第四章 药物定量分析与分析方法验证.

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1 第四章 药物定量分析与分析方法验证

2 第一节 定量分析样品的前处理方法 一.概述 含金属或卤素的药物，在分析前需要经过不同方法处理后，方可进行测定。处理方法因金属或卤素在分子中结合的牢固程度而异。 有机卤素药物，所含卤素原子均直接与碳原子相连。如卤素和芳环相连接，则结合牢固，与脂肪链的碳原子相连接，则结合不牢固。

3 含金属的有机药物：一是金属原子不直接与碳原子相连，通常为有机酸及酚的金属盐或配位化合物，称为含金属的有机药物，其分子结构中的金属原子结合不够牢固；二是金属原子直接与碳原子以共价键相连接，结合状态比较牢，称为有机金属药物，如卡巴胂、醋酸苯汞、汞撒利，在溶液中一般不解离成离子状态，应该根据共价键的牢固程度，经适当处理，将其金属转变为适于分析的状态，方可进行其金属的鉴别或含量测定。

4 含金属的有机药物： 酒石酸锑钾

5 硬脂酸镁 富马酸亚铁

6 葡萄糖酸锑钠

7 卡巴胂 醋酸苯汞

8 汞撒利

9 含卤素的药物 三氯叔丁醇 六氯对二甲苯

10 泛影酸

11 胆影酸

12 碘他拉酸

13 碘番酸

14 I 碘苯酯

15 盐酸胺碘酮

16 诺氟沙星

17 醋酸氟轻松

18 磺溴酞钠

19 二、分析方法： （一） 不经有机破坏的分析方法： ①直接测定法 凡金属原子不直接与碳原子相连的含金属药物或某些C-M（金属原子直接与碳原子相连）键结合不牢固的有机金属药物，在水溶液中可以电离，可选用本法。

20 富马酸亚铁的含量测定 ChP (2000) 取本品约0.3g，精密称定，加稀硫酸 15ml，加热溶解后，放冷，加新沸过的冷水50ml与邻二氮菲指示液2 滴，立即用硫酸铈滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml硫酸铈滴定液(0.1mol/L)相当于16.99mg。

21 原理 O C H ˉ + Fe2+ Fe Ce Ce Fe2+ Fe2+ + e- Fe3+ 红色 浅蓝色

22 例 葡萄糖酸锑钠的测定 ChP（2000） 取本品约0.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加水100ml、盐酸15ml与碘化钾试液10ml，密塞、振摇后，在暗处静置10min，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于6.088mg的Sb。

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24 如枸橼酸铁铵的测定 ChP（2000） 取本品约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中。加水15ml溶解后，加硫酸lml，加热至溶液由暗棕色变成淡黄色，放冷至约15℃，滴加高锰酸钾试液至溶液显粉红色并持续5s，加盐酸15ml与碘化钾试液15ml，密塞，静置3min，加水50ml稀释后，用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于5.585mg的Fe。

25 ②经水解后测定法 1.直接回流后测定法 是将含卤素的有机药物溶于适当溶剂（如乙醇）中，加氢氧化钠溶液或硝酸银溶液后，加热回流使其水解，将有机结合的卤素经水解作用转变为无机的卤素离子，然后选用间接银量法进行测定。本法适用于含卤素有机药物结构中卤素原子结合不牢固的药物，如卤素和脂肪碳链相连者。

26 例:三氯叔丁醇的测定 三氯叔丁醇在氢氧化钠溶液中加热回流水解，氯元素全部转变成氯化钠，然后用剩余滴定法，即于水解液中加硝酸酸化，再加入定量过量的硝酸银滴定液，使Cl-生成AgCl沉淀，过量的硝酸银，以Fe3+为指示剂，用硫氰酸铵液回滴定。

27 CCl3-C(CH3)2-OH + 4NaOH NaCl + AgNO3 AgCl↓ + NaNO3 (Ksp=1.56×10–10 )
△ 回流 (CH3)2-CO + 3NaCl + HCOONa + 2H2O NaCl + AgNO3 AgCl↓ + NaNO3 (Ksp=1.56×10–10 ) AgNO3 + NH4SCN AgSCN ↓ + NH4NO3 (Ksp=1.0×10-12 ) Fe SCNˉ Fe (SCN) 2+ （淡棕红色）

28 测定方法 取本品约0.1g，精密称定，加乙醇5ml溶解后，加20%氢氧化钠溶液5ml，加热回流15min，放冷至室温，加水20ml与硝酸5ml，精密加硝酸银滴定液(0.1mol/L) 30ml，再加邻苯二甲酸二丁酯5ml，密塞，强力振摇后，加硫酸铁胺指示液2ml，用硫氰酸胺滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于6.216mg的C4H7Cl3O·1/2H2O。

29 反应摩尔比为1∶3 T——滴定度，每1ml滴定液相当于被测组分的mg数 c——滴定液浓度，mol/L M——被测物的摩尔质量，g/mol
n——1mol样品消耗滴定液的摩尔数，常用反应摩尔比体现，即反应摩尔比为1∶n

30 2.用硫酸水解后测定法 例 硬脂酸镁的测定 ChP（2000） 取本品约0.1g，精密称定，精密加硫酸滴定液(0.05mol/L) 50ml，煮沸至油滴澄清，继续加热10min，放冷至室温，加甲基橙指示液1~ 2滴，用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硫酸滴定液(0.05mol/L)相当于2.016mg的MgO。

31 原理： Mg(C17 H35COO)2 + H2SO4 MgSO4 + 2 C17 H35COOH 2NaOH + H2SO4
△ MgSO C17 H35COOH 2NaOH + H2SO4 Na2SO4 + 2H2O

32 某些含汞有机药物，由于C—Hg键不牢固，在水溶液（冰浴）中滴加硫酸使其水解，将有机汞定量转化成硫酸汞，再用硫氰酸铵滴定液滴定。

33 例 汞撒利的测定 取本品约0.5g，精密称定，加蒸馏水10ml，置冰浴中，滴加硫酸10ml，随滴随搅拌，至产生的沉淀复溶解，再加蒸馏水50ml，硫酸铁铵指示液2ml，用硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)相当于25.29mg的汞撒利。

34 ③经氧化还原后测定法 1.碱性还原后测定 卤素结合于芳环上时，由于分子中碘的结合较牢固，需在碱性溶液中加还原剂（如锌粉）回流，使碳-碘键断裂，形成无机碘化物后测定。 2.酸性还原后测定法

35 两法均是将含卤素有机药物在碱性或酸性下，加还原剂（如锌粉）加热回流，药物产生还原裂解反应，使有机结合的卤素转变为无机的卤素离子，然后采用银量法（Fajans法）测定。

36 碱性还原后测定法例 泛影酸的测定 ChP (2000)
取本品约0.4g，精密称定，加氢氧化钠溶液30ml与锌粉1.0g，加热回流30min，放冷，冷凝管用少量水洗涤，滤过，烧瓶与滤器用水洗涤3次，每次15ml，洗液与滤液合并，加冰醋酸5ml与曙红钠指示液5滴，用硝酸银滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于20.46mg的C11H9 I 3N2O4。

37 回流 + 11NaOH + Zn + 3NaI + 2CH3COONa △ + 2Na2ZnO2 + H2O C O H I N 3 Na

38 经还原--汞齐化后测定法（含汞有机药物的含量测定）
本法系在酸性或碱性溶液中，加锌粉、加热回流，将药物中有机结合的汞还原析出金属汞，并与过量的锌生成锌汞齐。将锌汞齐溶于硝酸后，选用适当的方法测定汞的含量，并换算成含汞有机药物的含量。

39 如醋酸苯汞的含量测定 取本品约0.5g，精密称定，置100ml烧瓶中，加水15ml，甲酸5ml与锌粉1g，附回流冷凝器，煮沸30min。放冷，滤过，滤纸和锌汞齐用蒸馏水洗涤至洗液对石蕊试纸不显酸性反应。将锌汞齐溶解在稀硝酸(1∶2)40ml中，置蒸气浴上加热3min，加尿素0.5g和足够的高锰酸钾试液至显桃红色。冷却后，加过氧化氢溶液脱色，加硫酸铁铵指示剂lml，用硫氰酸铵滴定液(0.1mol/L)滴定，即得。每1ml硫氰酸铵液(0.1mol/1)相当于16.84mg的C8H8O2Hg。

40 3.利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量，例如含锑和含铁的药物，在酸性溶液中可游离出具有氧化性的Sb5+ 、Fe3+氧化碘化钾析出碘，用硫代硫酸钠滴定。（间接碘量法）。

41 三、经有机破坏的分析方法 金属原子、卤素与碳原子结合牢固者必须采用有机破坏的方法将药物分子破坏，转变为无机化合物。有机破坏方法，一般包括湿法破坏、干法破坏及氧瓶燃烧法三种方法。 （一）湿法破坏

42 根据所用试剂的不同，湿法破坏可分为以下几种： 1
根据所用试剂的不同，湿法破坏可分为以下几种： 硝酸-高氯酸法本法破坏能力强，反应比较激烈。故进行破坏时，必须严密注意切勿将容器中的内容物蒸干，以免发生爆炸。 本法适用于血、尿、组织等生物样品的破坏。经本法破坏后，所得的无机金属离子，一般为高价态。本法对含氮杂环药物的破坏不够完全，此时宜选用干法灼烧进行破坏。

43 2.硝酸一硫酸法本法适用于大多数有机物质的破坏，如染料、中间体或药物等。经本法破坏分解所得的无机金属离子均为高价态。 因碱金属可与硫酸形成不溶性的硫酸盐，将会吸附被测定的金属离子，使测定的结果偏低。所以本法不适用于含碱土金属有机药物的破坏。此时，可改用硝酸一高氯酸法进行破坏。

44 3. 硫酸一硫酸盐法本法所用硫酸盐为硫酸钾或硫酸钠，因硫酸钠为含水化合物，不利于有机破坏，故一般多采用硫酸钾。 加入硫酸盐的目的： 1
3.硫酸一硫酸盐法本法所用硫酸盐为硫酸钾或硫酸钠，因硫酸钠为含水化合物，不利于有机破坏，故一般多采用硫酸钾。 加入硫酸盐的目的： 1.为了提高硫酸的沸点，以使样品破坏完全。 2.防止硫酸在加热过程中过早地分解为三氧化硫而损失。 经本法破坏分解所得的金属离子，多为低价态。本法常用于含砷或锑有机药物的破坏分解。

45 4.其它湿法 硝酸一硫酸一高氯酸法 硫酸一过氧化氢法 硫酸一高锰酸钾法等 其根据都是增加氧化剂。硫酸加氧化剂，加热，使有机物破坏分解完全，破坏后，金属在溶液中均以高价态存在。

46 注意事项： 1. 湿法破坏所用的仪器，一般为硅玻璃或硼玻璃制成的凯氏烧瓶； 2
注意事项： 1.湿法破坏所用的仪器，一般为硅玻璃或硼玻璃制成的凯氏烧瓶； 2.所用试剂及蒸馏水均不应含有被测金属离子或干扰测定的其他金属离子等组分； 3.由于整个操作过程所用矿酸量数倍于样品，所以必须按相同条件进行空白试验校正； 4.操作时应在通风橱内进行。

47 样品的取用量，应视被测含金属有机药物中所含金属元素的量和破坏后所用测定方法而定。一般来说，含金属元素量在10μg一100μg范围内时，取样量为10g;如果测定方法灵敏度较高，取样量可相应减少。对于生物样品，一般血样10ml一15ml或尿样50ml。

48 （二）干法破坏 本法系将有机物灼烧灰化以达分解的目的。将适量样品置于瓷、镍、铂坩埚中，常加无水碳酸钠或轻质氧化镁等以助灰化，混合均匀后，先小火加热，使样品完全炭化，然后放入高温炉中灼烧，使其灰化完全，即可。

49 应用本法时要注意以下几个问题： ①加热或灼烧时，应控制温度在420℃以下，以防止某些被测金属花合物的挥发。 ②经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，但此时切勿弃去。 ③灰化完全与否，直接彭响侧定结果的准确性。

50 本法适用于湿法不易破坏完全的有机物（如含氮杂环类有机药物）以及某些不能用硫酸进行破坏的有机药物。 不适用于含易挥发性金属（如汞、砷等）有机药物的破坏。

51 （三）氧瓶燃烧法 氧瓶燃烧法（oxygen flask combustion method)系将有机药物放入充满氧气的密闭的燃烧瓶中进行燃烧，并将燃烧所产生的欲测物质吸收于适当的吸收液中，然后根据欲测物质的性质，采用适宜的分析方法进行鉴别、检查或测定含卤素有机药物或含硫、氮、硒等其它元素的有机药物。

52 本法特点是简便、快速、破坏完全，尤其适用于微量样品的分析。

53 （1） 仪器与材料 ①仪器装置 燃烧瓶为500、1000或2000ml无色、磨口、厚壁、硬质玻璃锥型瓶；瓶塞空心，底部熔封铂丝一根，下端呈螺旋状或网状

54 C. 软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹
②称样用材料及称样 A. 固体样品 无灰滤纸 B. 液体样品 纸袋 C. 软膏类样品：将适量样品置不含被测成分的蜡油纸中包裹严密，外层再用无灰滤纸包裹 ③氧气

55 氧瓶燃烧法装置与样品包装操作图

56 ④吸收液的选择 氯 NaOH溶液 溴 H2O2-NaOH NaOH-硫酸肼饱和溶液 碘 NaOH－硫酸肼饱和溶液 硫 NaOH或H2O2
吸收液可使样品经燃烧分解所产生的各种价态的卤素，定量地被吸收并使其转变为一定的便于测定的价态，以适应所选择的分析方法。 氟 水 氯 NaOH溶液 溴 H2O2-NaOH NaOH-硫酸肼饱和溶液 碘 NaOH－硫酸肼饱和溶液 硫 NaOH或H2O2 硒 硝酸溶液

57 （2）操作方法 ①燃烧瓶燃烧前的准备 用洗液洗净后，按各药品项下的规定加入吸收液，将瓶口用水湿润，小心急速地通入氧气1min，立即用表面皿覆盖瓶口。 ②样品的准备 取样品适量，精密称定后按规定方法包裹，固定于铂丝下端的网内或螺旋处。

58 ③样品的燃烧 点燃包有供试品的滤纸尾部，迅速放入燃烧瓶中，按紧瓶塞，加水少量封闭瓶口，俟燃烧完毕（应无黑色碎片），充分振摇，使生成的烟雾完全吸入吸收液中，放置15min，用水少量冲洗瓶塞及铂丝，合并洗液及吸收液，同法另做空白试验。然后按各药品项下规定的方法进行鉴别、检查或含量测定。

59 （3）注意事项 ①根据被燃烧分解的样品量选用适宜大小的燃烧瓶。 ChP（2000）规定的燃烧瓶体积为500、1000或2000ml三种，采用常量或半微量分析

60 待分解样品量 燃烧瓶的体积 3~5mg（微量分析） 150~250ml 20~30mg（半微量分析） 300~500ml 50~60mg 1000ml 0.6~0.7g或更多 2000ml或特殊结构的燃烧瓶

61 正确选用燃烧瓶的目的在于： 样品能在足够的氧气中燃烧分解完全； 有利于将燃烧分解产物较快地吸收到吸收液中； 防止爆炸的可能性。

62 ②测定含氟有机药物时，用石英制 燃烧瓶 ③铂丝燃烧时起催化作用 ④应同时做空白试验 ⑤燃烧时要注意防爆 ⑥燃烧要完全 ⑦燃烧产生的烟雾完全被吸收

63 （4）应用 例 磺溴酞钠的含量测定 ChP (2000)

64 燃烧分解 O2 HBr + S2- + SO4 + … HBr + S NaBr + Na2SO4 + H2O NaOH, H2O2

65 溴 取本品约0. 2g，照氧瓶燃烧法（附录Ⅶ C）进行有机破坏，选用1000ml燃烧瓶，以0. 4%氢氧化钠溶液10ml，浓过氧化氢溶液0
溴 取本品约0.2g，照氧瓶燃烧法（附录Ⅶ C）进行有机破坏，选用1000ml燃烧瓶，以0.4%氢氧化钠溶液10ml，浓过氧化氢溶液0.5ml与水10ml作为吸收液，俟生成的烟雾完全吸入吸收液后，用水稀释至100ml，煮沸5分钟，放冷，加稀硝酸使成酸性，精密加硝酸银滴定液（0.1mol/l）20ml，摇匀，再加硫酸铁胺指示液2mL，用硫氰酸胺滴定液(0.1mol/L)滴定，并将滴定的结果用空白试验校正。每1mL硝酸银滴定液(0.1mol/L)相当于7.990mg的溴(Br)。

66 例 碘苯酯的含量测定 ChP（2000） 原理 碘苯酯系有机碘化物，用氧瓶燃烧分解，转变为碘化物，继而氧化为游离的碘，并被定量地吸收于吸收液中，和氢氧化钠反应，生成碘化物与碘酸盐，加入溴-醋酸溶液，使全部转变为碘酸盐，过量的溴以甲酸及通空气去除。加入碘化钾，使与碘酸盐反应析出游离碘，用硫代硫酸钠液滴定，碘与淀粉结合所显的蓝色消失即为终点。

67 取本品约20mg，精密称定，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用氢氧化钠试液2ml与水l0ml为吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液(取醋酸钾10g，加冰醋酸适量使溶解，加溴0.4ml，再加冰醋酸使成1000m1)l0ml，密塞，振摇，放置数分钟，加甲酸约lml，用水洗涤瓶口，并通入空气流约3～5min以除去剩余的溴蒸气，加碘化钾2g，密塞，摇匀，用硫代硫酸钠滴定液(0.02 Mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每lml的硫代硫酸钠滴定液(0.02mol/L)相当于1.388mg的C19H29IO2。

68 1molNaIO→1/3molNaIO3+2/3molNaI
滴定度的计算 放大反应 2mol碘苯酯→1molI2 1molI2→1molNaIO+1molNaI 1molNaIO→1/3molNaIO3+2/3molNaI molNaI+Br2→ molNaIO3 即2mol碘苯酯→2molNaIO3

69 2mol NaIO3+10I-→6molI2 即2mol碘苯酯→1molI2 →6molI2→12molI→12molNa2S2O3 反应摩尔比为1∶6

70 98：140. 氧瓶燃烧法中的装置有 A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 磨口软质玻璃锥形瓶 C. 铂丝 D. 铁丝 E. 铝丝

71 96：133（99x：138）．选择氧瓶燃烧法所必备的实验物品
A. 磨口硬质玻璃锥形瓶 B. 铂丝 C. 普通滤纸 D. 氢气 E. 无灰滤纸

72 99：76．氧瓶燃烧法测定含氯有机药物时所用的吸收液多数为
A. H2O2溶液 B. H2O2—NaOH溶液 C. NaOH溶液 D．硫酸肼饱和液 E. NaOH—硫酸肼饱和液

73 99：134. 氧瓶燃烧法可用于 A. 含卤素有机药物的含量测定 B. 醚类药物的含量测定 C. 检查甾体激素类药物中的氟 D. 检查甾体激素类药物中的硒 E. 芳酸类药物的含量测定