1 43 例正常人群 NK 细胞上 FcγRIIIa 基因多态性分析 屈钰华 黎阳 吴燕峰 方建培 郭海霞 周敦华 黄科 中山大学孙逸仙纪念医院儿科 中山大学孙逸仙纪念医院儿科

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1 1 43 例正常人群 NK 细胞上 FcγRIIIa 基因多态性分析 屈钰华 黎阳 吴燕峰 方建培 郭海霞 周敦华 黄科 中山大学孙逸仙纪念医院儿科 中山大学孙逸仙纪念医院儿科 drliyang@126.com drliyang@126.com

2 内容 背景 目的 方法 结果 讨论 结论

3 背景 肿瘤是严重危害人类生命健康的一类疾病 ，攻克肿瘤一直是我们迫切希望解决的问 题。 肿瘤特异性单克隆抗体出现给肿瘤治疗带 来了新的希望

4 背景 抗体依赖细胞介导的细胞毒性 (antibody- dependent cell-mediated cytotoxicity ， ADCC) 被证明是单克隆抗体临床治疗肿瘤的重要 机制和手段。 IgG 型抗体首先通过抗原结合部位与靶细胞 （肿瘤细胞）结合，再由效应细胞上的 FcγR 识别其 Fc 段，介导 ADCC 作用

5 背景 FcγR 分为三类： FcγRI (CD64) 、 FcγRII(CD32) 以及 FcγRIII (CD16) 。 FcγRIII 又分为两类： FcγR Ⅲ a 是一种跨膜糖 蛋白，表达于单核细胞、吞噬细胞、 NK 细 胞及选择性 T 细胞上； FcγR Ⅲ b 是一种糖肌 醇磷脂蛋白 (GPI- 锚蛋白 ) ，只表达于中性粒 细胞和 IFN 诱导的嗜酸性粒细胞上

6 背景 Ravetch 等最先报道在 FcγRIIIa 近膜 Ig 样区核 苷酸位点 559 处存在多态性位点。 在核苷酸位点 559 处核苷酸发生鸟嘌呤 (G) 一 胸腺嘧啶 (T) 点突变后，由其转录合成的受 体蛋白内第 158 位缬氨酸 (valine ， V) 被苯丙 氨酸 (phenylalanine ， F) 所取代。 这导致 FcγRIIIa 有三种基因型： FcγRIIIla- 158F/F ， FcγRIIIa-158V/V 及 FcγRIIIa-158V/F

7 背景 诸多文献报道 FcγRIIIa 基因多态性与肿瘤病 人预后相关。 于单克隆抗体治疗的肿瘤病人中， FcγRIIIa- 158V/V 的病人预后较 V/F 及 F/F 基因型病人 好。 这可能与其跟治疗性单克隆抗体的 Fc 段结 合相关，由不同的亲和力导致 治疗性单克 隆抗体介导的 ADCC 强度不同。

8 目的 确定 FcγRIIIa 的基因多态性在正常及肿瘤人 群中的分布，以了解人群对肿瘤特异性单 抗可能疗效反应的分布规律。

9 方法 标本来源 正常健康人群外周血：用含肝素抗凝管 收集健康志愿者外周血，标本量为 2 ～ 3ml ，共 43 份。

10 方法 技术路线 提取 DNA nest—PCR 扩 增 FcγRIIIa 基因 Nla Ⅲ酶切鉴定 FcγRIIIa 基因多 态性

11 方法 1. 按说明书提取外周血基因组 DNA 。 2. nest-PCR 外侧反应经 35 个 PCR 循环 (95 ℃ 45S,64 ℃ 45S,72 ℃ 30S) ，扩增产物长度 248 bp ； 内侧反应经 35 个 PCR 循环 (95 ℃ 45S,65 ℃ 45S,72 ℃ 30S) ，扩增产物长度 94 bp 。 3.Nla Ⅲ内切酶酶切 8ul PCR 产物于 37 ℃酶切过 夜。酶切产物经 15 ％ PAGE 电泳分离，银染 显色 。

12 结果

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15 讨论 本研究检测结果显示在健康人群中 FcγRIIIa 的基因多态性以 V/F 型最多，而 V/V 型次之， F/F 型最少，这与国内文献报道（ 47 例健康 者中 V/F 型 38 例， V/V 型 7 例， F/F 型 2 例）一 致。 本研究中未检测出 F/F 型，可能与样本量较 少有关。

16 讨论 但本研究与国外报道的基因型分布（以 V/F 型及 F/F 型较多，而 V/V 型最少）有差异， 这可能与地域及种族差异，遗传环境等因 素有关。

17 讨论 FcγRIIIa 三种基因型的 NK 细胞与 IgG 的亲和 力顺序为 V/V ＞ V/F ＞ F/F 。 治疗性单克隆抗体介导的不同基因型的 NK 细胞的 ADCC 强度不同，对肿瘤细胞的杀伤 存在差异，从而取得不同的预后。 我国以 FcγRIIIa-158F/F 分布最少，可推测出 大部分人对单抗治疗的预后较好。

18 结论 FcγRIIIa 基因多态性在中国健康人群中的分 布以 FcγRIIIa-158V/F 最多， FcγRIIIa- 158V/V 次之， FcγRIIIa-158F/F 最少。

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