第三章 药物分析方法的效能指标.

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1 第三章 药物分析方法的效能指标

2 第三章 药物分析方法的效能指标 定量分析样品前处理方法 定量分析方法特点 药品质量标准分析方法验证 1 2 3

3 Pretreatment of sample used in quantitative analysis
一、定量分析样品前处理方法 Pretreatment of sample used in quantitative analysis 1 概 述 定量分析样品前处理方法 2

4 概 述 碘番酸 泛影酸 碘苯酯

5 概 述 磺溴酞钠 三氯叔丁醇

6 概 述 富马酸亚铁 酒石酸锑钾

7 概 述 含金属有机药物 卡巴胂 金属有机药物

8 定量分析样品前处理方法 不经有机破坏的分析方法: 直接测定法－含金属或C-M不牢固的有机金属
经水解后测定法－卤素联脂肪碳链（溶于适当溶剂再水解） 直接回流后测定 碱化回流后测定 硫酸水解后测定 经氧化还原后测定法－卤素联芳环牢固（一般用于测碘） 碱性还原后测定法－如泛影酸 酸性还原后测定法－如碘番酸 利用药物中可游离的金属离子的氧化性测定含量

9 经有机破坏的分析方法 湿法破坏 HNO3-HClO4 HNO3-H2SO4 H2SO4-MSO4 金属以高价态存在
干法破坏：无水碳酸钠或氧化镁，注意温度 氧瓶燃烧法

10 A.燃烧瓶 B.铂丝网 C.D.盛固体样品滤纸及其折叠法 E.F.G.称取液体样品方法
氧瓶燃烧装置及称样方法 A.燃烧瓶 B.铂丝网 C.D.盛固体样品滤纸及其折叠法 E.F.G.称取液体样品方法 7mm 50mm 30mm 空心 A B 尾部 7mm 13mm 20mm 25mm C D 356mm 166mm 滤纸 F G E

11 氧瓶燃烧法 样品 吸收液 测定方法 含氟有机药物 H2O pH4.3 HAc-NaAc Buffer 茜素氟蓝 分光光度法
样品 吸收液 测定方法 含氟有机药物 H2O pH4.3 HAc-NaAc Buffer 茜素氟蓝 分光光度法 含氯有机药物 NaOH溶液 银量法 汞量法 分光法 含溴有机药物 H2O2-NaOH液 或NaOH液 银量法 分光法 硫酸肼饱和液 含碘有机药物 NaOH液 银量法 碘量法 硫酸肼饱和液 汞量法 分光法

12 碘苯酯含量测定 取本品约20mg，精密称定，照氧瓶燃烧法进行有机破坏，用NaOH T.S. 2ml与H2O 10ml为吸收液，待吸收完全后，加溴醋酸溶液10 ml，密塞，振摇放置数分钟，加甲酸约1ml，用水洗涤瓶口，并通入空气流约3~5min，以除去剩余的溴蒸气，加KI 2g，密塞，摇匀，用Na2S2O3液 (0.02mol/L)滴定，至近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml的硫代硫酸钠液(0.02mol/L)相当于1.388mg的C19H29IO2

13 二、药品质量标准分析方法验证 指导原则 药品质量标准分析方法验证 药物制剂人体生物利用度和生物等效性试验指导原则 药物稳定性试验指导原则
缓释、控释制剂指导原则 微囊、微球与脂质体制剂指导原则 细菌内毒素检查法应用指导原则

14 第三节 药品质量标准分析方法验证 目的： 效能指标： 效能指标包括: 证明所采用的分析方法适合于相应的检测要求 评价分析方法的尺度
精密度, 准确度, 检测限,定量限,选择性, 线性与范围, 耐用性

15 (1)准确度（accuracy）： 测量值与真实值接近的程度 表 示: 回收率 测定方法：回收试验 加样回收试验

16 (2)精密度（precision ）： 定 义: 同一样品多次测量值之间相互接近的程度 表 示：标准偏差(s), 相对标准偏差(RSD)
定 义: 同一样品多次测量值之间相互接近的程度 表 示：标准偏差(s), 相对标准偏差(RSD) 重复性: 同一实验室,同一人多次测定的精密度 中间精密度: 同一实验室，不同人，不同仪器测定的精密度 重现性: 不同实验室，不同人测定的精密度

17 (3)专属性（specificity）: 指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性)。

18 第三节 药品质量标准分析方法验证 ------------性能指标
第三节 药品质量标准分析方法验证 性能指标 (4) 检测限（limit of detection， LOD）： 药物能被检出的最低浓度(µg/ml) 测 定: 信噪比法(S:N=3:1) (5) 定量限（1imit of quantitation，LOQ）： 药物能被定量测出的最低浓度(µg/ml) 测 定: 信噪比法(S:N=10:1)

19 第三节 药品质量标准分析方法验证 ------------性能指标
第三节 药品质量标准分析方法验证 性能指标 (6) 线性与范围（linearity and range）： 待测物浓度与响应值成线性关系的浓度范围 线性关系：Y=a+bx （r=0.9999) 线性程度：相关系数 (7) 耐用性（robustness）: 测定条件稍有变动时，对测定结果的影响程度 影响因素：被测溶液的稳定性，流动相的组成和pH，商品柱的品牌，柱温等

20 检验项目和验证内容： ① 已有重现性验证，不需验证中间精密度 ② 如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充 ③ 视具体情况予以验证
　　　项目内容　　　 鉴别 杂质测定 含量测定及溶出量测定 定量 限度 准确度 ＋ 精密度 － 重复性 中间精密度 ＋① 专属性② 检测限 －③ 定量限 线性 范围 耐用性 ① 已有重现性验证，不需验证中间精密度 ② 如一种方法不够专属，可用其他分析方法予以补充 ③ 视具体情况予以验证

21 第四节 生物样品分析的基本步骤 1. 药物从蛋白结合或缀合物中释出
第四节 生物样品分析的基本步骤 1. 药物从蛋白结合或缀合物中释出 ⑴ 蛋白变性：如应用三氯醋酸、HClO4、有机溶剂(乙醇、丙酮、乙腈)使蛋白沉淀 ⑵ 盐酸水解 ⑶ 酶消化法：最常使用蛋白水解酶中枯草菌溶素(一种细菌性蛋白分解酶，可在pH 7.0~11.0使肽键降解)

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23 定量分析方法的验证 ----------生物样品分析
定量分析方法的验证 生物样品分析 （一）特异性 内源性物质不得干扰原药、代谢物 （二）标准曲线 r≥0.9900，至少5个浓度，不许外延 （三）精密度和准确度 RSD≤15％、20％ 相对回收率85～115％（80～120％）

24 定量分析方法的验证 ----------生物样品分析
定量分析方法的验证 生物样品分析 （四）最低定量限LOQ 3~5倍t1/2，或1/10～1/20倍Cmax （五）样品稳定性 室温、冻融、冰冻长期 （六）提取回收率（绝对回收率） 一般低于100％，须稳定 （七）质控样品 已知浓度样品均匀放入待测生物样品序列中，以确保定量测定的准确度

25 样品 固相净化 及 反相高效液相色谱法 测定血浆中茶碱
伍朝筼等 药学学报,1989,24(10):769~773

26 咖啡因 茶碱 12 8 4 0min 12 8 4 0min 12 8 4 0min 血浆样品 净化后空白血浆 净化前空白血浆
Column Zorbax C18 5µm 2.5cm4.6mm nm Precolumn YWG-ODS 9-11µm 54.6mm Mobile Phase:甲醇-醋酸钠(0.05mol/L pH3.0)50׃50 min min 茶碱 咖啡因 min 血浆样品 净化后空白血浆 净化前空白血浆

27 · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · 标准曲线 五例病人血浆茶碱浓度测定 3 25 ·
2.4 20 1.8 茶碱(µg/ml) 15 1.2 10 0.6 5 6.4 12.8 茶碱(µg/ml) (min) Y=9.56610-2X+6.15310-3 r=0.9995