第十九章 支原体、衣原体及立克次体 第一节 支原体 第二节 衣原体 第三节 立克次体.

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1 第十九章 支原体、衣原体及立克次体 第一节 支原体 第二节 衣原体 第三节 立克次体

2 The end Thank you

3 第一节 支原体 一、分类 二、肺炎支原体 （一）微生物学特性 （二）临床意义 （三）微生物学检验 三、解脲脲原体 返回

4 支原体 返回 人型支原体 生殖道支原体 一.概述 牛胸膜肺炎微生物 → 类胸膜肺炎微生物 → 支原体
牛胸膜肺炎微生物 → 类胸膜肺炎微生物 → 支原体 1.定义:一类缺乏细胞壁的原核细胞型微 生物 形态上呈高度多形性 能 通过除菌滤器 目前所知在无生命培养基中生长繁殖的最小的 微生物 2.分类 柔膜体纲 支原体属 支原体目 支原体科 脲原体属 无胆甾原体科 螺原体科 人类能检测到的支原体有15个种 对人致病的主要有4种: 肺炎支原体 解脲脲原体 人型支原体 生殖道支原体

5 生物学性状 1.形态及染色 大小: 0.2~0.3um 无细胞壁 呈多形态( 球形 杆形 丝状体) 染色性: 革兰染色阴性(不易着色) 姬姆萨(Giemsa)染色: 淡紫色 2.结构 基因组: 环状双股DNA 细胞膜: 蛋白质 脂质(胆固醇占36%) 蛋白质

6 肺炎支原体(生殖道支原体)有特殊的顶端结构 与其在呼吸道粘膜上的定居和致病有关 3.培养特性 营养要求: 较一般细菌高
肺炎支原体(生殖道支原体)有特殊的顶端结构 与其在呼吸道粘膜上的定居和致病有关 3.培养特性 营养要求: 较一般细菌高 需加入10%~20%的小牛血清 Hayflick(国外) 牛心消化液(国内) PH: 7.6~8.0 解脲脲原体 : 最适PH5.5~6.5 气体: 有氧/无氧均可 初分离: 微需氧 (5%CO2 90%N2)

7 繁殖方式: 二分裂 (分节 断裂 出芽 分枝) 生长速度: 缓慢 固体基: 3~5天后出现菌落 液体基: 无明显混浊 生长温度: 35℃~37℃ 菌落特征: 油煎蛋样(核心较厚 向下长入培养基 周边为一层薄的透明区) 需用低倍显微镜观察 支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜/细胞培养中生长 妨碍传代细胞用于病毒的培养 是污染细胞培养的重要因素 一旦污染很难清除

8 4.抵抗力 对理化因素敏感 尤其对干燥敏感 耐冷 70℃/液氮可长期保存 对干扰蛋白质合成的抗生素敏感(红霉素 螺旋霉素 交沙霉素) 5.生化反应 大多数支原体能利用葡萄糖/精氨酸作为能源 肺炎支原体和生殖道支原体: 发酵葡萄糖 人型支原体: 水解精氨酸 解脲脲原体: 利用尿素 颜色变化单位(CCU): 液体培养时,把能看到有颜色变化的最高稀释倍数定为含有一个颜色变化单位

9 6.抗原构造 主要存在于细胞膜上的蛋白质和糖脂 蛋白质部分--- 主要型特异性抗原 具免疫原性 (ELASA试验检测肺炎支原体的P1蛋白) 糖脂部分---补体结合试验 生长抑制试验(GIT) 代谢抑制试验(MIT) GIT和MIT可鉴定支原体的抗原 将其分为若干血清型

10 支原体与细菌L型的区别 支原体 细菌L型 在遗传上与细菌无关 在遗传上与原菌相关 任何情况下不能变成细菌 去除诱导因素可回复为原菌
在遗传上与细菌无关 在遗传上与原菌相关 任何情况下不能变成细菌 去除诱导因素可回复为原菌 生长慢,菌落小,直径0.1~0.3mm 菌落稍大 直径0.5~1.0mm 液体培养时混浊度极低 混浊度低,可粘附于管壁/沉于管底 生长时需胆固醇 不需胆固醇

11 肺炎支原体（电镜图）

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13 肺炎支原体油煎蛋样菌落 返回

14 返回 临床意义 支原体广泛存在于自然界 (动物 植物) →动 / 植物疾病 作为共生菌定植于口腔 呼吸道 泌尿生殖道粘膜表面 多数不致病
支原体广泛存在于自然界 (动物 植物) →动 / 植物疾病 作为共生菌定植于口腔 呼吸道 泌尿生殖道粘膜表面 多数不致病 口腔支原体---口腔正常菌群 唾液支原体---牙周病 肺炎支原体---原发性非典型肺炎(经呼吸道传播 冬秋季多见 青少年易感 病理变化以间质性肺炎为主伴有支气管炎) 解脲脲原体 人型及生殖道支原体---泌尿生殖道感染(性传播疾病的病原体) 解脲脲原体: 通过胎盘感染胎儿→流产 早产等 不孕

15 第二节 衣原体 返回 一、分类 二、沙眼衣原体 （一）微生物学特性 （二）临床意义 （三）微生物学检验 三、其他衣原体 （一）鹦鹉热衣原体
第二节 衣原体 一、分类 二、沙眼衣原体 （一）微生物学特性 （二）临床意义 （三）微生物学检验 三、其他衣原体 （一）鹦鹉热衣原体 （二）肺炎衣原体 返回

16 衣原体 返回 严格细胞内寄生 有独特发育周期 能通过细菌滤器的原核细胞型微生物 特征: 革兰染色阴性 圆形或椭圆形
严格细胞内寄生 有独特发育周期 能通过细菌滤器的原核细胞型微生物 特征: 革兰染色阴性 圆形或椭圆形 专性细胞内寄生 二分裂方式繁殖 有独特发育周期 核酸类型:DNA与RNA 有细胞壁:无肽聚糖,仅含微量胞壁酸 有核糖体及简单的酶系统 对某些抗生素敏感 返回

17 返回 分类 衣原体寄生于人类 哺乳动物 禽类, 少数能致病 衣原体目→衣原体科→衣原体属 衣原体属: 沙眼衣原体: 沙眼亚种
衣原体寄生于人类 哺乳动物 禽类, 少数能致病 衣原体目→衣原体科→衣原体属 衣原体属: 沙眼衣原体: 沙眼亚种 性病淋巴肉芽种亚种(LGV) 鼠亚种 (不侵犯人) 鹦鹉热衣原体(4个血清型) 肺炎衣原体(1个血清型 TWAR) (18个血清型) 返回

18 1.形态染色与生活周期 原体---卵圆形 /梨形 直径0.2~0.4um 电子密度高 有细胞壁 是发育成熟的衣原体 是胞外存在形式 具高度感染性 无繁殖能力 始体(网状体)---圆形/卵圆形 直径 0.5~1um 密度低 无细胞壁 无感染性 有繁殖能力(繁殖型) 胞外不能存活 染色性: Giemsa染色 原体:紫红色 始体:蓝色

19 沙眼衣原体原体（Giemsa染色）

20 沙眼衣原体始体（Giemsa染色）

21 沙眼衣原体包涵体

22 衣原体的生活周期

23 返回 衣原体包涵体---易感细胞内含增殖的网状体和 子代原体的空泡 包涵体在衣原体的鉴别上有意义 2.抵抗力 对理化因素的抵抗力不强
耐低温 -70℃保存数年 常用消毒剂短期内将其杀灭 对大环内脂类抗生素敏感 3.抗原成分 衣原体LPS和外膜蛋白 LPS---属特异性补体结合抗原 位于细胞壁 外膜蛋白---种特异性抗原(MOMP) 型特异性抗原 返回

24 第三节 立克次体 一、分类 二、微生物学特性 三、普氏立克次体 四、恙虫热立克次体 返回

25 立克次体(Rickettsia) 返回 一类微小杆状或球杆状 革兰染色阴性 除少数外 仅在宿主细胞内繁殖的原核细胞型微生物 特点:
专性细胞内寄生 (二分裂方式繁殖) 核酸类型: DNA 和 RNA 多形态 革兰染色阴性 大小介于细菌和病毒之间 与节肢动物关系密切 大多是人畜共患病原体 对多种抗生素敏感 返回

26 返回 分类 立克次体属 普氏立克次体 斑疹伤寒群 斑疹伤寒立克次体 加拿大立克次体 斑点热群 恙虫病群 柯克斯体属 Q热柯克斯体
立克次体属 普氏立克次体 斑疹伤寒群 斑疹伤寒立克次体 加拿大立克次体 斑点热群 恙虫病群 柯克斯体属 Q热柯克斯体 罗沙利马体属 五日热罗沙利马体 汉赛罗沙利马体 伊丽莎白罗沙利马体 万森罗沙利马体 埃立克体属 腺热埃立克体 返回

27 1.形态结构与染色 形态: 多形态 (球状 短杆状 丝状) 大小:0.3~0.6um ×0.8~2.0um 染色: 革兰染色: 阴性 (不易着色) Giemsa染色: 紫红色 两端浓染 结构: 与革兰阴性菌相似 有细胞壁和细胞膜 电镜下最外层: 粘液层 微荚膜 细胞壁 外膜: 双层磷脂 (不含磷壁酸 肽聚糖 脂质含量高) 蛋白脂质多糖 细胞质内--- 核糖体 核质DNA

28 立克次体在宿主细胞内生长部位不同: 柯克斯体属---吞噬溶酶体内 立克次体属---胞质/核内 属内不同种群 分布也不同: 胞质中分散存在 近核处成堆排列 2.繁殖与代谢 活细胞内生长 (罗沙利马体除外) 二分裂方式繁殖 生长速度慢 (9~12小时繁殖一代) 谷氨酸是所有病原性立克次体重要的代谢底物 所有病原性立克次体都不能氧化葡萄糖获得能量 (Q热柯克斯体除外)

29 常用培养方法: 动物接种: 豚鼠 小鼠 鸡胚接种: 卵黄囊 (用于传代) 细胞培养: 单核细胞 骨髓细胞等
动物接种: 豚鼠 小鼠 鸡胚接种: 卵黄囊 (用于传代) 细胞培养: 单核细胞 骨髓细胞等 大部分立克次体不引起感染细胞的明显变化 但可形成空斑 3.抵抗力 对理化因素抵抗力不强 低温 干燥下保存较长时间 广谱抗生素敏感

30 4.抗原成分 属特异性抗原: LPS (与变形杆菌株OX株有交叉反应) 群特异性抗原: 乙醚可溶性 种特异性抗原: 颗粒性 / 菌体抗原 血清学反应 外斐反应---非特异性 适用: 与变形杆菌抗原OX19 OX2 OXk有交 叉的立克次体 (斑疹伤寒/恙虫病) (滴度≥1:160或4倍增长 ---阳性) 间接免疫荧光实验 ELISA 其他

31 返回 5、临床意义 致病物质: 内毒素 磷脂A 感染途径: 节肢动物叮咬→皮肤→人体 (体虱 蚤 气溶胶→ 呼吸道 螨 蜱)
感染途径: 节肢动物叮咬→皮肤→人体 (体虱 蚤 　 气溶胶→ 呼吸道 螨 蜱) 消化道 接触感染 自然疫源性疾病　 所致病 : 立克次体病: 流行性/地方性斑疹伤寒 斑点热 恙虫病 Q热 罗沙利马体属: 战壕热 杆菌性血管瘤-杆菌性紫癜 猫抓病 返回

32 肺炎支原体检验程序

33 返回 肺炎支原体 1.标本: 痰 咽拭 支气管分泌物 (转运培养基: 蔗糖磷酸盐缓冲液) 2.分离培养
1.标本: 痰 咽拭 支气管分泌物 (转运培养基: 蔗糖磷酸盐缓冲液) 2.分离培养 接种于含葡萄糖 酚红 指示剂的液体培养基→固体培养基 (5%CO2) (鉴定:菌落特征 血细胞吸附试验 生化反应 GIT /MIT) 3.血清学试验 冷凝集试验 补体结合试验 间接血凝试验 ELASA试验 返回

34 解脲脲原体的多种形态（电镜图） 返回

35 解脲脲原体检验程序

36 返回 解脲脲原体(人型支原体) 1.标本: 无菌中段尿 精液 阴道/尿道分泌物 2.分离培养 接种于含尿素(精氨酸)血清酚红肉汤
1.标本: 无菌中段尿 精液 阴道/尿道分泌物 2.分离培养 接种于含尿素(精氨酸)血清酚红肉汤 阳性: 液体变红且清 固体培养基: 典型油煎蛋样菌落 3. PCR 4. 支原体鉴定条板: 培养 鉴定 计数 药敏 返回

37 临床意义 返回 包涵体性结膜炎 新生儿眼结膜炎及肺炎 泌尿生殖道感染 非淋菌性尿道炎、附睾炎、宫颈炎、输卵管炎、子宫内膜炎、盆腔炎
泌尿生殖道感染 非淋菌性尿道炎、附睾炎、宫颈炎、输卵管炎、子宫内膜炎、盆腔炎 性病淋巴肉芽肿 返回

38 包涵体性结膜炎 返回

39 新生儿眼结膜炎 返回

40 衣原体性宫颈炎 返回

41 性病淋巴肉芽肿 返回

42 微生物学检验 （一）检验程序 （二）标本采集 （三）检验方法 1. 显微镜检查 2. 分离培养 3. 免疫学检测 4. 核酸检测 返回

43 沙眼衣原体检验程序 返回

44 沙眼衣原体感染宫颈刮取物直接涂片 返回

45 McCoy细胞培养的沙眼衣原体 返回

46 立克次体的形态（电镜图） 返回

47 普氏立克次体Giemsa染色 返回

48 恙虫热立克次体Giemsa染色 返回