药品质量标准分析方法验证 一)目的 证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求，方法验证过程和结果均应记载在药品标准起草和修订说明中。

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1 药品质量标准分析方法验证 一)目的 证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求，方法验证过程和结果均应记载在药品标准起草和修订说明中。

2 二)用途 （一）药品质量标准起草时，分析方法需经验证。 （二）药物合成方法变更、制剂的组分变更、原分析方法进行修订时，分析方法需经验证。

3 三)需验证的分析项目 1. 鉴别试验； 2. 杂质定量或限度检查； 3. 原料或制剂中有效成分含量测定；
4. 制剂中其它成分（降解产物、防腐剂等）的测定； 5. 溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的测试方法。

4 四)验证内容 验证内容有：准确度、精密度（重复性、中间精密度和重现性）、专属性、检测限、定量限、线性、范围和耐用性。

5 一、 准确度（accuracy） 准确度是指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，用百分回收率表示。 测定回收率R（recovery）的具体方法可采用“回收试验法”和“加样回收试验法”。

6 回收试验 空白+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M

7 加样回收试验 已准确测定药物含量P的真实样品+已知量A的对照品（或标准品）测定，测定值为M

8 数据要求 规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次。

9 1. 含量测定方法的准确度 原料药可用已知纯度的对照品或样品进行测定，或用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较。

10 制剂可用含己知量被测物的各组分混合物进行测定，即采用在空白辅料中加入原料药对照品的方法。
如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定，或与另一个已建立准确度的方法比较结果。

11 中药分析的准确度一般用加样回收试验衡量。中药回收率一般要求在95～105%范围内，有些方法操作步骤繁多时，可要求在90～110%范围内。RSD一般在3%以内。

12 2．杂质定量测定的准确度 可向原料药或制剂中加入已知量杂质进行测定。如果不能得到杂质或降解产物，可用本法测定结果与另一成熟的方法进行比较。

13 二、精密度（precision） 精密度是指在规定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。用偏差（d）、标准偏差(SD)、相对标准偏差(RSD)（变异系数，CV）表示。

14 偏差（d）：测量值与平均值之差 标准（偏）差（SD或S）

15 相对标准（偏）差（RSD），也称 变异系数（CV）

16 1. 重复性 在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度；在规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次或把被测物浓度当作100%，至少测6次进行评价。

17 2. 中间精密度 同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度。考察随机变动因素的影响。变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备。

18 3. 重现性 不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度。当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。如建立药典分析方法时通过协同检验得出重现性结果，协同检验的过程、重现性结果均应记载在起草说明中。

19 三、专属性（specificity） 指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性，能反映该方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定能力。是指该法用于复杂样品分析时相互干扰程度的度量。

20 检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。是限度试验参数，无需定量测定。常用%、ppm、ppb表示。
四、 检测限（limit of detection， LOD） 检测限系指试样中被测物能被检测出的最低量。是限度试验参数，无需定量测定。常用%、ppm、ppb表示。

21 1．非仪器分析目视法 用已知浓度的被测物，试验出能被可靠地检测出的最低浓度或量。

22 2．信噪比法 用于能显示基线噪音的分析方法（仪器分析方法），是把已知低浓度试样测出的信号与空白样品测出的信号进行比较，算出能被可靠地检测出的最低浓度或量。一般以信噪比（S/N）3∶1或2∶1时的相应浓度或注入仪器的量确定检测限。

23 3．数据要求 应附测试图谱，说明测试过程和检测限结果。

24 五、定量限（1imit of quantitation，LOQ）
指样品中被测物能被定量测定的最低量，结果应具有一定准确度和精密度。常用%、ppm、ppb表示。

25 常用信噪比法确定定量限，一般以信噪比（S/N）为10∶1时相应的浓度或注入仪器的量进行确定，也可用仪器所测空白背景响应标准差（SD）的10倍为估计值，再经试验确定。

26 六、 线性 在设计的范围内，测试结果与试样中被测物浓度直接呈正比关系的程度。 数据要求：应列出回归方程、相关系数和线性图。

27 七、范围 指达到一定精密度、准确度和线性的条件下，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。

28 八、 耐用性 指测定条件稍有变动时，结果不受影响的承受程度，为常规检验提供依据。是衡量实验室和工作人员之间在正常情况下实验结果重现性的尺度。

29 2. 杂质的限量检查除专属性、检测限、耐用性外，其它都不要求。杂质的定量测定除检测限外，其它都要求。
九、应用 1. 鉴别试验除专属性、耐用性外，其它都不要求。 2. 杂质的限量检查除专属性、检测限、耐用性外，其它都不要求。杂质的定量测定除检测限外，其它都要求。 3. 含量测定及溶出量测定除检测限、定量限外，其它都要求。

30 HPLC法测定扑热息痛片剂中的对乙酰氨基酚含量方法学验证
工作曲线配制: 取对乙酰氨基酚对照品（0.1mg/mL）10mL、 8mL 、 6mL、 4mL、 2mL、 1mL用去离子水定溶置100mL。 方法验证用样品溶液： 取9mL（3份）、 5mL（6份） 、 1.5mL（3份）对乙酰氨基酚对照品溶液用去离子水定溶置100mL。

31 专属性样品采用空白样品 检测限样品：将工作曲线最低点用注射用水稀释5、10倍待测 耐用性改变流速(2%)或柱温5C

32 将上述样品用HPLC分析。 计算回归曲线的标准方程 计算各个方法验证样品的浓度 并计算准确度与精密度

33 思考题 同一样品，相同的进样量，流速的改变会影响峰面积吗？ 温度的改变会如何影响色谱的出峰时间？