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第三章 血型与输血(2) 魏彦刚 菏泽医学专科学校
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三、Rh血型系统 Rh阳性:含D抗原的红细胞 Rh阴性:不含D抗原的红细胞 汉族人中Rh阴性率﹤1%
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(一)Rh血型系统抗体 1. Rh抗体的产生 Rh抗体绝大多数是通过Rh血型不合输血或妊娠产生的免疫性抗体,这些抗体均为IgG
2. Rh抗体的种类 主要有5种,即抗D、抗E、抗C、抗c、抗e,最常见的是抗D,凡被检红细胞和抗D血清凝集者为Rh阳性,不凝集为Rh阴性 3. Rh抗体的特性 为免疫性抗体IgG
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(二)Rh血型鉴定方法及评价 1. 酶介质法 分为直接酶介质法、间接酶介质法
1. 酶介质法 分为直接酶介质法、间接酶介质法 2. 抗球蛋白试验(Coombs test) 分为直接抗球蛋白试验(DAT)和间接抗球蛋白试验(IAT) 3. 凝聚胺试验(polybrene test) 4. 人源盐水介质抗D试验 (临床应用广泛) 5. 低离子强度(盐)溶液试验
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1. 酶介质法 在酶处理下 IgG抗体可凝集RBC
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1. 酶介质法 阳性 阴性 37 ℃ 37℃ 水浴30分钟 离心 看结果
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2.抗球蛋白(Coombs)试验 DAT(直抗):直接检测红细胞表面有无不完全抗体吸附的试验。
IAT(间抗):通过体外致敏红细胞,再检测红细胞上有无不完全抗体吸附的试验。
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IgM抗体凝集RBC示意图 在盐水介质中
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在盐水介质中、 IgG抗体不凝集RBC
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2.抗球蛋白试验 抗球蛋白
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3.凝聚胺技术 原理 凝聚胺(Polybrene),一种高价阳离子季胺盐多聚物,溶解后能产生很多正电荷,可以中和红细胞表面的负电荷,使红细胞之间距离减少,能引起正常红细胞可逆性的非特异性凝集。如果是抗体致敏的红细胞被聚凝胺凝集,则凝集不可逆。
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在凝聚胺处理下 IgG抗体可凝集RBC
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4.人源盐水介质试验 临床应用广范 原理:加入蛋白变性剂,使IgG抗D抗体转变为类似大分子的“IgM”,在盐水中发生肉眼可见的凝集反应。
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当溶液中离子增多时,抗原抗体之间的静电作用力减弱
5.LISS(低离子强度溶液)的原理 抗原 非离子 静电作用力 抗体 离子 当溶液中离子增多时,抗原抗体之间的静电作用力减弱 当溶液中缺少离子时,抗原抗体之间的静电作用力较强
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(三)Rh血型鉴定的临床意义 1. 输血前的检查 2. 新生儿溶血病诊断 3. 协助治疗
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医院坚持验血后输血 失血孕妇苦等6小时逝去 稀有血型孕妇董明霞在引产时出现大出血,家属要求先输血救命并愿意承担一切后果,但医院坚持严格按照法律规定输血。经过6个多小时的焦虑等待,这位山东济阳的孕妇终于9日下午在山东大学齐鲁医院含恨死去。(齐鲁晚报- 2008年10月10日)
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血液中心冷冻库提供的4个单位(800ml)RH阴性O型血浆,每个单位按照常规最快也要3个小时才能解冻,且不能满足需要,只能临时从稀有血型志愿者中采集7个单位(1400ml)的血液,这样的血液又需要3个小时的检验,待其筹足之时,抢救的最佳时间已经过去 。
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尽管病人家属要求先输血救命并愿意承担一切后果,但医院仍坚持严格按照法律规定等到血液检验完毕才能输血。经过6个多小时等待后,引产大出血的济阳患者董明霞最终于9日下午不幸去世
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一个省会所在的大医院,为什么自己不备有RH阴性O型等稀有血浆?为什么不建立稀有血型志愿者队伍?在紧急情况下,为什么不及时组织稀有血志愿者紧急采集 ?
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四、红细胞血型系统交叉配血试验
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交叉配血试验的原理 交叉配血试验中红细胞血型抗原与相应抗体的凝集反应,可用盐水配血试验、酶介质试验 、抗球蛋白试验、凝聚胺试验、低离子强度溶液试验及微柱凝胶试验进行观察。
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盐水介质配血方法 阳性 阴性 患者 献血者 主侧 次侧 离心 看结果
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交叉配血试验(盐水配血法) 原理 :完全抗体分子链较长,在电解质学液中,能克服红细胞表面电荷排斥力,与相对应的抗原结合,使红细胞凝集,从而发现配血不合,有对应抗原抗体存在。 方法: 1、自被检者静脉采血2~3ml,分离血清,并配制5%红细胞悬液。 2、主侧:病人血清+献血员红细胞 次侧:献血员血清+病人红细胞 混匀,1000转/分,然后观察结果。
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报告方式: 交叉配合试验(**法) 受血者***(*)型血清+***(*)型红细胞不凝集,无溶血。 受血者***红细胞+***血清不凝集。无溶血 结果判断: 同型配血,主侧、次侧均不凝集,表示无配血禁忌,可以输血;异型配血时,主侧无凝集,无溶血,次侧凝集,但效价<1:64,无溶血,可以输给少量,如次侧不凝集时,应追查原因。
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大量交叉配血 献血员之间应进行交叉配备 如:献1血清+献2红细胞 献1红细胞+献2血清
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抗球蛋白配血方法 患者 37 ℃ 主侧 37℃ 水浴30分钟 三洗 次侧 献血者
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抗球蛋白方法配血方法 阳性 抗球蛋白试剂 上海市血液中心血 加抗球蛋白 离心 看结果 阴性
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酶介质配血方法 患者 献血者 主侧 次侧 酶 上海市血液中心血 主次侧 均加酶
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酶介质配血方法 阳性 阴性 37 ℃ 37℃ 水浴30分钟 离心 看结果
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凝聚胺技术 原理 凝聚胺(Polybrene),一种高价离子季胺盐多聚物,溶解后能产生很多正电荷,可以中和红细胞表面的负电荷,使红细胞之间距离减少,能引起正常红细胞可逆性的非特异性凝集。如果是抗体致敏的红细胞被聚凝胺凝集,则凝集不可逆。
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聚凝胺(Polybrene)配血方法 Polybrene 患者 主侧 室温放置 主次侧均 1 分钟 加聚凝胺 次侧 献血者
上海市血液中心血 室温放置 1 分钟 主次侧均 加聚凝胺
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聚凝胺(Polybrene)配血方法 阳性 阴性 重悬液 上海市血液中心血 离心 主次侧均 加重悬液 看结果 聚凝胺引起红细胞非特异性凝集
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基本操作方法 1、试管中加入待检血清或血浆1滴 2、加入用LIM溶液配置的2~3的红细胞悬液2~3滴 3、摇匀,室温放置1分钟(时间长,效果好) 4、加聚凝胺试剂1滴,混匀后3400rpm离心15秒 5、轻摇观察由聚凝胺引起的红细胞非特异性凝集,若未见红细胞凝集则需重做试验 6、加入1滴重悬液,轻摇观察结果 由聚凝胺引起的非特异性凝集应在1分钟内完全散开,若是由免疫抗体引起的凝集反应则不会散开
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微柱凝胶介质配血法 红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶介质中发生凝集发应
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凝胶试验使用的试剂和器材
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交叉配血试验的方法学评价 方法 优点 缺点 盐水配血试验 简单、快速 检不出IgG型抗体 酶介质试验 简便、经济 准确性、稳定性差
方法 优点 缺点 盐水配血试验 简单、快速 检不出IgG型抗体 酶介质试验 简便、经济 准确性、稳定性差 抗球蛋白试验 最准确、可靠 复杂、费时、试剂贵 凝聚胺试验 快速、准确 需特殊试剂及器材 微柱凝胶试验 灵敏 成本高
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交叉配血的质量保证 ①检测前:标本、试剂及实验器材的要求 ②检测中:工作态度严谨,高度责任感 ③检测后:标本存放7天以上
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交叉配血的临床意义 ① 保证输血安全 ② 发现亚型和不规则抗体
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第五节 新生儿溶血病
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(一)ABO新生儿溶血病 是由于母婴血型不合,母体的IgG抗A(B)经过胎盘进入胎儿血循环破坏胎儿红细胞所引起。
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ABO溶血症 父母血型匹配,子女才能优生。 如果父母血型不匹配,子女很可能得母婴血型不合溶血症。
此种溶血症主要发生在母亲为O型,婴儿为A型或B型者。所以也叫ABO溶血症。 父母血型匹配,子女才能优生。 如果父母血型不匹配,子女很可能得母婴血型不合溶血症。
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(二) Rh血型引起的新生儿溶血
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分娩 时胎儿 红细胞大量进入母体使母亲受到免疫
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HDN 的发病示意图
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二、实验室检查(产前检查) 1. 血型鉴定 2.检查没亲血清中有无IgG性质的抗体并检测其效价 3.羊水分析
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二、实验室检查 (患儿血标本检查) 直接抗球蛋白试验 红细胞抗体放散试验:与直接抗球蛋白相同,也是检测新生儿红细胞上是否存在免疫抗体。
游离抗体试验:是检测新生儿血清中的血型抗体。
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三、新生儿溶血病治疗与预防 1.药物治疗与血浆置换 2. 提早分娩 3. 宫内换血 4.光照治疗与换血疗法 5.预防
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第六节 自动化血型分析技术 1.微柱凝胶法 2.微板法(血站较普及) 3.全自动血型分析仪检测法
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小结 本章节的重点内容是:ABO血型亚型、血型的鉴定、交叉配血的方法及临床意义!
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课后练习 一、名词解释 血型 血型鉴正向定型 血型鉴反向定型 交叉配血试验 二、选择题 A IgM B IgG C IgE D 以上均是
血型 血型鉴正向定型 血型鉴反向定型 交叉配血试验 二、选择题 1、交叉配血时,当血清和红细胞发生肉眼可见的凝集反应,则血清中的抗体是 A IgM B IgG C IgE D 以上均是
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2、ABO新生儿溶血症可见于母亲为O型,胎儿的血型可为
A A型 B B型 C A型和B型 D O型
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