文心蘭組織培養介紹 報告者:梁馨妮.

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1 文心蘭組織培養介紹 報告者:梁馨妮

2 文心蘭基本介紹 台灣文心蘭的生產以切花市場為主，並以日本為主要外銷市場。
名稱:文心蘭 學名:Oncidium 科名:蘭科 台灣文心蘭的生產以切花市場為主，並以日本為主要外銷市場。 台灣業者應用生物科技選育出許多文心蘭的盆花品種，使文心蘭盆花與種苗成為具外銷潛力的產品之一。 繁殖方式則分為「成株分株的分生苗」和利用「組織培養的實生苗」兩種。

3 文心蘭的組織培養 文心蘭組織培養基本上分為四種組織培養技術：無菌播種、莖頂培養、花梗節、花苞培養、體胚誘導與再生
文心蘭雜交種間的雜交通常不易產生具有稔性的種子，許多雜交種的親本多為一個雜交種及一個原種，因此進行雜交時，需依照雜交目進行親本間的組合授粉。 果莢成熟度因種原的不同有很大的差異，有的原種可能3.5個月就成熟，有的可能超過五個月才能採收，雖然未熟莢也可修改培養基成份，幫助發芽，但其發芽率並不高。

4 y配方每升2 mg glycine, 0.5 mg 煙鹼酸、
一、無菌播種 培養基原料:以蝴蝶蘭或石斛蘭播種用之培養基應用於大部份的種原即可。 播種方式可分為裂莢播種或乾種子播種及未裂莢播種兩類，後者為成熟度已經足夠，但果莢尚未裂開，在無菌操作台內，可以浸泡於95%酒精，以鑷子挾起很快過火，通常烤三次即可達無菌狀態，再切開果莢取種子播種。裂莢播種雖然較麻煩，但是較不易把病毒帶入實生苗。收集成熟果莢之種子粉末，置入小玻璃瓶，加一小撮棉花，並添加稀釋十倍之漂白水，將蓋子蓋緊，以手往返搖勻瓶內種子及棉花，以超音波震盪器震一分鐘，10分鐘後，以無菌玻璃吸管壓住棉花，將漂白水吸掉，再以無菌水洗三次及同樣方法吸掉，最後添加無菌水，以細鑷子取出棉花，置於培養基上，吸取種子懸浮液於同一瓶培養基。 文心蘭培養基配方(每公升用量) Hyponex No.1x 2 g MS 維生素及甘氨酸y 5 ml 馬鈴薯泥 50 g 香蕉泥 25 g Peptone 或tryptone 1 g 蔗糖 10 g 活性碳粉z 2 g pH x花寶一號，其N-P-K 比率為7: 6: 19 y配方每升2 mg glycine, 0.5 mg 煙鹼酸、 0.5 mg HCl, 0.1 mg thiamine HCl z調整pH值後，再添加到培養基

5 二、莖頂培養 由成熟假球莖基部會長出新芽，再形成新的假球莖，在新芽階段，可以用乾淨刀片將芽體切下，小心剝除葉片，露出葉腋基部芽體，經由漂白水(稀釋十倍，添加2-4滴展著劑) 消毒10分鐘。 以無菌水清洗，於無菌操作台上切取生長點，放置於含 mg/l BA 及 0.1 mg/l NAA 之MS 培養基，約一至二個月後，可看到芽體或擬原球體長出。 通常為了避免或減少污染率，在繼代培養時，可用含10-20%椰子水的MS 培養基震盪培養。約兩個月後，可每隔三星期繼代培養一次。 腋芽莖頂亦可培養於含150 ml/l 椰子之改良VW培養基。

6 (Santana, G. E. & K. Chaparro. 1999)
三、花梗節、花苞培養 幼嫩花序的花苞及花梗節均可經過適當培養基之誘導而產生擬原球體(PLB) 或不定芽。 選取健康開花株之幼嫩花梗，去掉節上的苞葉，以漂白水消毒，方法同莖頂培養，使用之培養基也相同，約經一至二個月，長出芽體，將芽體自花梗節上切下，繼代培養於含0.4 mg/l BA 及0.1 mg/l NAA 之培養基 ，經一個月左右，會分化長出PLBs，此時可用相同培養基來繼續增殖，或採用如莖頂之培養方法。 由花梗節誘導產生之芽體或PLBs，將來分化形成之植株，其開花特性和新芽生長點培養產生的小植株相同，因此不過度增殖，即可保持母株特性。 花苞誘導PLB 培養基(每公升用量) Knudson C 鹽類 NAA 1.0 mg 鳳梨汁 120 ml 綠香蕉泥 100 g 蔗糖 20 g 洋菜 8 g pH 4.8 (Santana, G. E. & K. Chaparro. 1999)

7 四、體胚誘導與再生 試管苗之葉片若培養於含低濃度之thidiazuron (TDZ) 或TDZ與2,4-D 之MS 培養基 (大量元素為半量)，則可誘導產生PLBs，經解剖學切片，證實為體胚的構造，體胚通常由切口或葉片尖端發生，將體胚繼代培養於不含賀爾蒙之培養基或含0.3 mg/l TDZ，可以部份分化產生芽體，含TDZ培養基也可用來增殖。將芽體置於含0.5 mg/l NAA之 MS培養基，可誘導發根。 若將幼嫩花梗節間組織培養於含 mg/l TDZ，可於20-30天誘導產生體胚，與上述之試驗結果類似。 由其他作物組培的報告及筆者的經驗，TDZ 的濃度若使用不當，雖然可以誘導發生大量芽球體或體胚，可能也會導致變異現象發生，因此在進行未做過的品種時，應有適當的處理做為對照，最好將組培苗養到開花階段，評估是否會產生變異，在無變異或其比率低之培養條件，才可以大量生產，以免品質低劣。

8 文心蘭組織培養圖片 試管培養 一般業者常等到瓶苗長至瓶口 高度才移植，但其實瓶苗已老化， 瓶內培養時間過長會產生CO2、
有害物質(如:乙烯)，也會缺乏 瓶內養分，使植株活力降低， 品質不好。 由母株培養的繼代子株 已有2年之久

9 文心蘭組織培養圖片 試管文心蘭培育成功 無菌培養成功

10 文心蘭組織培養圖片 椰子汁主要成分有糖、 胺基酸、天然生長素 適用於花寶培養基！ 扇形文心蘭 組培苗成熟株 扇形文心蘭試管花
是新興的生物科技產品， 生命力旺盛的蘭花， 培養在透明培養基中， 可以在室內長期開花。 添加活性碳與椰子水有助於種苗發芽

11 連這些問題都不會，那你就是沒在聽我家親愛的報告哦！還看！我知道我很帥但還是快想答案吧！給你+100分哦~
Q&A 1.請問文心蘭主要外銷於哪個國家？ 2.請問上述投影片中總共介紹了哪幾種組織培養技術？ 3.請問為什麼繼代培養時不能等到瓶苗長至瓶口才移植？ 連這些問題都不會，那你就是沒在聽我家親愛的報告哦！還看！我知道我很帥但還是快想答案吧！給你+100分哦~

12 引註資料 蘭花組織培養的進展 扇形文心蘭 瓶描出瓶適期對文心蘭的影響 文心蘭圖片 周杰倫圖片

13 報告完畢，謝謝大家 THE END