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目的要求 掌握: 分枝杆菌的共同特性; 结核杆菌细胞壁脂类含量与其染色性、培养特性、抵抗力和致病性的关系;结核杆菌的致病性与免疫性;结核菌素试验的原理、结果意义及应用价值; 白喉棒状杆菌的生物学特点、致病性、特异性防治; 熟悉:结核杆菌的微生物学检查原则及特异性预防;麻风杆菌的致病特点、微生物学诊断。

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1 目的要求 掌握: 分枝杆菌的共同特性; 结核杆菌细胞壁脂类含量与其染色性、培养特性、抵抗力和致病性的关系;结核杆菌的致病性与免疫性;结核菌素试验的原理、结果意义及应用价值; 白喉棒状杆菌的生物学特点、致病性、特异性防治; 熟悉:结核杆菌的微生物学检查原则及特异性预防;麻风杆菌的致病特点、微生物学诊断。 白喉外毒素的组成及其毒性作用; 了解:麻风病防治原则;锡克试验。

2 呼吸道感染细菌 概念:经呼吸道传播,主要引起呼吸道器官或呼吸道以外器官病变的一类细菌。 范围: 1、结核分枝杆菌 2、白喉棒状杆菌
3、嗜肺军团菌 4、百日咳鲍特菌 5、流感嗜血杆菌 6、肺炎克雷伯菌

3 结核分枝杆菌 M.tuberculosis

4 COLONIAL MORPHOLOGY OF THE TUBERCULOSIS COMPLEX MYCOBACTERIA
EUGONIC GROWTH 14 DAYS DYSGONIC GROWTH 14 DAYS Mycobacterium tuberculosis Mycobacterium bovis

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8 分枝杆菌共同特点 是一类细长略弯曲的杆菌,有分枝生长的趋势。 细胞壁含有大量的脂质,与染色性、抵抗力、致病性等密切相关。 抗酸染色(+)
致病性与菌体成分有关,引起的疾病都呈慢性,并伴有肉芽肿。

9 分枝杆菌分类 分 类 对人致病的主要分枝杆菌 结核分枝杆菌 人型、牛型结核分枝杆菌 非结核分枝杆菌 堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、
分 类 对人致病的主要分枝杆菌 结核分枝杆菌 人型、牛型结核分枝杆菌 非结核分枝杆菌 堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、 瘰痨分枝杆菌、 鸟-胞内分枝杆 菌、蟾分枝杆菌、偶发分枝杆菌 麻风分枝杆菌

10 一、生物学性状 形态与染色 形态:细长略带弯曲或直的杆菌,有时有分枝;在不同条件下形态不尽相同,呈现多形性。 大小:1~4×0.4μ m
排列:常聚集成团 染色性:齐-尼抗酸染色阳性(红色) Much颗粒

11 培养特性 专性需氧。生长缓慢,约18小时分裂1代,2-4周才见菌落生长。
营养要求高,初次分离常用含有蛋黄、甘油、马铃薯、无机盐和孔雀绿的Lowenstein-Jensen(罗氏)培养基。 典型菌落:粗糙型。菌落呈颗粒、结节或菜花状,乳白色或米黄色、粗糙、不透明。 液体培养基:在管底开始生长,最后在表面形成菌膜。结核杆菌有毒株呈索状生长,细菌排列呈索状。

12 生化反应:不活跃 抵抗力:较强 糖发酵(-) 人型可合成烟酸和还原硝酸盐,而牛型不能。
结核杆菌触酶(+)、热触酶(-),而非结核分枝杆菌均为(+) 抵抗力:较强 抗干燥,耐酸硷,对多种染料有抵抗力 对紫外线敏感,可用于患者衣物的消毒 对链霉素、利福平、异烟肼、环丝氨酸、乙胺丁醇、卡那霉素、对氨水杨酸敏感,但长期用药易出现耐药性。

13 生化反应 不发酵乳糖,触酶阳性 干抗燥 抵抗力 四抗 抗酸碱 怕湿热 四怕 抗碱性染料 抗青霉素等 怕痨药物 怕酒精 怕紫外线

14 变 异 性 形态、菌落变异 毒力变异:卡介苗(BCG)
变 异 性 形态、菌落变异 毒力变异:卡介苗(BCG) ——Calmette和Guerin二人将牛型结核杆菌放在含有甘油、胆汁、马铃薯的培养基中经13年230次传代而获得的减毒活菌苗,用于预防结核病。 耐药性的变异

15 磷脂 脂质 分枝菌酸 索状因子 蜡质D 硫酸脑苷脂 蛋白质 结核菌素最重要 分枝杆菌生长素

16 二、致病性和免疫性 1、脂质 2、蛋白质: 3、分枝杆菌生长素: (1)分枝菌酸:细胞壁脂质中的主要成分,与抗酸性有关。
(2)磷脂:促使单核细胞增生,引起结核结节形成与干酪样坏死。 (3)索状因子:能破坏细胞线粒体膜,抑制白细胞游走和引起慢性肉芽肿。 (4)蜡质D:具有佐剂作用,可激发机体产生迟发型变态反应。 (5)硫酸脑磷脂:抑制吞噬细胞中吞噬体与溶酶体的结合,使其能在吞噬细胞中长期存活。 2、蛋白质: 主要成分是结核菌素。与蜡质D共同作用引起迟发型变态反应。 3、分枝杆菌生长素: 脂溶性的铁螯合剂。

17 致病性

18 结核杆菌细胞壁上的 致病物质 蛋白质 磷脂 脂质 蜡质D 索状因子 分枝菌酸 硫酸脑苷脂

19 所致疾病:结核,尤其以肺结核多见 传染源:病人 淋巴和血行传播 传播途径:多途径 肺炎 肉芽肿的损害 任何部位的肉芽肿

20 PULMONARY TUBERCULOSIS

21 Steps in the development of tuberculosis
Inhalation of bacteria Dead phagocytes, necrosis Bacteria reach lungs, enter macrophages M. tuberculosis Bacteria reproduce in macrophages Phagocytes, T cells, and B cells trying to kill bacteria Lesion begins to form (caseous necrosis) Activated macrophages Bacteria cease to grow; lesion calcifies Lesion liquefies Bacteria coughed up in sputum Immune suppression Spread to blood organs Reactivation Death

22 TUBERCULOSIS HUMAN LUNG HUMAN LUNG Large caseating tubercle
Miliary tubercles HUMAN LUNG HUMAN LUNG

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24 Clinical features with AIDS
systemic disease (versus pulmonary) greater in AIDS lesions often lepromatous

25 不完全吞噬 胞内菌

26 肺结核的两种表现 原发感染 原发后感染 原发综合征:原发灶、淋巴管炎、肺门淋巴结肿大
致病性 肺结核的两种表现 原发感染 原发后感染 原发综合征:原发灶、淋巴管炎、肺门淋巴结肿大 病程呈慢性渐进性,伴有乏力、体重减轻、咳嗽、盗汗、午后潮热、胸痛等。病灶多局限呈干酪样结节,若结节破溃,则可形成空洞,传染性强。

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28 1、细胞免疫为主,为传染免疫(infection immuity)/有菌免疫,
2、免疫与变态反应共存 传染免疫(infection immuity)/有菌免疫——即只有当TB菌在体内存在时才有免疫力,一旦体内的TB菌被杀灭,免疫也随之消失。

29 结核菌素试验 是应用结核菌素进行皮肤试验来测定机体对结核杆菌是否能引起变态反应的一种试验。 原理:迟发型变态反应
试剂:OT(tuberculin)、PPD ﹥5mm为“+” 测红肿硬结直径 ≥15mm为“+++”

30 意义: “+”——已感染过结核杆菌或预防接种 “++++”——可能有活动性感染 “-”——未感染过结核杆菌,但还要考虑是否感染初期、老年人、细胞免疫功能低下。 应用:(1)选择BCG接种对象和免疫效果的测定(2)作为婴幼儿结核病诊断的参考(3)测定肿瘤患者的非特异细胞免疫功能(4)在未接种BCG的人群中调查结核病的流行情况。

31 三、微生物学检查 临床资料、细菌学检查、放射学诊断仍是目前肺结核诊断的主要依据,其中细菌学检查具有确诊意义。 标本采集和集菌
直接涂片镜检:抗酸染色 分离培养 动物试验 检测鉴定新技术:PCR、核酸探针、DNA RFLP、色谱分析技术、Bactec TB-460系统等 L型培养

32 四、防 治 原 则 预防 (1)加强卫生管理,改善营养条件。 (2)早期发现和治疗病人 (3)接种卡介苗 治疗
链霉素、利福平、异烟肼、对氨水杨酸为第一线药物, 强调联合用药、足疗程,防止耐药性、减少毒性。

33 麻风分枝杆菌 M.leprae 是引起慢性传染病麻风的病原体。

34 Mycobacterium leprae

35 一、生物学性状 麻风杆菌形态、染色与结核杆菌相似,常在细胞内呈束状或团状排列,外观似松叶或烟丝撒落在纸上为其特点。含菌的细胞浆呈泡沫状,称麻风细胞。 典型胞内菌 人工体外培养迄今尚未成功。 动物感染模型:小鼠足垫模型、犰酴模型

36 二、致病性与免疫性 传染源:瘤型麻风病人为主要传染源 传播途径:呼吸道、接触传播 肉芽肿损害 色素减退 感觉缺失 以细胞免疫为主

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38 三、微 生 物 学 检 查 标本采集:鼻粘膜或皮损 涂片染色镜检 病理组织切片检查
麻风菌素试验:不能用于诊断,但可用于分型及了解麻风患者及接触者的预后。

39 四、防 治 原 则 防 治 目前尚无特异性预防方法 普查、定期检查,早期发现,早期隔离 BCG预防有一定效果
药物治疗:氨苯砜、氯法齐明、利福平和氟喹诺酮类制剂为麻风联合化疗主要的配伍药物。

40 白喉棒状杆菌 C.diphtheriae

41 棒状杆菌特 点 革兰阳性,菌体一端或两端膨大呈棒状。菌体染色不均匀,出现节段染色或异染颗粒;排列常呈栅栏状或Y、V等形状。
棒状杆菌特 点 革兰阳性,菌体一端或两端膨大呈棒状。菌体染色不均匀,出现节段染色或异染颗粒;排列常呈栅栏状或Y、V等形状。 主要菌种:白喉棒状杆菌、假白喉棒状杆菌、干燥棒状杆菌等。引起人类致病的主要是白喉棒状杆菌。

42 形态与染色 一、生物学性状 形态:菌体细长微弯,一端 或两端膨大呈棒状; 排列:不规则,常成V、L 及栅栏状。 染色性:G+
美蓝染色:菌体着色不均, 有浓染颗粒。 Neisser /Albert染色:有异染颗粒。 白喉棒状杆菌

43 培 养 特 性 抵 抗 力 Loffler(吕氏)血清斜面上生长迅速,12~18小时生成细小、灰白色、湿润、圆形凸起的菌落。
鉴别培养基:亚碲酸钾血琼脂平板上,菌落呈黑色。 抵 抗 力 对湿热抵抗力不强,但对寒冷和干燥抵抗力强。 对青霉素、氯霉素、红霉素敏感。 白喉棒状杆菌

44 致病性 二、致病性与免疫性 溶原性转换 致病物质:白喉外毒素

45 Electron micrograph of corynebacteriophage ß, which carries tox

46 白喉外毒素 催化功能区 A片段 受体结合功能区 B片段 穿膜功能区

47 Diphtheria Toxin (DT) Cleaved to yield A/B fragment, joined by S-S bond - A (catalytic domain) - B (transmembrane and receptor binding domains)

48 Pathogenesis

49 白喉外毒素 作用机制 A片段 B片段 A片段灭活延长因子

50 外毒素入血造成毒血症并到达易感细胞——神经系统、心脏、肾脏等。
所致疾病:白喉 外毒素入血造成毒血症并到达易感细胞——神经系统、心脏、肾脏等。 细菌局部繁 殖部位,形 成灰白色的 假膜。

51 Thick grey ‘pseudomembrane’ composed of
fibrin, epithelial cells, bacteria and polymorph neutrophils Pseudomembrane may cause blockage, suffocation

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53 The cervical lymph nodes enlarge causing oedema of the neck (a classical condition of ‘bullneck’)

54 传播途径:飞沫、接触被污染的物品 传染源:患者和带菌者 皮肤白喉 咽白喉 咽炎 假膜阻塞性缺氧 发热 淋巴结炎 循环并发症: 毒性外周神经病、 毒性心肌炎和充血性心衰 致病性

55 Elek immunodiffusion test.

56 免 疫 性 Schick test结果分析 病后可产生牢固的免疫,抗毒素是保护性抗体。 原理:毒素抗毒素的中和作用原理 试验侧 对照侧 本质
试验侧 对照侧 本质 阴性反应 – – 有免疫力 阳性反应 24~48h , 4 ~ 7d达峰 – 无免疫力 假阳性反应 6~18h红肿,1~2d消退 同前 有免疫力,超敏反应 混合反应 6~18h红肿, ~18h红肿 免疫力,超敏反应 4~7d达峰 ~4d反应消退 原理:毒素抗毒素的中和作用原理

57 三、微生物学检查法 标本 直接涂片镜检:可作初步诊断 分离培养 毒力试验: 1、体外法:SPA协同凝集反应 2、体内法:动物(豚鼠)试验
白喉棒状杆菌

58 对照 试验 试验前腹腔注射白喉抗毒素 U 皮下注射待检菌的48h培养液 白喉棒状杆菌

59 四、防 治 原 则 人工主动免疫 人工被动免疫 药物预防:青霉素、红霉素、氯霉素 抗毒素治疗 白喉棒状杆菌

60 嗜肺军团菌 Legionella pneumophila

61 嗜肺军团菌 生物学性状 1976年新发现的菌属。各种天然水源及冷、热水管道系统(如自来水、空调系统、冷却水塔)是本菌的储存场所。
G--杆形菌,有菌毛和单端鞭毛。 用Dieterle镀银法(黑褐色)或Giemsa法染色(红色) 需氧菌,营养要求较苛刻,且生长缓慢

62 嗜肺军团菌

63 致病性与免疫性 所致疾病:军团病。 有流感型、肺炎型和肺外型3种类型 主要通过呼吸道吸入带菌飞沫而感染。多流行于夏秋季。
嗜肺军团菌 致病性与免疫性 所致疾病:军团病。 有流感型、肺炎型和肺外型3种类型 主要通过呼吸道吸入带菌飞沫而感染。多流行于夏秋季。 主要症状:发热、寒颤、咳嗽、咳痰、胸痛、呼吸困难及腹泻等。 。 军团菌是胞内寄生菌,细胞免疫为主。

64 Legionella pneumophila
Legionnaire's disease pneumonia fatal if not treated erythromycin Pontiac fever flu-like milder self-limiting myalgia (muscle pain) no pneumonia

65 流感嗜血杆菌(H.influenzae) 流感嗜血杆菌(H.influenzae)是一类革兰阴性小杆菌,常呈多形态性在人工培养时需新鲜血液才能生长(生长需要X和V因子)巧克力色平板上生长较佳。 当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在血平板上共同孵育时,出现卫星现象。

66 当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌在血平板上共同孵育时,出现卫星现象。
satellite phenomenon

67 肺炎克雷伯菌

68 请思考! 1、名词解释: 白喉外毒素、卡介苗、OT试验、传染性免疫(有菌免疫) 2、简述白喉棒状杆菌的致病性与特异性防治。
3、简述结核分枝杆菌的菌体成分与染色性、培养特性、抵 抗力、致病性等的关系。 4、简述OT试验的原理、结果分析及意义。 5、简述麻风杆菌的致病特点和微生物学诊断原则。


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