Test for purity 第四章 药物的杂质检查 药物分析教研室.

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1 Test for purity 第四章 药物的杂质检查 药物分析教研室

2 Contents 特殊杂质检查方法 3 概 述 1 一般杂质检查方法 2

3 第一节 概述 一、药物纯度的概念与要求 1.纯度（Purities）药物的纯净程度 2.杂质 (Impurities)
药物中存在的无治疗作用或影响药物的稳定性和疗效，甚至对人体健康有害的物质。 需综合考虑药物的外观性状、理化常数、杂质检查和含量测定,综合评定。

4 第一节 概述 共同点——均规定所含杂质的种类和限量. 不同点 3.药物纯度与试剂纯度
①药物纯度从用药安全、有效和对药物稳定性等方面考虑,只有合格品和不合格品. ②试剂纯度是从杂质可能引起的化学变化对使用的影响以及试剂的使用范围和使用目的加以规定,它不考虑杂质对生物体的生理作用及毒副作用. 化学试剂——一般分为4个等级〔基准试剂、优级纯或特种试剂(光谱纯、色谱纯、农药残留检测级)、分析纯和化学纯〕

5 第一节 概述 二、杂质的来源与种类 生产 过程 杂质的来源 储藏 过程 合成过程中，原料不纯或反应不完全，中间体、副产物在精制中未除尽
制剂过程 试剂、溶剂、还原剂残留 异构体、多晶体 使用的金属器皿、装置、工具引入的金属杂质 生产 过程 杂质的来源 储藏 过程 在温度、湿度、日光、空气等外界条件影响下，或因微生物的作用，引起药物发生水解、氧化、分解、异构化、晶型转变、聚合、潮解和发霉等变化

6 第一节 概述

7 第一节 概述 三、杂质的限量(Limit Test) 对照法 灵敏度法 比较法 注意平行原则 药物中所含杂质的最大允许量。 杂质限量
通常用百分之几或百万分之几 (parts per million, ppm ) 杂质限量 控制 限量检查 对照法 灵敏度法 比较法 定量测定杂质含量 注意平行原则

8 第一节 概述 注意单位统一！

9 第一节 概述 C=10 μg/ml V=1.5 ml S=? 示例一 茶苯拉明中氯化物检查
取本品0.30g 置200 ml量瓶中，加水50ml、氨试液3ml和10%硝酸铵溶液6ml，置水浴上加热5min，加硝酸银试液25ml，摇匀，再置水浴上加热15min，并时时振摇，放冷，加水稀释至刻度，摇匀，放置15min，滤过，取续滤液25ml置纳氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水稀释至50ml，摇匀，在暗处放置5min，与标准氯化钠溶液(10μg Cl-/ml)1.5 ml制成的对照液比较，求氯化物的限量。 C=10 μg/ml V=1.5 ml S=?

10 第一节 概述 C=A/E=0.05/435=1.15×10-4 g/100ml V=100 ml S=0.2 g
示例三 肾上腺素上酮体的检查 取本品0.2g,置100ml量瓶中，加盐酸溶液(9-2000)溶解并稀释至刻度，摇匀，在310nm处测定吸光度不得超过0.05，酮体的百分吸收系数为435，求酮体的限量 C=A/E=0.05/435=1.15×10-4 g/100ml V=100 ml S=0.2 g

11 第一节 概述 习题一 磷酸可待因中吗啡的检查 取本品0.10 g,加盐酸溶液(9-1000)使溶解成5ml，加亚硝酸钠试液2ml，放置15min，加氨试液3ml，所显颜色与吗啡试液[取无水吗啡2.0mg，加盐酸溶液(9-1000)使溶解成100ml] 5.0ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深。问限量是多少？

12 第一节 概述 习题二 苯巴比妥钠中重金属的检查
取本品2.0g,加水32ml，溶解后缓缓加入1mol/L盐酸溶液8ml，充分振摇，静置数分钟，滤过，取滤液20ml，加酚酞指示液1滴与氨试液恰显粉红色，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水适量成25ml，依法检查，含重金属不得超过10ppm。试计算应取得标准铅溶液(每1ml相当于10μg Pb)的体积。

13 第二节 一般杂质的检查方法 一、氯化物检查法 供试品 (避免AgCl分解) 标准溶液 AgNO31ml 稀HNO310ml H2O
暗处放置5min (避免AgCl分解) 供试品 AgNO31ml 稀HNO310ml H2O 标准溶液 AgNO31ml 稀HNO310ml H2O

14 第二节 一般杂质的检查方法 二、硫酸盐检查法 三、铁盐检查法 1.硫氰酸铁法 (Ch.P 和USP采用) 红色

15 第二节 一般杂质的检查方法 稀HCl 4ml 供试品 过硫酸铵 50mg 显色，立即与同法制成的对照溶液比较 加水溶解 25ml 加水稀释
加水定容 显色，立即与同法制成的对照溶液比较

16 第二节 一般杂质的检查方法 2.巯基醋酸法 (BP采用) 红色

17 第二节 一般杂质的检查方法 四、重金属检查法 (Pb)

18 第二节 一般杂质的检查方法 条件： 1.第一法 硫代乙酰胺法 黄色至棕黑色混悬液 试剂：硫代乙酰胺(CH3CSNH2) 2ml
1.第一法 硫代乙酰胺法 黄色至棕黑色混悬液 条件： 介质：醋酸盐缓冲液 (pH 3.5) 2ml 试剂：硫代乙酰胺(CH3CSNH2) 2ml 杂质对照液：PbNO (10µg/ml) 灵敏度范围： 10~20 g / 27ml

19 第二节 一般杂质的检查方法 2.第二法 炽灼后的硫代乙酰胺法 缓缓炽灼 放冷 H2SO4 0.5-1.0ml 供试品 炭化 加热
2.第二法 炽灼后的硫代乙酰胺法 缓缓炽灼 放冷 H2SO ml 供试品 炭化 加热 HNO ℃ H2SO4 除尽 放冷 完全灰化 蒸干 HCl 2ml 水15ml 中性 按第一法检查 蒸干 氨试液 注意：做空白试验

20 第二节 一般杂质的检查方法 3.第三法 硫化钠法 4.第四法 微孔滤膜法 滤器上盖 垫圈(外径10mm,内径6mm) A C B 连接头 D
3.第三法 硫化钠法 4.第四法 微孔滤膜法 C A B F E 滤器下部 滤器上盖 连接头 辅助滤板 D 滤膜(直径10mm, 孔径3.0µm) 垫圈(外径10mm,内径6mm)

21 第二节 一般杂质的检查方法 五、砷盐检查法 (一)古蔡氏法 (Gutzeit) 黄色 棕色 黑色

22 第二节 一般杂质的检查方法 生成砷斑 有孔玻璃旋塞 古蔡氏法检砷器 8cm 吸收硫化氢气体 导气管 AsH3发生瓶 溴化汞试纸 醋酸铅棉花
(60mg) 吸收硫化氢气体 8cm 导气管 HCl Zn 粒 碘化钾试液 酸性氯化亚锡试液 AsH3发生瓶

23 注意事项 砷斑不稳定，应干燥、避光、立即比较。 有机结合态的砷应破坏后检查（加酸或碱），但温度应低于600C。
供试品若为铁盐，能消耗碘化钾和氯化亚锡，可加酸性氯化亚锡，使高铁离子还原后检查。 供试品（硫化物、亚硫酸盐、硫代硫酸盐）若在酸性条件下生成硫化氢或二氧化硫，与溴化汞试纸作用生成黑色硫化汞和金属汞，可先用硝酸处理，使其氧化为硫酸盐。 锑盐含量较多时，可改用白田道夫（Bettendorff）法检查砷

24 第二节 一般杂质的检查方法 (二)二乙基二硫代氨基甲酸银法 [Ag(DDC)法] 目视比色法 红色胶态银 510nm 测定A值

25 线性范围：1～10 μg/40ml 含锑药物不干扰测定 用于砷盐的限量检查和微量砷盐的含量测定

26 第二节 一般杂质的检查方法 (三)次磷酸法 棕色 1) 用于硫化物、亚硫酸盐以及含锑药物的砷盐检查，不产生干扰。 2）灵敏度较古蔡法低。

27 第二节 一般杂质的检查方法 六、溶液颜色检查法 七、易碳化物检查法 八、溶液澄清度检查法
九、炽灼残渣 (Residue on ignition) 系指有机药物经炭化或挥发性无机药物加热分解后，高温炽灼所产生的非挥发性无机杂质的硫酸盐。 1～2 mg 0.1%～0.2%

28 第二节 一般杂质的检查方法 十、干燥失重测定法 干燥失重：药品在规定的条件下，经干燥后所减失的量。 用于检查药物中的水分及其他挥发性物质。
恒重：供试品连续两次干燥或炽灼后称重的差异在0.3mg以下。 （干燥至恒重的第二次及以后每次称重都应在规定的条件下继续干燥1h后进行）

29 第二节 一般杂质的检查方法 (四)热分析法（Thermal analysis） 测定物质的物理化学性质与温度关系的仪器分析方法。
热重分析法(Thermogravimetric Analysis,TGA) 差热分析法(Differential Thermal Analysis,DTA) 差示扫描量热法 (Differential Scanning Calorimetry,DSC)

30 第二节 一般杂质的检查方法 1.热重分析法 (TGA)
W 结晶水 失重台阶 供试品 TGA热重曲线 W 应用热天平在程序控温的条件下测量物质的质量随温度变化的热分析技术,可计算出样品在相应温度范围内减失质量的百分率.

31 特 点 分析样品用量少, 适用于贵重药材或在空气中容易氧化药物干燥失重测定. 灵敏度高,可达1 g以下 测定速度快
分析样品用量少, 适用于贵重药材或在空气中容易氧化药物干燥失重测定. 灵敏度高,可达1 g以下 测定速度快 可用于判断结晶水或吸附水,并推断结晶水含量.

32 第二节 一般杂质的检查方法 T 2.差热分析法 (DTA) △T
在程序控制温度下，测量供试品和惰性参比物(常用石英砂、煅制MgO)之间的温度差与温度(或时间) 关系的热分析技术 T △T 供试品发生吸热反应温度低于参比物质从而产生吸热峰 参比物质 供试品发生放热反应温度高 于参比物质从而产生放热峰

33 DTA用途(1) 熔点测定 熔程 T △ T=0

34 (2) 定性和纯度检定——根据峰的数目、形状、位置对供试品进行纯度判别
T 供试品 对照品

35 草酸钙(CaC2O4·H2O)的热重曲线 在温度T1时 CaC2O4·H2O CaC2O4+H2O
ΔG1 ΔG2 ΔG3 1000 800 600 400 200 W T1 T2 T3 398 838 635 478 134 226 T(℃) 在温度T2时 CaC2O CaCO3+CO 在温度T3时 CaCO CaO+CO2 草酸钙(CaC2O4·H2O)的热重曲线

36 盐酸多巴酚丁胺的DTA-TGA曲线 100 90 80 70 60 DTA T(℃/min) 196℃ 233℃

37 第二节 一般杂质的检查方法 · 3.差示扫描量热法 (DSC) 样品 参比 加热炉 至信号放大器 加热器 导线 炉温 控制器
测量保持供试品和惰性参比物的温度相同, 系统所需输给供试品或参比物的能量差随温度(或时间)变化的热分析技术.

38 用于待测物质的鉴别、晶型鉴别、纯度检查以及熔点和水分等的测定，更适合于测量物质在物理变化或化学变化中焓的变化。
不纯物质的DSC图 t(min) △T

39 不同纯度苯甲酸的DSC曲线 温度 97.2% 98.6% 标准品 低共熔杂质

40 应用热分析法检查药物纯度的条件 样品纯度在98.0%以上 杂质不与主成分反应 杂质不与主成分形成共晶或固熔体 杂质与熔融试样有化学相似性
药物在熔融过程中化学性质稳定 药物如存在多晶现象则必须全部转变成某一晶型

41 甲磺酸二氢麦角毒碱的DSC-TGA曲线 ℃ 50 100 150 200 DSC TGA 失溶剂 失水 分解

42 第二节 一般杂质的检查方法 十一、水分测定法 A——供试品消耗的Fisher试液的体积 B——空白消耗的Fisher试液的体积
F——每1mlFisher试剂相当于水的重量(mg) W——供试品的重量

43 指示终点方法： ①Fisher试液颜色 淡黄色——红棕色 ②永停法

44 第二节 一般杂质的检查方法 十二、残留溶剂测定法 残留溶剂：在合成原料药，辅料或制剂生产的过程中使用的，但在工艺中未能完全除去的有机溶剂。

45 第二节 一般杂质的检查方法 色谱系统与系统适用性试验
(System Suitability Tests; SSTs) 以直径为 mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作为固定相，柱温为80-170℃；并符合下列条件： ⑴用待测物的色谱峰计算的N应大于1000； ⑵内标物与待测物的两个色谱峰的R≥1.5； ⑶每个标准溶液进样5次，所得待测物与内标物峰面积之比的RSD≤5%； 若以外标法测定，所得待测物峰面积的RSD≤10%

46 第二节 一般杂质的检查方法 进行有机溶剂限度测定时，根据残留溶剂的限度规定来确定对照品溶液的浓度；
进行定量测定时，应根据供试品中实际残留溶剂的实际残留量确定对照品溶液的浓度。 对照品溶液的色谱峰面积与供试品溶液中对应的残留溶剂的色谱峰面积以不超过2倍为宜。

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48 第三节 特殊杂质的检查方法 一、色谱分析法 (一)TLC法 比移值 一般要求：颗粒直径10~40µm 薄层涂布：无粘合剂 含粘合剂：
常加入10~15% 煅石膏 (CaSO4·2H2O,180℃烘4h) 或0.5~0.7%羧甲基纤维素钠水溶液

49 第三节 特殊杂质的检查方法 ① 杂质对照法 ② 供试品溶液自身稀释法 ③ 杂质对照法与供试品溶液自身稀释法对照使用 ④ 对照药物法
适用于已知杂质并能够得到杂质对照品的情况 ② 供试品溶液自身稀释法 适用于杂质的结构不能确定或无杂质对照品的情况(仅限于二者的颜色相近或相同的情况) ③ 杂质对照法与供试品溶液自身稀释法对照使用 ④ 对照药物法 无合适的杂质对照品，或者是供试品显示的杂质斑点颜色和主成分颜色有差异，难以判断限量。

50 第三节 特殊杂质的检查方法 (二)HPLC法

51 第三节 特殊杂质的检查方法 主要方法 内标法加校正因子法：用于有杂质对照品时能够测定杂质的校正因子杂质的含量测定。
外标法：用于有杂质对照品或杂质对照品易制备的情况。 加校正因子的主成分自身对照法：用于有杂质对照品时，杂质的含量测定 不加校正因子的主成分自身对照法 ：用于没有杂质对照品的情况 峰面积归一化法：粗略测量供试品中杂质的含量

52 二、光谱分析法 肾上腺酮及肾上腺素的紫外吸收曲线 λmax310nm nm

53 第三节 特殊杂质的检查方法 三、化学分析法 杂质与一定试剂产生沉淀 杂质与一定试剂产生颜色反应 杂质与一定试剂反应产生气体
呋塞米中芳香第一胺的检查 重氮化-耦合反应显色 呋塞米 2-氨基-4-氯-5-氨磺酸基苯甲酸

54 氯硝柳胺中5-氯水杨酸的检查 氯硝柳胺 5-氯水杨酸 三氯化铁显色

55 第三节 特殊杂质的检查方法 四、物理分析法 嗅味及挥发性的差异 颜色的差异 溶解行为的差异 旋光性质的差异 吸附或分配性质的差异
对光选择吸收性质的差异

56 Thank You !

57 a. KI的作用——还原剂：As5+→As3+ 反应速度慢 反应速度快 b.酸性SnCl2的作用 还原剂 ① As5+→As3+

58 起去极化作用,使氢气均匀而连续地发生 ② 将KI氧化生成的I2→I- 稳定的络离子 进而促进AsH3不断生成 ③与Zn粒表面形成Zn-Sn齐
SnCl2

59 白田道夫法——含锑药物 棕褐色胶态砷 加入少量HgCl2,灵敏度可提高至 2 gAs2O3（1.5 gAs）/10ml

60 旋光性质的差异 Ch.P规定黄体酮在乙醇中的比旋度为： ＋186°～198°

61 供试品10µl N-甲基哌嗪10µl 50mg/ml 50µg/ml
I2蒸气显色 枸橼酸乙胺嗪 供试品10µl N-甲基哌嗪10µl 50mg/ml µg/ml

62 规定： 如显杂质斑点，不得多于2个，其颜色与对照品主斑点相比较，不得更深 地塞米松磷酸钠 地塞米松 20mg/ml mg/ml

63 规定 氨苯砜中检查“有关物质” 如有1~2个杂质点超过时，应不得深于0.01%对照液的主斑点。
其中有1个杂质点应不深于0.002%供试品的主斑点。 0.01%供试品 1%供试品 0.002%供试品 100µg/ml 10mg/ml 20µg/ml