理工大学 基金申请讲座 第四军医大学科研部 苏景宽 二○○五年三月 理工大学 基金申请讲座 第四军医大学科研部 苏景宽 二○○五年三月

第一部分 基金委近年来背景资料简介

一、战略定位： 支持基础研究 坚持自由探索 发挥导向作用

基础研究的内涵: 科学问题的两个来源—“双力驱动” 从科学自身的发展提出问题 从经济社会发展提出问题 基础研究是指以认识自然现象，探索自然规律，获取新知识、新原理、新方法等为主要目的的研究，其内涵不仅包括了原有的“基础研究”和“应用基础研究”的内容，而且更准确地反映了基础研究发展的时代特点

自由探索与国家需求： 在坚持自由探索的基础上，科学基金要发挥导向作用 要通过资助计划引导科学家围绕经济社会发展需求和科学前沿开展创新研究，引导科研资源整合和有效利用，引导社会资源加大对基础研究的投入

定位目标： 国家创新体系先进制度的实践者 国家战略利益的投资者 知识创新的组织者 创新人才的培育者 技术创新和知识转移的促进者 创新政策和决策咨询的参与者 创新环境和创新文化的建设者

二、工作方针： 尊重科学 发扬民主 提倡竞争 促进合作 激励创新 引领未来

尊重科学是科学基金工作的根本立足点 树立和落实科学发展观和正确政绩观 尊重科学家的首创精神 崇尚科学精神，弘扬科学道德 科学基金资助工作要做到“随风潜入夜，润物细无声” 保护科学家“细听蝉翼寂，遥感雁来声”的敏感和灵气 提倡科学家 “板凳须坐十年冷”、“咬定青山不放松”

提倡竞争是科学基金制的本质特征 完善竞争机制，构建平等竞争的平台，择优支持，发挥竞争的激励作用 提倡竞争精神，鼓励科学家“敢为天下先”，支持科学家参与国际竞争 基础研究领域“只有第一，没有第二”

促进合作是现代科技发展的必然要求 倡导合作精神，培育创新团队 拓展合作视野，支持科学家参与区域和国际合作研究 促进完善公共科技资源共享机制 促进高等学校、研究机构和企业的合作 加强与其他国家科技管理部门的战略协作

激励创新是科技进步的灵魂 激励创新思想和创新人才 营造创新环境和创新文化 提升国家科学与技术原始创新能力

引领未来是基础研究的使命 发挥基础研究先导作用，立足中国，面向世界，面向未来，投资未来 发挥科学前沿和国家需求的导向作用 发挥资助与管理模式的导向作用

三、2005年总体战略： 统筹规划，科学配置 完善资助格局 改进评审方式

2005年财政拨款可望达26.95亿元，年增幅约20% 预计2005年资助计划额度较去年相近

政策与举措： 面上项目资助“逐步提高强度，适度控制规模” 推动学科交叉 支持和培育探索性较强、风险性较大的项目 继续探索长期资助、延续资助的模式 采取切实措施，保护非共识创新项目

充分发挥面上项目优势，逐步扩大重点项目资助规模，适度压缩重大项目规模，清理和整合专项基金，为科学家自由探索创造更大的空间和更好的环境

改进评审办法和程序，确保效率和质量 减少同行评议送审份数，试点同行评议“3+1”、“3+2”方式 改进专业评审组的工作方式。专业评审组在同行通讯评议的基础上，重点评议非共识创新项目，结合科学基金总体资助战略提出资助建议

第二部分 如何撰写申请书

一、摘 要（限400字） 包括：研究方法、内容、目标、科学意义等 一、摘 要（限400字） 包括：研究方法、内容、目标、科学意义等 如：“用……方法（手段）进行……研究，探索/证明……问题，对阐明……机制／ 揭示……规律有重要意义，为……奠定基础／提供……思路 ”

采用改良的消减杂交技术建立老年性白内障晶 状体上皮细胞差异表达基因文库并制备基因芯片， 利用此芯片筛选出白内障相关基因。通过基因转染 在体和培养的晶状体上皮细胞，观察细胞的形态、 增殖和凋亡、骨架蛋白及晶状体蛋白的变化，研究 基因的功能。从晶状体上皮细胞的角度阐明老年性 白内障发生的分子生物学机制，为防治白内障提供 新思路和理论依据。

二、立论依据 对基础研究，着重结合国际科学发展趋势， 论述项目科学意义 对应用基础研究，着重结合学科前沿，围 绕国民经济和社会发展中的重要科技问题 论述其应用前景

研究意义 在研究领域层面 从研究领域切入 从研究方向展开 围绕某一具体科学问题 （本项目研究目标） 进行归纳分析 国内外现状分析 提出设想

1、项目的研究意义 撰写方法： 从领域入手，简述主要进展，引出热点研究方向。 围绕热点研究方向进行简要分析，找出目前尚未 解决的具体科学问题，以此为切入点提出假设，阐述 如果解决了该问题（研究目标），对该领域甚至相关 领域的科学贡献（理论意义或应用前景）。

老年性白内障是与年龄相关的疾病，随着年龄的增 加，其发病比率也不断升高。特别是人类趋向老龄化， 白内障的患病人数还将持续增加。目前，它已是人类 第一位的致盲疾病。迄今为止，治疗白内障唯一有效 方法是通过手术摘除混浊的晶状体并植入人工晶状体。 虽然手术后患者可以恢复良好的视力，但是不可避免 的术后并发症及手术设备、材料耗资巨大，治疗白内 障花费的资金已成为世界各国严重的医疗负担。最近 的调查表明，如果将其发病时间延缓10年，白内障手术数量就会减少45%[1]。所以，一些学者认为通过预 防白内障发生或延缓其发展的途径征服白内障已成为 一项全球性的社会和社会经济问题[2]。

但是目前我们对老年性白内障发病机理的认识还不十分清楚。多年以来许多学者的研究结果证实晶状体上皮细胞在老年性白内障发生中起重要的作用，但对其中进一步的基因调控知之甚少。如果从参与老年性白内障晶状体上皮细胞变化的相关基因入手，研究基因的生物学功能，有可能抓住引起白内障发生、发展的主要环节。据此，本研究拟利用改良的消减杂交技术和基因芯片技术准确、全面、快速的特点，以晶状体上皮细胞为研究对象，一次性筛选出老年性白内障全部有差异表达的基因，从中再筛选出与白内障相关基因，并着重对其功能进行研究，从基因水平阐明白内障的发病机制，为防治白内障提供新思路和理论依据。

2、国内外现状分析（综述） 存在问题： A、低水平重复：文献复习不够，对国内外现 状缺乏真正了解，提出的问题别人已解决。 B、对方法原理理解不够：对研究方法不熟悉，简 单移植或夸大其作用，缺乏实际应用的可行性。 ---已有方法与掌握方法的人的结合； ---方法理论上可行与现实可行性的结合。 C、总结与表达不够：对国内外现状缺乏归纳分析， 只是简单罗列，缺乏逻辑性和针对性。

撰写方法：要紧紧围绕本次申请项目的主题。 A、从领域切入，简要论述国内外研究成果，并引 出当前的热点研究方向。 B、从研究方向展开，较详细地分析国内外的研究 进展，阐明在该方向上存在的问题。 C、围绕存在的问题，结合国内外以往的研究结果、 当前的现状及今后的发展趋势，详细论述和分 析这些问题产生的原因，提出该方面的空白点、 未知数、以及研究的难点、焦点，从而为自己 申请项目确立研究目标奠定充分的立论基础。

D、对拟采用的技术方法进行介绍和分析。 成熟的方法要简要介绍，重点阐明可以应用于 本研究的理论依据和实验依据。 新方法要详细介绍其原理，并阐明可以应用于 要特别注意的问题：必须对项目中所运用的技 术方法的原理、流程及在实际应用中可能出现 的问题要十分清楚，绝不能是一种简单的移植。 例如：单链抗体+功能基团，理论上可以实现融 合，但存在“活性、表达载体选择、纯化问题。 E、提出本项目的研究设想。

在立论依据的阐述中，对研究领域、研究方向、 具体科学问题的理解 研究领域：白内障的研究，包括发病机制、 预防、诊断、治疗措施等研究； 研究方向：白内障发病机制的研究，包括环境 因素、致病靶点、细胞水平、分子 水平研究等； 科学问题：白内障发病过程中的相关基因研究， 包括致病基因的筛选、功能研究、 调控机制、信号转导途径等等。

防治白内障必须针对其发病的主要环节。多年以来，国内外学者从不同的角度探讨白内障的发生机理。就致病的环境因素讲，氧化因子、紫外线辐射、晶状体周围环境中离子浓度改变及一些生长因子、细胞因子的改变均与老年性白内障的发生有关。就研究的部位分，晶状体中皮质与核的蛋白质改变及晶状体纤维的改变与白内障的形成有关，而位于晶状体前囊膜下单层的晶状体上皮细胞在白内障的形成中的变化更引人关注。

因为晶状体上皮细胞是晶状体中唯一有分裂活性、数量相对稳定的细胞，它们分裂、分化出晶状体纤维细胞、产生晶体蛋白，终生不停息，形成了晶状体均一、对称的结构，对维持晶状体的透明起重要作用。不仅如此，晶状体上皮细胞还是晶状体中受外来刺激影响较早的部位，已有研究证实老年性白内障的晶状体上皮细胞还发生退行性变、细胞膜通透性增加、细胞内酶活性改变、细胞数量减少、凋亡细胞增多等改变，与单纯老化的晶状体之间存在差异[3-5] 。

体外实验也证实多种因素(H2O2、UV-B、晶 状体蛋白的自身抗体)诱发的白内障模型中晶状体 上皮的损伤是晶状体混浊的主要环节[6-8]。因此， 从晶状体上皮细胞的变化入手探讨白内障的成因， 有可能抓住揭示白内障发病机理的主要环节。而晶 状体上皮细胞变化的基因调控机制是问题的关键所 在，也是有待我们深入研究的问题。

白内障的形成与晶状体的老化密不可分，是晶状体老化的极端表现。晶状体的老化是多种因素相互作用的结果，包括基因的和非基因的随机变化的不断积累，也有程序性的、非随机性的组织特异性多种基因表达的改变。目前，国内外对白内障相关基因的研究主要以下三方面：

一是对体外培养的晶状体白内障模型及上皮细胞的研究。UV-B辐射作用诱导的白内障中晶状体上皮细胞是主要的靶细胞，其Na-K-ATP酶的活性增加，蛋白质的合成和分泌增加；上皮细胞的凋亡增加，其中有c-fos基因的表达增加；还有组蛋白H4、H3 的低表达`和蛋白酶C、β-肌动蛋白、γ-肌动蛋白基因的高表达[9-12]。Carper等[13]利用RT-PCR-DD(reverse transcription-polymerase chain reaction differential display)技术研究H2O2诱导的晶体上皮细胞的基因差异性表达结果显示NADH脱氢酶4亚基、细胞色素b、谷氨酰胺转移酶基因表达减少以及细胞因子的核蛋白、替代拼接因子2 （alternative splicing factor）、β-三羟基异丁酰辅酶A水解酶基因表达的增加。

二是利用转基因动物的研究。波形纤维蛋白基因（vimentin）、杂交的Ⅲ型中间纤维蛋白基因的转基因小鼠表现出白内障，而且有随小鼠年龄增加白内障加重的趋势。晶状体改变的共同特点是晶状体纤维细胞分化受抑制[14,15]。Gong等[16]报告晶状体的细胞膜蛋白连接蛋白α3（α3 Connexin）基因敲除小鼠（knockout mouse）在晶状体形成的早期及纤维细胞分化早期不受影响，其后出现与晶状体蛋白溶解有关的核性白内障。虽然体外实验和白内障转基因小鼠都提示我们一些基因的变化与白内障有关，但是，这些变化的基因是否与老年性白内障形成有关，目前尚缺乏进一步的报告。

三是对人老年性白内障晶体上皮的研究。Lee[17]利用RT-PCR技术研究显示前极性白内障与核性白内障上皮细胞中纤维连接蛋白、I型胶原纤维、α-平滑肌蛋白、TGF-β1、TGF-β2、TGF-βⅡ型受体、结缔组织生长因子的基因表达有差异。Kantorow等[18]利用RT-PCR-DD研究老年性白内障与正常晶状体上皮的基因差异性表达的初步结果是老年性白内障有三个高表达基因和12个低表达的基因。但就DD-PCR技术来讲，在实验中难以解决假阴性、假阳性以及克隆全长cDNA的问题。

上述三方面的研究均取得了不同程度的研究结果，但由于当时技术条件的限制都未能全面阐明与白内障相关的基因及其功能。 寻找白内障时晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细胞间差异表达的基因有可能揭示白内障的发病机理。

寻找差异表达基因的经典方法是消减杂交技术（subtractive hybridization, SH），它是……，但是实验操作复杂。 经过改进后的抑制性消减杂交（suppression subtractive hybridization ,SSH是Diatchenko等1996年建立的方法）……简化了实验操作，但仍然问题很多。 我校生化教研室建立了改良消减杂交技术[19，20]，其特点是：简便易行，能够获得目的细胞特异表达的全长基因，对低丰度基因也能有效分离。

该方法的建立者已利用这一技术从脂多糖刺激前后的人牙髓细胞的差异表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异表达的基因，其中5个为新基因。同理，利用此方法也能快速、有效地获得白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮细胞间差异表达的基因，并克隆到全长cDNA，为进一步的结构和功能研究打下基础。

基因芯片技术的出现，使检测差异表达基因和未知DNA分子变得更快捷、准确、高效。基因芯片是在1996年被提出并开始研制的，该技术是将成千上万的DNA探针集中到1厘米见方的基片上，利用碱基互补原理，DNA探针中的已知碱基序列与被测定的未知DNA分子杂交后由标记分子标记杂交体，经自动阅读设备分析杂交结果，从而对检测基因进行定性、定量和结构分析，确定未知DNA分子。

由于目前尚没有针对白内障研究的现成基因芯 片，根据本研究的需要，我们将筛选到的差异表达 的所有基因建立cDNA文库，再利用基因芯片技术 制备成基因芯片，以此检测多个样本中白内障晶状 体上皮细胞与正常晶状体上皮细胞间差异表达的基 因，从中进一步筛选出白内障特异的基因，它们中 可能有已知基因，也可能有未知基因。通过以上两 种技术的有机结合，我们能更快捷、有效、准确地 得到白内障相关基因。

综上所述，分子生物学技术的发展为研究白内障发生过程中的功能基因及特异调控基因提供了有利武器。本项目从晶状体上皮细胞入手，利用改良的消减杂交技术和基因芯片技术系统研究与白内障相关的基因，并采用对体外培养细胞和在体晶状体上皮细胞的基因转染，探讨它们在晶状体上皮细胞变化和白内障形成中的作用，可望阐明白内障晶状体上皮细胞变化的分子生物学机制，为防治白内障提供新的思路和理论依据。

3、参考文献 A、要以英文文献为主，同时也要引用国内同行 知名专家的文献。 B、引文信息要全：文章题目、作者姓名、具体 出处（包括期刊名、年份、卷期、页码等）。 C、主要引用近五年的文献，最好能有05年的最 新文献。

三、研究方案 1、研究目标 撰写要求： 有限目标，与研究内容相呼应 如：探索……问题，明确……关系，揭示……规律， 撰写要求： 有限目标，与研究内容相呼应 如：探索……问题，明确……关系，揭示……规律， 阐明……原理（机制），建立……方法等

研究目标： 筛选出与老年性白内障相关的基因，明确 部分基因在白内障形成中的作用，从晶状体上 皮变化的角度阐明白内障的发生机理，为防治 白内障提供线索。

存在问题：内容过多，一个研究周期难以完成； 2、研究内容： 存在问题：内容过多，一个研究周期难以完成； 内容分散，不能集中阐明研究目标。 撰写要求：内容要适当，确保研究周期内完成； 与目标相辅相成，为研究目标服务。 篇幅要适度，注意与技术路线区别。

研究内容： （1）筛选白内障相关基因：采用改良的消减 杂交技术，获得人老年性白内障晶状体上皮细胞 和正常晶状体上皮细胞差异表达的基因片段，建立 cDNA文库。制备差异表达基因的基因芯片，利用 基因芯片技术从多个标本的老年性白内障晶状体上 皮细胞中筛选出白内障相关基因。

（2）研究白内障相关基因的结构：对白内障 相关基因cDNA进行特异扩增、PCR产物的克隆、 鉴定，测定基因序列，分析基因的结构，获得全长 基因。 （3）研究白内障相关基因在晶状体上皮细胞 变化中的作用：利用反转录病毒，对培养的人晶状 体上皮细胞和在体小鼠晶状体进行基因转染，观察 白内障相关基因对晶状体上皮细胞的影响以及在白 内障形成中的作用。

观察指标如下：①存活细胞数；②光镜、透射 电镜下细胞形态的变化；③细胞凋亡检测：用原位 末端标记和连接酶介导PCR方法，从形态和DNA 水平分析细胞凋亡；④细胞增殖的检测：用免疫组 织化学的方法检测核蛋白Ki-67；⑤细胞骨架蛋白 （Vimentin、Actin）的检测：用Northern杂交 法检测vimentin 、actin mRNA的表达，用SDS- PAGE及Western blot方法检测波形纤维蛋白、肌 动蛋白（均为尿素溶性蛋白）；⑥晶状体蛋白的检 测：用SDS-PAGE方法观察水溶性蛋白α、β、γ 晶状体蛋白的变化。

3、拟解决的关键问题： 存在问题：抓不住关键问题或抓得不准。 什么是关键问题 ？ --研究过程中对达预期目标有重要影响的 某些研究内容或影响因素。 --为达预期目标所必须掌握的关键技术或 研究手段。 撰写要求：找出关键问题，提出解决办法。并建议提出当某些关键技术方案失败时拟采取的备用方案

在体基因转染是进行白内障相关基因功能研究的关键。 拟解决的关键问题： …………… （3）在体基因转染： 在体基因转染是进行白内障相关基因功能研究的关键。 ......在体晶状体的基因转染的关键是如何使大量分裂后细 胞转染，如何使病毒穿过晶状体的囊膜，针对以问题我们拟 采取下列方法解决：①选用反转录病毒的慢病毒载体，它克 服了一般反转录病毒只能转染有分裂能力细胞的局限性，对 分裂后细胞也能有效的转染。这对在体晶状体的基因转染有 很大的优越性。②采用直径1-2μm玻璃微管在显微镜下将病 毒载体注入晶状体的前囊膜下，既不破坏晶状体的完整性， 又可使病毒接触到囊膜下的上皮细胞。

4、研究方法 存在问题： 过于简单：在方案中只有方法名称而无具体步骤。 过于繁杂：大量罗列一些常规的实验方法。 撰写要求：以研究项目的需求为前提，尽量采用目 前最先进的方法和手段，并将其操作步骤和关键环 节体现在技术路线当中。

本课题主要利用改良消减杂交技术和基因 芯片技术筛选老年性白内障晶状体上皮细胞与 正常晶状体上皮细胞有差异表达的基因，分析 其结构，预测其功能，采用基因转染技术探讨 其在晶状体上皮细胞变化、白内障形成中的作 用，从晶状体上皮细胞的角度揭示老年性白内 障发生的分子生物学机制。

5、技术路线 存在问题： 不清楚，不详细，不可行。 撰写要求： 清晰、详细、注意逻辑性。 撰写方法： —以时间顺序为主线设计技术路线 —以研究内容为主线设计技术路线 —分大小标题，突出逻辑关系。 —详细地写清楚每个具体步骤。

（1）人晶状体上皮细胞的获得：老年性白内障 晶状体上皮细胞取自白内障患者手术中取出的前囊 膜（晶状体上皮细胞紧贴于前囊膜），直径约5mm。 正常晶状体上皮细胞取自角膜移植供体眼的晶状体， 在显微镜下撕下前囊膜，直径约8mm。按文献提供 的方法去除晶状体纤维细胞，仔细清洗以去除血细 胞污染。 （2）建立差异cDNA文库：从50例白内障手术 患者的前囊膜上取下的晶状体上皮细胞作为实验组， 从25例正常晶状体前囊膜上取下的晶状体上皮细胞 作为对照组，利用改良的消减杂交技术[19，20]， 获得差异表达的cDNA，并建立文库。主要的实验 流程如下：

Promega PolyATtract® System 1000 mRNA分离 mRNA分离 正常晶状体上皮细胞 白内障晶状体上皮细胞 Promega PolyATtract® System 1000 mRNA分离 mRNA分离 oligo-dT18反转录 ntech Cap-finder方法反转录 cDNA Biotin-21-dUTP pending-cDNA 随机引物PCR 杂交 Sephacryl S-400柱

除去杂交体及过量正常晶状体上皮细胞cDNA 除盐及小片段 链亲和素-生物素磁性分离 除去杂交体及过量正常晶状体上皮细胞cDNA “长距离”PCR 目的cDNA的特异扩增 克隆、鉴定、转化 建立差异基因文库

6、可行性分析 理论分析 研究手段、方法分析 预实验结果分析 所用特殊实验材料（试剂）的分析 对所具备的实验条件进行分析 对项目组成员搭配及其运用技术方法的能力分析

(1)关于建立差异cDNA文库： 老年性白内障晶状体上皮细胞与正常晶状体上皮 细胞是处在不同状态下的细胞，细胞基因表达的改变 是细胞蛋白功能等改变的基础。寻找这些有差异的基 因是探索细胞功能、状态变化原因的突破口。利用的 消减杂交技术是筛选差异表达基因的有效方法。改良 的消减杂交技术是我们研究组成员建立的方法，应用 此方法已经从脂多糖刺激前后的人牙髓细胞的差异表 达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异表达的基因，其 中 5个为新基因，这一研究成果进一步证实了该方法 的可操作性，而且我们在运用此方法过程中也积累了 较丰富的经验，因此，本研究利用这一方法从两种状 态的晶状体上皮细胞中筛选差异表达的基因并建立 cDNA文库是可行的。

7、创新性 对创新的理解：创新性与先进性是有根本区别的。 原始创新： 填补空白或修改传统的理论； 新技术、新方法的发明创造。 跟踪创新： 在前人工作基础上补充、完善现有理论； 对原有技术、方法修改后产生1＋1＞2的效果。

首次采用改良的消减杂交技术建立白内障晶状 （1）基因筛选方法上的创新： 首次采用改良的消减杂交技术建立白内障晶状 体上皮细胞差异表达基因文库，并制备相应的基因 芯片，利用此基因芯片筛选老年性白内障相关基因。 这使我们能快速、准确、定性、定量地获得白内障 相关基因。通过分析这些基因的结构、揭示它们在 白内障发生、发展过程中的作用，由此阐明老年性 白内障晶状体上皮细胞变化的分子生物学机制，为 防治白内障提供新的思路。

8、年度研究计划及预期研究结果 年度研究计划： 按年度列出：研究内容及其阶段目标；拟组织 的重要学术交流活动、国际合作与交流计划等。 预期研究结果： 理论成果：建立/丰富/补充/填补 ...... 技术方法：建立/完善 …... 专 利：可望获得 …… 论 文：国际、国内 人才培养：青年科技骨干、博硕研究生

四、研究基础 1、研究工作积累 存在问题： 内容过简； 与申请项目无关。 撰写要求： 要介绍与申请项目直接相关的预实验研究结果； 提供有关的研究论文、成果及专利等材料； 以往应用与申请项目有关的技术方法的经历； 工作积累也要包括项目组成员的所有信息。

（2）有关基因转染方面的研究工作基础：...... （1）有关消减杂交技术和基因芯片技术的工作基础: 本研究所用的基因筛选技术主要是改良的消减杂 交技术，此技术是我们研究组成员主要参与建立的， 并利用此技术从脂多糖刺激前后的人牙髓细胞的差异 表达的基因中克隆到脂多糖刺激后特异表达的基因， 其中5个为新基因，有关此技术的研究论文有：...... （2）有关基因转染方面的研究工作基础：...... （3）有关老年性白内障相关基因的研究基础：......

2、工作条件 实验室整体实力和规模 实验室所具备的、申请项目所需的仪器设备 3、项目组人员简历 所有人员均需介绍 介绍内容根据在项目中的分工有所侧重 列出相关研究论文

第二部分 撰写申请书常见问题解析

一、对立论依据、实验方案、研究基础应阐述的 内容以及三者关系的理解 立论依据：阐述背景和理由，回答“为什么” 实验方案：是申请书的核心，回答“怎么做” 研究基础：展示积累和实力，建立“信任感”

二、对研究方案中研究目标、研究内容、研究方法、 技术路线及其关系的理解 1、首先要确定研究目标：国内外现状分析中提出的 具体科学问题就是项目的研究目标，目标具体到 什么程度，要根据研究周期、资助强度来确定。

2、研究目标、研究内容、研究方法的关系： 依据目标确定研究内容； 根据内容选择研究方法。 3、研究内容与技术路线的区别： 研究内容：根据总体目标分若干分题，重点回答 做什么—观察指标、阶段目标。 技术路线：重点回答怎么做—在具体步骤中体现 研究内容和研究方法。

三、其他需要注意的问题 1、在项目设计过程中要树立整体观念，要讲述 一个完整的故事。 2、文字表达要精雕细琢，每一句话要说明什么 要做到心中有数。 3、文献回顾不能回避国内外最新研究进展，尤 其是不同学派的观点。 4、重点内容、观点要用黑体强调。

第三部分 项目申请书自查注意事项

报送申请书确认事项 确认申请书为2005版，不要使用03、04版 确认提交和打印电子文档时已“检查保护” 确认电子版的版本号与纸质文件完全一致 确认申报学科选择正确，项目信息无误 确认项目负责人和项目组成员签字 确认参与多个项目的人员身份和提法一致 确认项目组成员统计人数与填报人数一致 确认正文中流程图及插入图片位置、形式正确 确认电子邮箱畅通，及时查阅邮件 确认所有附件材料尽量电子化 确认A3纸双面套印，盖章页放在最后

面上项目限项要求（查重） 具有高级职称人员负责或参加面上项目数（含在研）不得超过2项 作为项目负责人同期只可申报一项（含重大研究计划项目） 中级职称同期只可以负责一项 超项将删除所有相关项目！！

面上项目申报资格 项目负责人必须具备中级以上职称 中级职称具有博士学位者不需要专家推荐 中级职称不具备博士学位者需两位同行专家推荐 在职博/硕士研究生（不论中职还是高职）需导师推荐，中职者最好再附两位同行专家推荐信 青年基金申报者必须于今年1月1日前未满35周岁，并且从未获得过此类资助 “在职研究生”与“在读研究生”的区别 申请者必须为我校正式聘任人员，受聘期覆盖项目研究期

基本信息 身份证或其他证件务必准确 申请者信息-“在研项目批准号”仅填负责项目编号 所在单位一律按学校-部院系-教研室填写，名词规范 国外人员参与项目不要将其单位填入合作单位信息 国外合作研究人员必须提供合作协议与签字授权书 申请经费原则上在25万元左右，上下不超过5万元

项目组主要成员 项目组主要成员不包括项目申请者 项目组成员统计中为表格中人数加一，职称与学位之间不要重复计算 成员选择与研究内容必须紧密挂钩

面上项目经费申请表 面上项目管理费5% 劳务费不超过15% 国际合作费不超过15%，没有明确合作需求的原则上不要填写 仪器设备费原则上不超过10%（试制，不是试剂） 经费预算的计算依据与说明需详细填写 合理预算

其他附件材料清单（尽量电子化） 推荐信 合作协议／签字授权书 伦理委员会证明 实验材料对方赠予证明 其他难于电子化的材料

谢谢！