西北大学基础化学实验 《仪器分析实验》 分子荧光分析法 《仪器分析实验》 分子荧光分析法 Molecular Fluorimetry For short: M-F Molecular Fluorimetry For short: M-F.

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1 西北大学基础化学实验 《仪器分析实验》 分子荧光分析法 《仪器分析实验》 分子荧光分析法 Molecular Fluorimetry For short: M-F Molecular Fluorimetry For short: M-F

2 西北大学基础化学实验 一、分子荧光分析法 简介 ( 对光的吸收 )

3 西北大学基础化学实验 发生激发 态反应 分子内的激发和衰变过程 1.1 荧光的产生 激发态能量的跃迁与转 化的形式和速率： A1,A2 吸收 : 10 -15 s VR 振动松弛：  10 -12 s ic 内转化：  10 - 11 s isc 系间窜越： 10 -6 ~ 10 -2 s F 荧光： 10 -9 ~ 10 -6 s P 磷光： 10 -6 ~ 10 0 s

4 西北大学基础化学实验 激发光谱 发射光谱 1.2 荧光光谱 1.2 荧光光谱 任何荧光化合物，都具有两种特征的光谱：激 发光谱和发射光谱。 组成、结构与衍化信息 ☆ 物质的化学结构 ☆ 环境与介质条件 ☆ 与其它溶质的相互作用 ☆ 反应动力学

5 西北大学基础化学实验

6 1.3 荧光定量 F = K ﹒ I 0 ﹒ φ f ﹒ C I 0 ：光源强度； φ f ：荧光量子产率； C ：荧光体浓度） 1 ）影响相对荧光强度的因素有哪些？ 2 ）试比较荧光法与紫外 - 可见分光光度法的分析性能。 ? 问题： （☆注意：在一定浓度范围内适用）

7 西北大学基础化学实验 1.4 荧光仪的基本构造 ？ 问题 ： 荧光光度计与紫外 - 可见分光光度计在光路设置 上有什么不同？为什么？

8 西北大学基础化学实验 1.5 分子荧光分析法的应用简介 ★ 常规分析应用： ☆ 定性分析： φ f ； λ ex ； λ em ；峰形等 ☆ 定量检测： F = K ﹒ I 0 ﹒ φ f ﹒ C ☆ 其它（略） ★ 高端生化研究： ☆ 分子相互作用研究； ☆代谢动力学跟踪； ☆ 显微成像（物理迁移与化学衍化的原位 “ 显迹 ” ）

9 西北大学基础化学实验 二、维生素 B6 注射液中维生素 B6 含的 荧光法测定 2.1 实验原理 ★ 在近中性的水溶液中 有较强的荧光发射 : （ 323nm/392nm 附近） ★ 在碱性介质中不稳定 ★ 易发生光降解 VB 6 的化学结构

10 西北大学基础化学实验 2.2 实验流程 １、试液配制 ２、 VB 6 的荧光光谱的绘制 ３、标准工作曲线的制作 ４、未知液的配制

11 西北大学基础化学实验 2.3 注意事项： ☆注射液的移取与稀释 ☆系列标液的测定顺序 ☆即放即测，防光降解 ☆荧光仪的开关机顺序

12 西北大学基础化学实验 2.4 数据处理 1. 从荧光光谱图上读出最大激发（ λ ex ）和发射波长（ λ em ） 2. 用标准工作曲线法算出所配实测试液的浓度 3. 计算注射液中维生素 B 6 的含量， 病计算测定量占 标示量 的百分数