实验十七 某些中草药酒精浸出液对乳酸细菌生长的影响

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1 实验十七 某些中草药酒精浸出液对乳酸细菌生长的影响
版权所有 未经作者同意请勿使用 实验十七 某些中草药酒精浸出液对乳酸细菌生长的影响 一、实验背景及目的： 乳酸细菌是人及动物肠道正常菌群中的一类益生菌。 生活在人及动物消化道，特别是肠道中的正常菌群有很多有益的作用，包括排阻、抑制外来致病菌，提供维生素等营养，产生淀粉酶、蛋白酶等有助于消化的酶类，分解有毒或致癌物，产生有机酸、降低肠道的pH值和促进肠道的蠕动，刺激机体的免疫系统并提高其免疫力，在一定程度的固氮作用等。 版权所有 未经作者同意 请勿使用

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版权所有 未经作者同意请勿使用 实验十七 某些中草药酒精浸出液对乳酸细菌生长的影响 本实验采用正交试验法考察某些中草药的酒精浸出液对分离自自制泡菜中乳酸细菌的生长的影响。 1.学习泡菜的制作及从泡菜中分离乳酸细菌的方法和技巧； 2.采用正交试验法，考察某些中草药的酒精浸出液对分离自自制泡菜中乳酸细菌的生长的影响。并初步了解筛选微生物最佳发酵条件的试验方法。 版权所有 未经作者同意 请勿使用

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版权所有 未经作者同意请勿使用 实验十七 某些中草药酒精浸出液对乳酸细菌生长的影响 二、实验原理： 泡菜是一种经乳酸细菌厌氧发酵后制成的酸渍性风味蔬菜，在我国民间广泛食用，历史悠久。 泡菜制作过程实际上是一个乳酸细菌选择培养过程，其中的选择性措施主要有：（1）适量加糖：以促使乳酸细菌的生长；（2）隔绝空气：创造有利于乳酸细菌生长和抑制好氧性杂菌生长的厌氧环境；（3）适当加盐：抑制部分不耐盐的杂菌。 版权所有 未经作者同意 请勿使用

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版权所有 未经作者同意请勿使用 实验十七 某些中草药酒精浸出液对乳酸细菌生长的影响 泡菜发酵过程一般经历三个阶段：微酸阶段、酸化阶段和过酸阶段。 泡菜发酵一般在密封容器中进行。 从自制泡菜中分离乳酸细菌的培养基很多。 本实验采用溴甲酚紫固体培养基（BCP琼脂培养基）。 用BCP琼脂培养基分离乳酸细菌时，可根据菌落周围培养基颜色的变化（由紫变黄）和菌落形态（乳酸细菌的菌落一般为针尖状）分离、纯化出乳酸细菌。 版权所有 未经作者同意 请勿使用

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版权所有 未经作者同意请勿使用 实验十七 某些中草药酒精浸出液对乳酸细菌生长的影响 乳酸细菌为革兰氏阳性，球状或杆状，无芽孢，不运动，分解和合成能力较差，营养要求较高，分离及培养时需提供丰富的肽类、氨基酸和维生素等营养成分。乳酸细菌缺乏呼吸链的成分、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶。影响微生物生长的因素很多，如：温度、pH值、氧、培养基营养成分等。 在其他因素不变的条件下，培养基的营养成分的组成对微生物的生长有一定的影响。 版权所有 未经作者同意 请勿使用

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版权所有 未经作者同意请勿使用 实验十七 某些中草药酒精浸出液对乳酸细菌生长的影响 筛选适宜某类微生物生长的较佳的营养成分配比的培养基，是一项工作量颇大、较繁琐的试验工作。 采用数理统计的方法（如：正交试验法），可以大大减少试验的工作量，通过少量的试验，即可方便、快捷的得到优化的培养基的组成和各成分的配比。 本实验项目内容涵盖了微生物学和微生物学实验中的微生物的发酵、选择性培养、微生物的分离、纯化、目的微生物基本特性的检测等，结合数理统计方法完成实验项目。 本实验项目是一综合设计性实验项目。 版权所有 未经作者同意 请勿使用

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版权所有 未经作者同意请勿使用 实验十七 某些中草药酒精浸出液对乳酸细菌生长的影响 三、实验材料： 1. 材料：甘蓝（包心菜）、胡萝卜、黄瓜、蔗糖、食盐等； 2. 培养基：BCP琼脂培养基，BCP液体培养基； BCP液体培养基分装： ×180试管，按表17-2正交试验表头设计分别加入竹叶酒精浸出液（A因素）和砂仁酒精浸出液（B因素），使每支试管培养基及中药酒精浸出液装入量为10ml，每支试管中倒置一杜氏小管，共九支。112℃，灭菌20分钟。 版权所有 未经作者同意 请勿使用

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版权所有 未经作者同意请勿使用 实验十七 某些中草药酒精浸出液对乳酸细菌生长的影响 ×150试管10支，每管4ml，每支试管中倒置一杜氏小管。112℃，灭菌20分钟。 3. 器皿：锥形瓶、培养皿、试管、移液管、pH试纸、砧板、菜刀等； 4.试剂：革兰氏染色液、展开剂：正丁醇：甲酸：蒸馏水=16：3：1、显色剂：0.1%溴酚兰碱性醇溶液等； 版权所有 未经作者同意 请勿使用

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版权所有 未经作者同意请勿使用 实验十七 某些中草药酒精浸出液对乳酸细菌生长的影响 四、实验步骤及方法： 1.泡菜制作： 1.1 配制5%食盐和3%蔗糖液，装锥形瓶，灭菌备用； 1.2 选择新鲜蔬菜，洗净，切成3～5厘米条状放入1.1锥形瓶中，密封瓶口，置于28℃温箱中，保温7天； 版权所有 未经作者同意 请勿使用

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版权所有 未经作者同意请勿使用 实验十七 某些中草药酒精浸出液对乳酸细菌生长的影响 2.乳酸细菌分离： 2.1 取发酵7天的泡菜液，用无菌水作10倍系列稀释，稀释至10-7。取10-5、10-6、10-7、泡菜稀释液各0.2ml，涂布到BCP培养基平板。37℃，培养48小时； 2.2 培养48小时后，选取针尖状、菌落周围培养基呈黄色的菌落移至加有杜氏小管的BCP液体培养基试管，37℃，培养48小时； 2.3 取液体培养基分离菌种，做革兰氏染色，确认为G+、无芽孢的球或杆菌。 版权所有 未经作者同意 请勿使用

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版权所有 未经作者同意请勿使用 实验十七 某些中草药酒精浸出液对乳酸细菌生长的影响 同时检测泡菜液中有机酸的种类（可用纸层析法），若结果只有乳酸一种有机酸且杜氏小管中无气泡，可初步确定分离菌株为同型乳酸发酵细菌； 3.正交试验： 3.1.中草药酒精浸出液制备：分别称取竹叶、砂仁两种中草药各4g，分别用100ml40%的酒精浸泡，备用； 3.2 正交试验的因素及水平见表17-1： 3.3 正交试验表头设计及正交试验安排见表17-2： 版权所有 未经作者同意 请勿使用

12 实验十七 某些中草药酒精浸出液对乳酸细菌生长的影响
版权所有 未经作者同意请勿使用 实验十七 某些中草药酒精浸出液对乳酸细菌生长的影响 表17-1 A 竹叶酒精液（ml/100ml） B 砂仁酒精液(ml/100ml) 1 2 3 4 版权所有 未经作者同意 请勿使用

13 实验十七 某些中草药酒精浸出液对乳酸细菌生长的影响
版权所有 未经作者同意请勿使用 实验十七 某些中草药酒精浸出液对乳酸细菌生长的影响 表17-2 A 1 B 2 3 4 试验结果 （cfu/ml） 培养基变 色时间(h) 5 6 7 8 9 Ⅰ Ⅱ Ⅲ 版权所有 未经作者同意 请勿使用

14 实验十七 某些中草药酒精浸出液对乳酸细菌生长的影响
版权所有 未经作者同意请勿使用 实验十七 某些中草药酒精浸出液对乳酸细菌生长的影响 3.4 向每支正交试验用试管中加入0.1ml分离到的乳酸细菌菌液，摇匀，37℃，培养； 4.菌落计数：各正交试验培养液分别做适当稀释，用平板菌落计数法计数菌数，并作数理统计分析； 版权所有 未经作者同意 请勿使用

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版权所有 未经作者同意请勿使用 实验十七 某些中草药酒精浸出液对乳酸细菌生长的影响 五、结果、讨论： 1.记录自制泡菜的pH值及物理外观特性； 2.描述分离到的乳酸细菌的菌落及细胞形态特征； 3.根据正交试验的结果及数据分析，确定供试中草药酒精浸出液对乳酸细菌生长的作用及影响。 版权所有 未经作者同意 请勿使用

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