胎 移 植 的 原 则 1.受体与供体在分类学上的相同属性 2.动物生理上的一致性 3.动物解剖部位的一致性 4.胚胎发育的期限 5.胚胎的质量 6.供体、受体的状况

胚胎移植原则图解

胚 胎 移 植 的 程 序 供体（优良母畜） 受体（优良母畜） 超 数 排 卵 处 理 同 期 发 情 处 理 优良种公畜 发 情、配 种 发 情、配 种 发 情 胚 胎 回 收 胚 胎 移 植 超 数 排 卵 处 理 优 良 后 代

胚胎移植图解

1.供体的超数排卵( Superovulation of Donor ) 在母畜发情周期的适当时期，用促性腺激素进行处理，诱发其卵巢上有大量卵泡同时发育并排卵，称为超数排卵，简称超排。 超排技术通常用于单胎家畜，如牛、绵羊和山羊等，其目的是让优良母畜排出大量卵子，充分发挥其繁殖潜力，因而是胚胎移植中的一个重要环节，也是首要环节。 超排方法：在发情周期的一定时期，用PMSG或FSH促进卵泡发育，于发情开始后12-16h和20-24h各配种（输精）一次，并于第一次配种后静脉注射hCG或LH，以便排出多数卵子。

天数 1 10 11 12 13 15-16 20 处理 置栓 换栓 7:00 FSH 2.5ml 19:00 1.5ml 1.5ml19:00FSH 1.0mlPG0.1mg 试配首配后LRHA3 10-20 Mg 每8小时配一次 首配后3-3.5d置栓 7:00停食腹腔镜检查 手术冲胚PG0.1mg 羊供体超排处理方案

羊的阴道栓处理

羊的阴道栓处理

羊的阴道栓处理

影响超排效果的因素 家畜本身：母畜个体差异可导致超排反应不同，这 与家畜的种类、品种、年龄、体重及营养情况都有 关系。 促性腺激素：所用激素的种类、用量和注射程序，尤 其是制品中两种促性腺激素（FSH/LH )的比例差异， 是影响胚胎数量及质量的重要因素；用量的大小则与 超排的多少直接有关，如果用量过大，往往会使卵泡 发育过多，以致发生排卵延迟或不能排卵。

用药时间：发情周期阶段、产后阶段及季节不同，超 排结果均有差别。 重复超排：一般而言，供体对前3次超排处理 的反 应相似，但有些个体对重复超排的反应不佳，可能 是由于促性腺激素产生了抗体。为了 提高重复超排 的效果，一是延长激素处理的间 隔，二是尽量采用 同种动物的促性腺激素，以减少抗体的产生。

超排效果好的卵巢黄体

超排效果不好的卵巢黄体

2.受体的同期发情( Synchroestrus of recipient ) 无论在何种家畜或任何品种，为了使胚胎移植获得成功，必须使受体母畜与供体的发情同期化，使二者的生殖器官处于相同的生理阶段。受体与供体发情开始的时间越接近，移植的受胎率越高。 这是因为妊娠初期的子宫环境在不断发生变化，而特定时间的环境只适合于发育阶段相应的胚胎生存；也可能是因为非同期胚胎不能对受体产生促黄体作用。为了获得最佳受胎效果，应将受体与供体的发情时间之差控制在24h之内。

同期发情方法:诱发同期发情的理想药物有孕激素和前列腺素PGF2α及其类似物。其剂量根据PG种类和用法不同而异。在国外，普遍采用氯前列烯醇(cloprostenol)和15甲基PGF2α 倘若在400头以上的大牛群中进行胚胎移植，因为每天都可能遇到发情母牛，就可以尽量选留自然发情的母牛作为受体，不需要进行同期发情处理。

羊受体的同期发情处理方案 天数 1 11 12 13－17 20 处理 置栓 19:00 FSH 25iu 或PMSG FSH 25iu 去栓 早晚试情，记录发情时间 7:00 停食 移胚

3.供体的配种（输精） 超排供体的配种次数，应比自然供体多一些，每次输入的精子数亦应增多。 超排供体的受精率，通常比自然供体为低，这可能是由于排卵不集中、卵母细胞有缺陷或母畜生殖道的环境不太适宜于精子的运行。

4.收集胚胎（Collection of eggs） 收集胚胎就是在配种或输精后的适当时间，从超排供体回收其胚胎，以备给受体移植，亦称胚胎回收或胚胎采集，简称采卵。采卵的效果与采集时间、方法和检卵技术均有关系。

（1）.采卵时间 一般将配种当日定为0 天，由配种后第二天开始计算采卵天数。根据采集目的不同，决定在第几天采卵。就母牛而言，一般第1-4天可以由输卵管采到16细胞以前的卵，5－8天可以由子宫采到桑植胚和囊胚。其依据是胚胎在生殖道内的发育情况及移行速度 .

（2）．采卵方法 有手术法和非手术法两种。在大家畜基本上已将手术法淘汰，但在绵羊、山羊、猪和实验动物由于受解剖特点的限制，一直采用手术方法。不管用何种方法，一般收集卵子数只能相当于黄体数的40～80％。

手术法采卵 第一种由宫管结合部冲向输卵管。本法冲卵率高，很少损害生殖道。除了猪因宫管结合部具有阀门样结构不能采用以外，各种中、小动物均可采用。 第二种方法是由输卵管伞冲向宫管结合部。本法适用于猪，是由一个插入该处的钝注射针头或光滑的细玻管收集卵子；其缺点是术后常造成宫角尖端或输卵管粘连。

第三种方法是由子宫角尖端冲向子宫角基部。本法用于发情5天以后收集子宫内的卵，其收集数量比A, B法略少，易引起子宫粘连。 冲卵液为杜氏PBS,用量:第一、第二两种方法用5-l0ml，第三种方法用10-20ml。

羊的手术法采卵

羊的手术法采卵

手术操作现场

非手术法采卵 Sμgie创造了一种带有气球的非手术采卵器，可由牛的子宫角采卵，显著提高了采卵率。Folley和Stewart又相继改进，设计出三通路（进气、进液、回液）导管采卵器（附图4），使用更加方便有效，能够从同一供体反复收集卵子。 冲卵液的用量一般为500 ml，装入输液瓶内，每次放出30-60m1，反复冲洗子宫角，并回收到集卵杯内。冲完一个子宫角后，再用同法冲洗另一子宫角。

5.检卵（Egg picking） 将冲卵液回收之后，尽快置于放大10-15倍的实体显微镜下，检查收集到的卵数，并用一细吸管将卵移至新鲜培养液内，在放大40-200倍的复式显微镜下，进行形态学观察，选出适合于移植的正常卵（附图5）。形态不正常者（附图6）及发育延迟2天以上的卵，都不可用于移植。

检胚

显微镜下的胚胎

6.移植胚胎（Egg transplantation） 移植胚胎就是将采取的可用卵移给受体母畜，亦称卵的移植，简称移卵。 移卵方法：与采卵方法相似，也分为手术法与非手术法两种，前者适用于不能进行直肠操作的中小动物，后者适用于大家畜。

手术法移卵 方法与采卵一样，先暴露输卵管及子宫角，再将卵注入输卵管或子宫角。当移入输卵管时，将毛细移卵管的尖端通过输卵管伞插到壶腹部，注入含有胚胎的培养液1～2滴；若移入子宫角，可先用钝针头刺破子宫角壁，然后将毛细管从针孔插入子宫腔，注入含胚胎的培养液

羊的手术法移卵

非手术法移卵 自从1982年以来，非手术法已被某些胚移中心用于商业性移植，但将胚胎送到子宫角内需要有一定经验。为了提高成功率，Elsden（1982）将其总结为四步。 ①将胚胎吸入0.25ml细管中，位于两个气泡之间。 ②将细管装入卡苏枪，枪外由一塑料套保护。 ③将受体保定好，进行硬膜外麻醉，由直肠触摸黄体位于何侧。 ④将胚胎送到黄体同侧的子宫角中部。