临床基因扩增检验实验室的设置及质量管理体系的建立 山东省临床检验中心 张炳昌

一.临床基因扩增检验实验室的设置 依据：卫生部颁发的《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》（卫医发[2002]10号）

临床标本的接收 通常的工作流程：标本采集 血清分离 应在四个测定区域之外的地方或区域内接收 接收的标本应收集在原始容器中 通常的工作流程：标本采集 血清分离 编号 保存或检测 应在四个测定区域之外的地方或区域内接收 接收的标本应收集在原始容器中 在核酸提取时带入至标本制备区

什么样的临床基因扩增检验实验室是最标准的？

理想的PCR实验室设置1

理想的PCR实验室设置2

临床基因扩增实验室设置的一般原则 各区独立 注意风向 人员流向 物品流向

二.实验室质量管理体系的建立 质量手册 质量体系程序文件 标准操作程序 (相关记录表格)

质量管理体系的建立 质量手册 程序文件 标准操作程序（SOP） 教材第55页和第57页分别讲述《有关临床基因扩增检验实验室技术验收有关问题的解释》和《临床基因扩增实验室如何准备技术验收》，我们把这两节内容结合起来，和大家一起讨论。 前面讨论的是一个临床基因扩增实验室硬件的建设，硬件建设要容易多，有资金，有空间，按照标准设置就额可以了。其实最重要是临床基因扩增检验实验室软件的建设。即质量管理体系的建立。 《临床基因扩增检验实验室管理暂行办法》是国家第一次对一个专业项目的实验室出台相关的法规。 卫生部医政司于1988年下发了卫医发[1998]9号文件宣布PCR技术暂停应用于临床诊断。经过近四年反复论证，卫生部2002年1月14日发布“临床基因扩增检验实验室管理暂行办法”，同年2月20日卫生部临床检验中心发布“临床基因扩增实验室工作规范”。两个文件宣布了PCR技术临床应用解冻，明确规定临床基因扩增检验实验室开展PCR技术必需具备的基本条件：①规范的PCR实验室②编写适合本实验室的质量手册③经PCR专业知识培训的技术人员（PCR上岗证）④使用有生产批文的PCR试剂。具备条件的二级以上医院可向卫生部或省临床检验中心申请技术验收。 《医疗机构临床实验室管理办法》第十一条  医疗机构临床实验室应当建立健全并严格执行各项规章制度，严格遵守相关技术规范和标准，保证临床检验质量。 第十二条  医疗机构临床实验室专业技术人员应当具有相应的专业学历，并取得相应专业技术职务任职资格。 二级以上医疗机构临床实验室负责人应当经过省级以上卫生行政部门组织的相关培训。 质量体系的三部分内容相互联系，各有侧重。

质量手册 定义：阐明一个实验室的质量方针，并描述其质量体系的文件。 其主要内容包括目录、批准页、前言、质量方针、组织结构、人员职责、实验室设施环境、仪器设备、溯源性、检验方法、标本管理、记录、报告等，是对上述各方面质量管理的一般性描述。 质量方针和宗旨     制定临床基因扩增检验实验室的质量管理目标和质量保证体系的结构体系和总方针。 1.临床基因扩增检验实验室的质量手册编写     质量手册是阐明临床基因扩增检验实验室的质量方针，并描述过其质量体系的文件。质量手册规定了质量体系的基本结构，是实施和保持质量体系应长期遵循的文件。临床基因扩增检验实验室质量手册编写应依照卫生部下发两个文件，并结合本实验室实际情况编写适合本实验室的切实可行的质量手册。质量手册的提纲应包括三部分：质量方针和宗旨；工作制度；标准操作文件（SOP）

程序文件 程序文件则是对通用于整个实验室的某些方面工作的文件化描述。 主要包括实验室文件和档案等的管理、内审、管理评审、人员培训、投诉处理、保密、计算机安全、新项目开展、量值溯源、试剂仪器及实验用品的购买、标本管理、废物处理等方面。 （2）工作制度     一般应包括以下文件：实验室的设置、布局及组织结构；实验室内务管理制度；实验室的人员配置及管理制度；生物的防护与安全制度；实验室废弃物处理制度；实验室清洁消毒制度；仪器设备的管理制度；仪器、试剂、耗材购置程序及管理制度；临床标本的管理制度；实验室记录的管理制度；质量控制工作管理制度；结果报告管理制度；抱怨的内部处理制度；负责人及质检员职责；岗位设置和责任制等……

标准操作程序 SOP最为具体，最具有可操作性，也是使用频率最高的文件，与实验室的日常工作密切相关。常用SOP文件：仪器设备SOP文件，试验项目操作SOP文件，质量、管理SOP文件等。如某个具体的项目临床标本的收集、处理、保存、检测等，具体仪器的操作使用、校准及维护等。 SOP文件与程序文件之间的区别在于后者的原则性要强一些，针对的是一个系列或一个方面的工作。 （3）标准操作程序（SOP）     一般包括：消毒液配制标准操作程序：消毒标准操作程序；超净工作台使用标准操作程序；超净工作台维护和保养标准操作文件；PCR仪使用标准操作程序；PCR仪维护和保养标准操作程序；高速低温离心机使用标准操作程序；移液器使用标准操作程序；冰箱维护和保养标准操作程序；电热恒温水浴箱操作程序；电子天平使用和校正操作程序；可移动紫外消毒车使用操作程序；加样器校准标准操作程序；离心机维护保养操作程序；温度计校准程序；试剂的质检操作程序；标本唯一标识编号编制规则；临床标本的采集及处理操作程序；临床标本的保存程序；乙肝病毒核酸扩增荧光检测标准操作程序；丙肝病毒核酸扩增荧光检测标准操作程序；结核分枝杆菌核酸扩增荧光检测标准操作程序；沙眼衣原体核酸扩增荧光检测标准操作程序等……

临床基因扩增检验实验室的技术验收文件要求 临床基因扩增检验实验室的技术验收申请表后提出来的实验室所必须具有的程序文件，大部分是SOP ，少部分是程序文件，对实验室的质量手册没作要求。

怎样来编写SOP 文件 这一点目前大部分实验室都觉得不知从何写起，希望有一个标准模式。其实细细思考一下，你某一项检验应该怎样做才能保证质量，然后就将这些过程写下来就可以了。其实这些SOP 文件究竟采用何种格式编写并不重要，关键的是要具体，要具有可操作性，要让既使是第一次接触该SOP 的人也能按其完成相关操作。一定要有这样一种观念，即SOP 文件不是拿来给别人看的，而是拿来给自己实验室技术人员用的，一定要从实际出发，做得到的才写进去，做不到的就不要写进去。

质量管理 质量管理不是表面文章，其精髓就是所有与实验室检验质量有关的环节全部要有章可循，并按章进行。这即是对实验室实际操作技术人员的约束，同时也是对实验室负责人的约束，不能随心所欲，比如说仪器、试剂、消耗品的购买，都必须按程序进行。这是与我们传统的平常只查考勤、查卫生等到出现问题时再处罚个人的经验管理模式所完全不同的，这个观念和意识的转变首先应是实验室负责人，然后才是具体的实验操作人员。

临床PCR 实验室质量管理的特点 （一）“无基因”概念 （二）实验室要有严格的人员进入限制和程序 （三）使用合格的试剂和消耗品

临床基因扩增检验实验室相关记录 临床基因扩增检验实验室需要记录的有临床标本接收中的患者个人有关资料（如姓名、性别、年龄等）、标本接收日期、标本特性、标本的状态、标本的编号等；检测前的仪器设备和试剂的准备等；检测中的试剂生产厂家、试剂批号、检测日期、检测结果、质控结果及分析、检测人（签字）、质检人（签字）等、检测后的实验台面、仪器设备等的消毒和清洁、紫外线照射等。记录要持之以恒。

质量管理的内涵 写你所做的 做你所写的 记录你已做的 分析你已做的 质量持续改进

怎样编写SOP？

1.检验项目SOP 应根据申华人民共和国卫生行业标准 编号WS/T 227-2002 “临床检验操作规程编写要求”编写项目的SOP文件 原则上，每一收费的检验项目都应有与之相应的SOP文件，尽管某些项目SOP文件可以简单一些

3 操作性能的概要。如：精密度、病人结果可报告范围、方法学比较等。 4 对检验结果为病危报警值的处理 编写中应特别注意，要书写： 1 拒收标本的规定 2 质控品使用水平和频率，允许限的纠正措施 3 操作性能的概要。如：精密度、病人结果可报告范围、方法学比较等。 4 对检验结果为病危报警值的处理

手册必须由主任批准，签字和注明日期。 如果实验室改变领导，手册须由现领导再批准，签字和注明日期。

实验室必须保存停止使用的操作手册副本，并保存到停止使用两年后才能销毁。

2.仪器设备的维护和校准SOP 责任人 维护和校准的基本方面：光路、滤光片、波长、加热模块的清洁、具体的校准点选择（如加样器的校准体积点选择、温度计的校准温度点选择等）、维护和校准的具体方法包括用具 校准合格的判断标准 维护和校准的间隔时间

仪器设备的操作 SOP 按照每台仪器设备的使用说明书，将其详细操作步骤包括开机关机次序、编程、调试、运行、计算等按实际使用中的先后顺序逐项列出，最后还应有使用的注意事项。

仪器SOP文件 应根据厂家提供的操作说明书编写适合实验室实际简明扼要操作程序，大致有： 开关机程序. 常规操作程序 特殊(急诊、复测、…)操作程序 仪器维护程序 其它

仪器每日保养记录表

月保养记录表

项目校准程序和计划 校准对于检验结果在规定的报告范围内的准确和可靠是必要的。 校准是一个测试和调整仪器或者检验系统，试剂盒的过程，以提供检验反应和所测物质之间的准确关系。 用配套校准品进行校准是量值溯源开始，厂家应保证校准品的最终溯源

校准计划 校准计划是指检验项目的校准频度。 每次校准数据记录表 对校准数据变化的评估 根据美国CLIA 88规定、还要对校准结果进行验证（Verification）。用一己知浓度样品，稀释成不同浓度，检测后观察所测浓度是否准确，是否成线性。

仪器校准记录表

仪器校准记录表（2）

仪器工作的最基本的环境条件 保证仪器能准确进行工作的最基本的环境、客观条件。如：温度、湿度、UPS、光照度等。

实验室SOP要点

1.SOP文件基本格式

2.实验室清洁SOP要点 目的:为了使实验室台面、地面和仪器设备在实用后，处于洁净和无污染性状态，以防止出现因仪器设备不洁影响检测结果或仪器使用寿命；防止因实验室台面、地面和仪器设备的生物传染危险性造成实验室人员感染，以及防止实验室交叉污染而出现假阳性结果等。 适用范围应包括实验室地面、台面和仪器设备等的清洁。 按实验室台面、地面和仪器设备分开来写各自的具体清洁方法，要具体而又有可操作性 应规定工作人员在清洁时，必须按试剂准备区标本制备区扩增(及产物分析)区方向进行，不得逆行 规定每一工作区域的清洁必须使用专用的清洁用具，不得混用 规定有潜在生物传染危险性材料溅出时的消毒清洁方法

3.生物安全防护SOP要点 明确规定实验室工作人员在进行哪一类接触到有潜在生物传染危险性的物品和材料时，应使用哪类个体生物安全防护设备和用具 制定实验室内锐器物品的使用规则 制定发生意外如手指划破、血清溅入眼内等情况下的处理程序 明确有潜在生物传染危险性的废弃物（包括废弃临床标本）拿出实验室前的消毒方法如高压或化学消毒

4.临床标本的采集、运送、接收和保存 SOP要点 特定标本采集的具体方法步骤 明确规定标本的采集容器要求 明确标本的采集量 明确标本采集后送到实验室检测所能容许的最大时间间隔，亦即标本采集后，应在多长时间内送至实验室 明确标本采集后，在送至实验室检测前的保存方式和条件 明确标本从采集处运送至实验室过程中所要求的运送条件 明确标本接收时，签收的程序、拒收的标准和标本唯一编号的规则 规定标本在实验室内的短期（应有具体时间）和长期（应有具体时间）保存条件和要求 制定保证标本安全存放措施,即如何防止标本丢失、掉换、变质的措施

5.试剂和消耗品的质检 SOP 试剂质检的基本方面，如试剂的抗干扰能力（主要是针对提取试剂），即对溶血、脂血标本扩增抑制作用的了解。可通过自行制备含已知量病毒核酸的不同程度溶血或脂血的标本进行质检。如为定量检测试剂，还应包括检测的重复性、线性范围等的质检，通常使用2-3份样本进行检测即可。如为定性检测试剂，则应重点考察测定下限，可用系列稀释的含已知量靶核酸的血清标本进行 核酸提取用离心管质检的基本方面 带滤心吸头的质检主要是滤心的密封性

6.项目检测、结果判断、解释和报告 SOP 标本进入实验程序后的操作编号方式 根据所用试剂盒确定的详细操作流程 仪器编程及文件名的编写规则 结果判读的流程和规则 结果分析解释的流程 结果报告流程

7.实验记录及其管理 SOP 日常检验过程中应记录的基本内容的规定，如仪器设备操作、维护和校准过程及有关数据；检验试剂来源和批号；检验标本的来源和唯一编号；试剂的配制；实验环境条件的控制记录；实验室清洁的记录；质控的记录；原始检测数据及其推导记录等 对实验记录者的签名方式的规定和要求 实验记录管理的基本方面：指定专门的管理人；有专门的保存处如柜子等；记录的登记归档方法；记录的借阅及销毁记录；记录保存的时间；电子记录的备份保存具体方法及保存时间等

8.室内质量控制 SOP 明确室内质控物的来源及浓度 明确所选用的质控方法 明确失控的判断标准或所采用的失控规则 明确失控后的分析及处理措施

9.参加室间质量评价 SOP 明确规定室间质评样本的接收记录方式、保存条件及实验编号规则 明确室间质评样本的检测流程，要强调的是，室间质评样本应以与临床标本相同的方式处理和检测 明确室间质评样本的报告流程，即填写、复核和签发如何进行，由谁负责 明确对返回结果的分析流程和责任人 明确室间质评检测失败的原因分析流程 明确如果测定准确性出现问题后，如何针对性采取措施的流程

10.投诉处理 SOP 明确投拆第一接触人对投拆的处理流程，即如何记录、如何针对相关投诉的进一步处理程序、是否需要报告和如何报告、以及如何向投拆人返回处理意见等。可将投拆分为不同类如对检验结果正确性、服务态度、报告单填写错误等分别编写处理流程 投拆有效时的如何改进和采取何种措施的具体流程。应非常具体并具有可操作性

临床PCR检验流程记录表

临床PCR检验流程记录表 使用说明： 1．本记录表须严格遵循试剂准备区标本制备区扩增区（产物分析区）单一流向移动，严禁逆向移动。 检验日期 检验项目： 扩增仪中保存文件名： 使用说明： 1．本记录表须严格遵循试剂准备区标本制备区扩增区（产物分析区）单一流向移动，严禁逆向移动。 2．各项工作执行后，在相应叙述前的“”内打“”。 3．本记录表最后与相应的标本接收记录等归档保存于扩增区的专用文件柜内，以备查找。 实验前准备  试剂在有效期内  扩增仪、加样器和温度计在校准的有效期内  生物安全柜的滤膜在使用有效期内  消毒溶液在有效期内  冲眼器内无菌生理盐水在有效期内  离心管、带滤心吸头已经过质检合 操作者：

试剂准备区（1区） 实验前 ：  打开通风设备  实验台面清洁（水或70%酒精擦拭） 实验前 ：  打开通风设备  实验台面清洁（水或70%酒精擦拭）  冰箱温度：冷藏室（2~8℃） ℃； 冷冻室（20℃1℃） ℃  实验室温度： ℃（允许范围：10~30℃）；相对湿度： （允许范围：30%~70%） PCR试剂来源： （可直接列出有关厂家名称） 批号： 检验项目： 本次实验用量： 人份，剩余量： 人份。 其他有关试剂配制：  按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制1%含氯消毒液 毫升；  按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制4％NaOH溶液 毫升；  按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制0.1%焦磷酸二乙酯 毫升；  按XXX（将有关SOP编号列出）SOP配制 毫升；  其他： 仪器设备使用： 离心机： 正常  不正常 振荡器： 正常  不正常 实验后： 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP清洁实验室台面、地面、加样器和离心机，并进行紫外照射30分钟以上。  按XXX（将有关SOP编号列出）SOP处理实验废弃物。 操作者：

标本制备区（2区） 实验前：  打开通风设备  实验台面清洁（水或70%酒精擦拭）  冰箱（柜）温度：冷藏室（2~8℃） ℃； 冷冻室（20℃1℃） ℃  实验室温度： ℃（允许范围：10~30℃）；相对湿度： （允许范围：30%~70%） 阳性室内质控物来源： 浓度及批号： 扩增位置： 阴性室内质控物来源： 批号： 扩增位置： 所取理的标本（对应标本接收的唯一编号）及拟扩增位置： 1 9 17 25 2 10 18 26 3 11 19 27 4 12 20 28 5 13 21 29 6 14 22 30 7 15 23 31 8 16 24 32 核酸提取及加样过程：按XXX（列出编号）SOP进行。 仪器设备使用： 生物安全柜： 正常  不正常 恒温仪温度校准： ℃ 离心机： 正常  不正常 振荡器： 正常  不正常 实验后： 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP清洁实验室台面、地面及仪器设备。  按XXX（将有关SOP编号列出）SOP处理实验废弃物。 操作者：

实验前  打开通风设备  实验台面清洁（水或70%酒精擦拭） 扩增及产物分析区（3区） 实验前  打开通风设备  实验台面清洁（水或70%酒精擦拭）  实验室温度： ℃（允许范围：10~30℃）；相对湿度： （允许范围：30%~70%） 扩增仪操作： 开机自检及运行正常  按XXX（列出编号）SOP进行编程、参数设定 标准曲线计算值：Slope值： （ ）Intercept值： （ ） r值： （ ） 室内质控结果：结果： □填写室内质控记录、描质控图 是否失控：□否 □是 实验结果：见所附扩增仪打印结果 实验后： 按XXX（将有关SOP编号列出）SOP清洁实验室台面、地面及仪器设备。  按XXX（将有关SOP编号列出）SOP处理实验废弃物。 操作者： 失控原因及分析：（失控判断标准及原因分析按XXXSOP进行）

相关要点举例

1.实验室设施、仪器设备及管理 临床基因扩增检验实验室应有充分合理的空间、良好的照明和空调设备 ； 实验室仪器设备应保养良好，实验用品要达到相应的要求。加样器的校准？带滤塞吸头的使用及质检？离心机？热循环仪？水浴箱和/或恒温干浴仪？酶标仪和洗板机？

2.基因扩增仪器设备的质控

3.带滤塞吸头的使用及质检 首先制备一个含1～2%甘油及色素（如甲基橙）的水溶液，如果吸头的最大体积为100μl，则将加样器吸取体积调至110～120μl，再套上吸头后吸取上述有色液体。如果吸头质量好，则有色液体不应出现在滤塞之上，否则说明滤塞不严。

3.带滤塞吸头的使用及质检 用实验来检验带滤塞吸头的质量：先纯化制备数份强阳性和数份阴性核酸标本，然后将加样器吸取量设至扩增加样所需的体积，使用待评价带滤塞吸头对一份强阳性样本来回吸取10次（模拟10份阳性样本的吸取），将最后一次的吸取液加至一含扩增反应液的管中。之后，换一个新吸头，连续吸取10份阴性样本分别至10个扩增反应管中，此过程重复3～5次，最后对每一管按所用试剂方法进行扩增检测。强阳性样本应为强阳性，阳性弱或出现阴性则说明吸头可能含有扩增抑制物。所有阴性样本应为阴性，出现阳性则表明吸头不能有效地防止气溶胶对加样器的污染。

4.扩增仪孔间温度的重复性和均一性的检测方法 一是使用一种热电偶探针、微伏转换器和自动图示记录仪组成扩增加热模块孔内温度监测记录系统，当孔间温度变异超出1℃时，其可测出来。 具体做法是将装有TE缓冲液并上加石蜡油的扩增反应管放置于扩增仪各孔中，热电偶探针透过扩增反应管盖插至缓冲液中，然后按程序进行一个常规的PCR扩增，加热模块如为96孔，则至少要测定12孔不同位置孔内的温度，在整个扩增过程中，可移动热电偶探针至上述不同孔中监测温度，但每一孔内温度监测至少要有一个扩增周期。

扩增仪孔间温度的重复性和均一性的检测方法 第二种方法并非直接测定孔内温度，而是通过扩增功能来间接获知孔间的均一性，即将加有一已知的含一定浓度的阳性质控样本的扩增反应管置于扩增仪各孔中按常规进行扩增检测，观察结果的一致性程度，如果有某一个或几个孔结果有问题，则应确定这一个或几个孔是否会重复性地得到假阴性结果，如果是，则表明相应孔的热传导有损坏。

5.理想的试剂和操作方法 改善测定精密度的措施必须首先着重在最不精密的步骤上，应对试剂准备、标本收集、核酸提取、测定方法和仪器操作写出“标准操作程序”(SOP) ，并严格按其操作。

试剂准备区：试剂质检报告 (1) 试剂名称 产地 批号 有效期 规格 数量 1 收到试剂后，目测试剂是否处于冻存状态： 是 □ 否 □ 试剂名称 产地 批号 有效期 规格 数量 1 收到试剂后，目测试剂是否处于冻存状态： 是 □ 否 □ 2 核对试剂的品种和数量： 无误 □ 有误 □ 3 核对完后及时转入-18℃的冰箱保存： 是□ 否 □ 4 在上批试剂存量尚可维持一周时对新批号试剂进行较验实验：是 □ 否□ 5 校验实验设置：空白对照，阴性对照，阳性对照各一，梯度阳性标准品4个，再加一质控血清 新旧试剂的对比实验（各做5个管的室内控制品）

试剂准备区：试剂质检报告(2) 6 校验实验结果：A 空白对照有无扩增 有 □ 无 □ B 阳性对照有无检出 有 □ 无 □ C 阴性对照有无扩增 有 □ 无 □ D 相关性大于 0.98 是 □ 否 □ E 斜率在 -3.6—4.4之间 是 □ 否 □ F 截距在30- 54之间 是 □ 否 □ J 新旧试剂对比实验结果 旧试剂值 新试剂值 用t检验 t = 批间有无差异： 有 □ 无 □ 7 最终判断试剂是否合格： 合格 □ 不合格 □ 质检结论：本批次试剂： 符合质检要求□ 不符合质检要求□ 可以使用 □ 不可以使用 □ 验收时间 验收人 主任审阅核

试剂准备区：实验耗材质检报告(1) 耗材名称 产地 批号 有效期 规格 数量 1 收到耗材后，外包装检查： a 包装完好无损： 是□ 否□ 耗材名称 产地 批号 有效期 规格 数量 1 收到耗材后，外包装检查： a 包装完好无损： 是□ 否□ b 产品标识，批准文号，生产日期有效期清楚： 是□ 否□ 2 内包装检查： a 内包装是否有破损，泄漏： 是□ 否□ b 内容物是否齐全（型号、数量、使用说明书等） 是□ 否□

试剂准备区：实验耗材质检报告(2) 3 性能检查： 3 性能检查： A. 离心管的核酸抑制物检测，方法：分别取5个新批次的离心管和旧批次的离心管做室内质控物的检测，同时做各做一个阴性对照。 B.Tip头的核酸抑制物的检测，方法：分别取5个新批次Tip头和旧批次Tip头做室内质控物的检测，同时做各做一个阴性对照。 C. 新旧批次对比实验结果 旧批次值 新批次值 用t检验 t = 批间有无差异： 有 □ 无 □ 7 最终判断试剂是否合格： 合格 □ 不合格 □ 质检结论：本批次试剂： 符合质检要求□ 不符合质检要求□ 可以使用 □ 不可以使用 □ 验收时间 验收人 主任审阅核

人员培训 临床基因扩增检验的操作主要是标本处理中的核酸提取步骤，这其中所涉及的又主要是加样器的使用，尽管操作简单，但由于均为微量操作，要获得稳定可靠的测定结果，操作人员需要一定的专业技术知识和经验，要尽可能做到知其然又知其所以然。

实验室的日常工作管理 工 作 项 目 核 查 点 水浴箱、微量恒温器（加热模块） □校准及记录温度 次氯酸钠溶液 □新鲜配制 工 作 项 目 核 查 点 水浴箱、微量恒温器（加热模块） □校准及记录温度 次氯酸钠溶液 □新鲜配制 生物安全柜 □先起动运行30分钟后再开始工作 室内质控 弱阳性质控（定性） □有 低、中、高浓度质控（定量） □有 阴性质控：原样本 □有 经历提取过程的空管 □有 仅含扩增反应混合液管 □有 实验台面 □使用后用次氯酸钠溶液消毒， 再用70%乙醇清洁 □紫外照射 加样器、离心机 □使用后用次氯酸钠溶液消毒， 实验室各区 □遵循单一工作流向

分析你已做的 每次实验结果的分析 表象与真象 多次实验结果的综合分析 趋势的内在含义 仪器设备的使用情况分析 维护与校准周期的有效性

三.技术验收 依据： 《临床检验扩增检验实验室管理暂行办法》 卫医发[2002]10号 《临床检验扩增检验实验室管理暂行办法》 卫医发[2002]10号 《临床基因扩增检验实验室工作规范》 卫检字2002第8号

技术验收内容 实验室设置和设备 设施和环境 人员 设备管理 检测方法 标本管理 记录 报告 质量控制 抱怨 等十章共三十八条

实验室设置和设备 本章共七条。 实验室分区：规范化分区、明确的识别标记 防污染：空气流向、中央空调、各区间的封闭性 各区仪器设备物品配备：充分性、科学性、专用性（标识） “生物安全柜” “可移动紫外灯” “加样器”

设施和环境 本章包括五条； 实验室设施、工作区域、能源、照明等； 环境和实验条件控制设施：温湿度计、不间断或稳压电源等； 实验室进出的限制和控制：人员进入控制标识、生物传染危险性标识 实验室“内务管理”（如人员流动、清洁等）制度和相应设施； 废弃血清处理、生物防护等措施和相应设施

设施和环境需注意的问题 清洁程序或制度 清洁用具的专用、清洁工作的单一流向、清洁方法的具体性 生物防护及废弃血清处理 对工作人员的保护和对环境的保护 锐器使用规则 生物传染危险性废弃物出实验室前预处理

人 员 本章包括三条。 人员数量足够；有培训上岗证 培训计划：室内的定期培训（记录） 人员技术（资格、培训、技能）档案。

设备管理（1） 本章包括三条。 主要仪器设备应得到正确维护，应有设备维护程序文件；以及维护的记录 加样器、温度计、扩增仪和酶标仪等设备应有校准程序文件、有明显标识表明其校准状态（此次校准时间及下次应校准时间）； 实验室应保存每一台仪器设备的档案材料，对档案材料的具体内容作了详细规定。

设备和质控物（2） 每一台设备的档案内容包括： （a）设备名称；（b）制造商名称、型号、序号等；（c）接收日期和启用日期；（d）目前放置地点；（e）接收时的状态；（f）仪器使用说明书有复印件；（g）校准和/或检定的日期和结果及下次校准和/或检定的日期；（h）迄今所进行的维护和今后维护计划的细节；（i）损坏、故障、改装或修理的历史。

检 测 方 法 本章包括三条。 标准操作程序（SOP）：仪器设备操作和校准程序；标本收集处理程序；扩增检测工作程序；仪器试剂的选购和质检程序；消耗性材料的购买、验收、质检和贮存程序。 SOP应现行有效及便于使用。

标 本 管 理 本章包括五条。 建立唯一编号识别系统，避免标本混淆； 标本采集、运送和保存程序； 标本接收时的状态记录； 标本的适用性和充分性； 标本贮存的标准操作程序及贮存温度控制措施; 标本接收及安全处置程序； 维护实验室诚实性的必要措施。

记 录 本章包括三条。 有记录管理制度：适合自身实际情况，符合现行规章制度；（由谁管、在何处管、保存多长时间） 记 录 本章包括三条。 有记录管理制度：适合自身实际情况，符合现行规章制度；（由谁管、在何处管、保存多长时间） 原始记录、计算和导出数据应归档并保存； 记录应有有关人员的签字； 所有记录和报告都要妥善保管并保密。

报 告 检测结果的报告应准确、清晰和客观； 定性测定报告“阴性”或“阳性”；定量测定则以拷贝数/ml或IU/ ml报告；避免二者之间的混淆； 报 告 检测结果的报告应准确、清晰和客观； 定性测定报告“阴性”或“阳性”；定量测定则以拷贝数/ml或IU/ ml报告；避免二者之间的混淆； 每份报告应包括以下信息：标题、唯一标识、检测标本说明、标本特性和状态、标本接收日期和检测日期、检测方法、检测和校核人员签字及发出日期、参考结果或范围； 如对报告有效性有疑问，实验室应立即通知临床相关科室予以改正的程序； 有报告的发放程序：用电话、传真、电子邮件报告结果时的保密原则。

质 量 控 制 实验室应有室内质量控制标准操作程序 质控物来源、浓度、批号 阴性质控的设置 所选择的统计质控方法（均值、SD如何得到的） 失控的判断标准 失控以后怎么办 质量持续改进 实验室应参加室间质量评价。

抱 怨 实验室应制定抱怨及其处理的SOP； 可操作性、不同抱怨的处理 抱 怨 实验室应制定抱怨及其处理的SOP； 可操作性、不同抱怨的处理 如抱怨涉及到工作是否符合现行程序，或是否符合管理办法和工作规范，或对实验室校准及检测质量有疑问时，则实验室应立即对这些范围的工作和有关职责进行审核。

技术验收的其它内容 就有关实验室质量管理方面与具体工作有关的内容进行口试和/或笔试； 已知HBV DNA和/或HCV RNA血清盘的实际检测和结果报告。

技术验收表的修改及验收细节 2002年11月和2003年1月在北京两次专家讨论会

文件审核 文件是否都有 文件的可操作性 文件的现行有效

现场考试 口试或笔试 内容：举在其工作中有可能遇到的实例，考察是否能应用所制定的程序进行应对 例子： 一. 现有一个患者向你提出：“我在你们医院检测HBV DNA为阳性，但在另一家医院检测为阴性，你们医院是怎么做的检测？”，此时，你怎么办？ （该题主要是考实验室人员是否知道并遵守所制定的抱怨处理程序）

现场考试 二．现有一人打电话到科室，说：“我孩子在你们医院做了一项丙肝的PCR检测，名字叫XXX，请你告诉我检测结果好吗？”。如果是你刚好接了这个电话，你会怎样去做？ （该题考的是实验室人员在患者要求以电子邮件、电话、传真等方式传递报告时，是否能按相应的程序去做）

现场考试 三．现有一个临床大夫拿着几张HBV DNA定量PCR检验报告单找到PCR实验室，说：“你们的PCR结果到底准不准，我这个病人刚开始检测，HBV DNA是5×107拷贝数/ml，用了拉米呋啶治疗后二周，再检测结果为3×107拷贝数/ml，降了不少，但再过二周检测，又变成了6×107拷贝数/ml，升高不少，这到底是怎么回事？”，如果这个大夫刚好问的是你，你怎么办？并如何解释其提出的问题？ (该题除了考实验室人员是否知道并遵守所制定的抱怨处理程序外，还要求其对特定PCR检验的批间变异有充分的认识)

现场考试 四．现有你科室同事，拿了一份血清标本给你，说：“这是我一个熟人的标本，他要做HCV RNA检测，刚好他还做生化和免疫检测，我从生化标本分了一些出来，给你做HCV RNA。”你觉得这样行吗？为什么？ （该题主要是考实验室人员对有关标本的收集程序是否清楚并遵守）

现场实验 目的：考核实验室是否按所制定的规程进行常规检测，检测结果是否与预期相符只是其中之一。 方法：观察实验室从标本接收、编号、检测程序、检测过程中的记录、质控、结果判断、结果报告等是否按所制定程序进行。

谢谢！