Rapamycin attenuates mitochondrial dysfunction via activation of mitophagy in experimental ischemic stroke Qiang Li a,b,1, Ting Zhang a,1, Jixian Wang.

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1 Rapamycin attenuates mitochondrial dysfunction via activation of mitophagy in experimental ischemic stroke Qiang Li a,b,1, Ting Zhang a,1, Jixian Wang c,d, Zhijun Zhang d, Yu Zhai b, Guo-Yuan Yang c,d,⇑ Xiaojiang Sun a,⇑ a Department of Neurology, Shanghai Sixth People’s Hospital, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai , China b Department of Neurology, Shanghai Ninth People’s Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, Shanghai , Chinac Department of Neurology, Ruijin Hospital, Shanghai Jiao Tong University School of Medicine, Shanghai , Chinad Med-X Research Institute and School of Biomedical Engineering, Shanghai Jiao Tong University, Shanghai , China 朱韵 生物科学 Q. Li et al. / Biochemical and Biophysical Research Communications 444 (2014) 182–188

2 Background 综上，本文就是研究RAPA通过激活线粒体自噬来缓解在由大脑缺血后引起的线粒体功能障碍
2011、2012年有实验表明，线粒体自噬可以缓解由缺血损伤导致的线粒体受损、线粒体功能障碍等。 2011、2012年有实验表明，可以通过增强线粒体自噬缓解心脏缺血损伤。 然而相似的，针对大脑缺血受损的实验没人做过。 2010年有实验表明，雷帕霉素（RAPA）可以通过激活自噬来缓解多种神经退行性疾病。 然而在雷帕霉素调节线粒体自噬和调节线粒体功能障碍没有研究 综上，本文就是研究RAPA通过激活线粒体自噬来缓解在由大脑缺血后引起的线粒体功能障碍

3 1 . Transient ischemia induced autophagy and mitophagy
Q. Li et al. / Biochemical and Biophysical Research Communications 444 (2014) 182–188

4 Figure 1注解： 暂时性缺血诱导的自噬和线粒体自噬 A： LC3是细胞自噬的marker，用双染的方法研究在不同种类神经细胞的定位，其中Neun为神经特异性核蛋白，GFAP为神经胶质纤维蛋白。 B: 电镜下观察线粒体自噬的发生，每个小图分别是自噬小泡逐渐发生吞噬的过程。 C： 线粒体碎片的LC3水平。Actin 和cox 分别为内参。

5 2. Rapamycin enhanced mitophagy
Q. Li et al. / Biochemical and Biophysical Research Communications 444 (2014) 182–188

6 Figure 2注解： A、B： C、D： 说明RAPA增强了P62从胞质到线粒体的转移。 RAPA增强线粒体自噬 Veh为溶媒对照组。
3-MA（三甲基腺嘌呤），可以拮抗RAPA的效应。 Beclin-1 可与脂酶Vps34互作，参与自噬成核。 C、D： P62能连接泛素化的线粒体与LC3，也可以作为线粒体自噬的marker。 P62在线粒体碎片中含量上升，在胞质中减少。 说明RAPA增强了P62从胞质到线粒体的转移。

7 3. Rapamycin improved mitochondrial function
Q. Li et al. / Biochemical and Biophysical Research Communications 444 (2014) 182–188

8 Figure 3注解： 说明RAPA对线粒体功能的作用与激活线粒体自噬有关 RAPA增强线粒体功能
膜电位，MDA（丙二醛）都可以作为线粒体活性的指标。 ATP水平，可以作为细胞死亡的指标。 说明RAPA对线粒体功能的作用与激活线粒体自噬有关

9 4. Rapamycin attenuated brain injury after tMCAO
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10 Figure 4注解： 通过测量不同的指标和手段，验证RAPA的效用。 RAPA缓解了由瞬时大脑中动脉闭塞造成的损伤
TTC染色：TTC（2，3，5—氯化三苯基四氮唑）是脂溶性光敏感复合物，它与正常组织的脱氢酶反应呈红色，由于缺血组织脱氢酶活性低，不反应呈白色。 通过测量不同的指标和手段，验证RAPA的效用。

11 谢谢