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1 细菌鉴定中常用的生理生化反应 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

2 实验目的和内容 了解细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法；
通过不同细菌对不同含碳、含氮化合物的分解利用情况，了解细菌碳、氮代谢类型的多样性； 了解细菌在培养基中的生长现象及其代谢产物在鉴别细菌中的意义； 学习各种接种技术。 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

3 实验原理 各种细菌所具有的酶系统不尽相同，对营养基质的分解能力也不一样，因而代谢产物存在差别。 细菌的这种代谢特点可供鉴别细菌之用。
用生理生化试验的方法检测细菌对各种基质的代谢作用及其代谢产物，从而鉴别细菌的种属，称之为细菌的生理生化反应。 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

4 实验仪器,材料和用具 实验仪器 微生物材料 试剂 37℃恒温培养箱。 大肠杆菌、变形杆菌、枯草杆菌、产气杆菌和未知菌种的平板各1个。
甲基红试剂、V.P.试剂、吲哚试剂 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

5 实验仪器,材料和用具 实验用具 试管：每个试验４根试管(３根接种，1根对照) 。 接种环、接种针、酒精灯、试管架、记号笔。
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6 糖(葡萄糖、乳糖)发酵试验 糖分解试验是鉴别微生物时常用的生理生化反应。
绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源。但是各种细菌所具有的相应酶系统不尽相同，对不同糖类的利用能力和方式也存在差异。 有些细菌能发酵葡萄糖，而不能分解乳糖(变形杆菌)；有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸、醋酸、丙酸等)和气体(如氢气、甲烷、二氧化碳等)；有些细菌则只产酸不产气(变形杆菌)。 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

7 葡萄糖/乳糖发酵培养基 成分：蛋白胨(或胰蛋白胨5g) 10g NaCl 2.5g 水 500ml 制法：
1．将上述成分混合于蒸馏水中加热溶解，矫正pH至7.4—7.6。 2．加葡萄糖/乳糖5g，加热溶解后加入0.5ml的1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，混匀。 3．分装于80支试管内，每管5ml。 4．每管倒置一个杜氏小管，加盖，115℃灭菌30min。 *溴甲酚紫指示剂[pH 5.2(黄色)——6.8(紫色)] 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

8 糖发酵试验 取3支葡萄糖发酵培养基，分别标明发酵培养基名称、所接种的菌名和组号。1支接种大肠杆菌，1支接种变形杆菌，第3支接未知菌。
另取3支乳糖发酵培养基，标记。1支接种大肠杆菌，1支接种变形杆菌，第3支接未知菌。 接种后，轻轻摇动试管，使其均匀，并防止气泡进入倒置的杜氏小管。 将已接种好的培养基置37℃培养箱中培养24h。 观察各培养基颜色变化及杜氏小管中有无气泡。 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

9 甲基红试验 甲基红试验是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。
有些细菌(如大肠杆菌等)分解糖类产生丙酮酸，丙酮酸进一步反应形成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降低到4.2以下。 有些细菌(如产气杆菌)在培养的早期产生有机酸，但在后期将有机酸转化为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等，使pH升至大约6。 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

10 葡萄糖蛋白胨水培养基 成分：蛋白胨 2.5g 葡萄糖 2.5g 磷酸氢二钾 2.5g 蒸馏水 500ml 制法：
1．将上述成分混合于蒸馏水中，加热溶解后，调pH至7.2，以滤纸过滤。 2．分装于100支试管中，每管约5m1。0.06MPa 30min灭菌备用。 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

11 甲基红试验 取3支葡萄糖蛋白胨水培养基，标记。1支接种大肠杆菌，1支接种产气杆菌，1支接未知菌。 37℃培养 48h。
加甲基红指示剂数滴，观察结果。呈现红色者为阳性，呈现黄色者为阴性。 *甲基红指示剂[pH 4.4(红色)——6.2(黄色)] 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

12 V.P. 试验(伏―普试验) V.P.试验是用来测定某些细菌利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。
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13 葡萄糖蛋白胨水培养基 成分：蛋白胨 2.5g 葡萄糖 2.5g 磷酸氢二钾 2.5g 蒸馏水 500ml 制法：
1．将上述成分混合于蒸馏水中，加热溶解后，调pH至7.2，以滤纸过滤。 2．分装于100支试管中，每管约5m1。0.06MPa 30min灭菌备用。 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

14 V.P.试验 取3支葡萄糖蛋白胨水培养基，1号接种大肠杆菌，2号接产气杆菌，第3支接未知菌． 37℃培养 48h后。
加入40%KOH 5~10滴，然后再加入等量的5%α-萘酚溶液，用力振荡，再放入37℃温箱中保温30min，以加快反应速度。 观察培养基的颜色变化。若培养物呈现红色，为伏-普反应阳性。 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

15 吲哚试验 某些细菌，如大肠杆菌，能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸，产生靛基质(吲哚)，靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰色靛基质(红色化合物)。 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

16 吲哚试验 色氨酸分解反应： 吲哚反应： 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

17 胰蛋白胨水培养基 成分：胰蛋白胨 5g NaCl 2.5g 水 500ml 制法：
1．将上述成分混合于蒸馏水中加热溶解，矫正pH至7.4—7.6。 2．分装于80支试管内，每管5m1，　0.06MPa灭菌30min。 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

18 吲哚试验 取3支胰蛋白水培养基培养基，1号接种大肠杆菌，2号接种产气杆菌，第3支接未知菌 37℃培养24h～48h。
沿试管壁滴加数滴吲哚试剂于培养物液面，观察结果。 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

19 硫化氢试验 某些细菌能分解含硫的氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸等)，产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐反应，形成黑色的硫化铁沉淀，为硫化氢试验阳性。 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

20 硫化氢试验培养基 成分：蛋白胨 10g NaCl 2.5g 柠檬酸铁铵 0.25g 硫代硫酸钠 0.25g 琼脂 4g 水 500ml
制法： 1．用水先将琼脂和蛋白胨加热溶解，冷至60℃加入其他成分，溶化后加水至所需量。 2．调pH至7.2后分装到80支试管，0.1MPa 20min灭菌后备用。 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

21 硫化氢试验 取3支柠檬酸铁铵半固体培养基，采用穿刺接种的方法，1号接种大肠杆菌，2号接种变形杆菌，第3支接未知菌．
37℃培养24h观察结果。 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

22 明胶液化试验 蛋白质和氨基酸一般作为微生物的氮源外，但是当缺乏糖类物质时，它们也可作为微生物的碳源和能源。
明胶是由蛋白质经水解产生，在25℃以下可维持凝胶状态，以固体状态存在，而在25℃以上时明胶就会液化。 有些微生物可产生一种称为明胶酶的胞外酶，水解这种蛋白质，而使明胶液化，甚至在4℃仍能保持液化状态。 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

23 明胶液化培养基 成分：牛肉膏 2.5g 蛋白胨 5g NaCl 2.5g 明胶 100g 蒸馏水 500m1
制法：将上述成分加热溶化，调pH7.0，分装到100支试管，每支5ml。0.06MPa 30min灭菌。 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

24 明胶液化试验 取3支营养明胶培养基，采用穿刺接种的方法，1号接种大肠杆菌，2号接种枯草杆菌，第3支接未知菌．
37℃培养48h后,将明胶培养基轻轻放入4℃冰箱30min，观察明胶的液化状况。 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

25 淀粉水解实验 微生物对大分子的淀粉、蛋白质和脂肪不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质分解成小分子物质才能被微生物吸收利用。胞外酶主要是水解酶，通过加水裂解大分子物质为较小的化合物，使其能被运输到细胞内。如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精、双糖和单糖；脂肪酶水解脂肪为甘油和脂肪酸；蛋白酶水解蛋白质为氨基酸等。这些过程可以通过观察细菌菌落周围物质的变化来证实。如可以用滴加碘液到菌落周围看是否变蓝色来检查是否产生淀粉酶。脂肪水解后产生脂肪酸会使培养基pH下降，可以在培养基中事先加入中性红试剂，培养基会从淡红色变为深红色。 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

26 淀粉水解实验 把淀粉平板培养基分成六部分，分别按下图方式接上提供的五种菌，留一区作为对照。 图5-1 淀粉水解实验接菌图
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27 柠檬酸盐利用试验 柠檬酸盐培养基系一综合性培养基，其中柠檬酸钠为碳的唯一来源。而磷酸二氢铵是氮的唯一来源。
有的细菌如产气杆菌，能利用柠檬酸钠为碳源，因此能在柠檬酸盐培养基上生长，并分解柠檬酸盐后产生碳酸盐，使培养基变为碱性。 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

28 柠檬酸盐培养基 成分：氯化钠 2.5g 硫酸镁 0.1g 磷酸氢二铵 0.5g 磷酸二氢钾 0.5g 柠檬酸钠 1g 琼脂 10g
1%溴麝香草酚蓝酒精液 5ml 水 ml 制法： 1．将上述各成分(溴麝香草酚蓝除外)加热溶解，矫正至pH6.8，以脱脂棉过滤。 2．加入溴麝香草酚蓝混匀，分装试管，每管约5ml。 3．高压灭菌0.1MPa 20min后制成斜面。 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

29 柠檬酸盐利用试验 取3支柠檬酸钠斜面培养基， 1号接种大肠杆菌，2号接种产气杆菌，第3支接未知菌． 37℃培养24h观察结果。
培养基变深蓝色者为阳 性。培养基不变色，则 继续培养5～7天，培养 基仍不变色者为阴性。 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

30 结果与讨论 记录或用数码相机拍下上述各试验结果； 在吲哚试验和硫化氢产生试验中细菌各分解哪种氨基酸?
假设某种微生物可以有氧代谢葡萄糖，发酵试验应该出现怎样的结果? 通过哪些生理生化反应可以区分大肠杆菌和变形杆菌? 已知该未知菌最佳生长温度为32℃，使用伯杰氏细菌鉴定手册，根据以前的gram染色结果和本实验结果能判断出是什么菌吗？如果需要进一步鉴定，还需要设计哪些实验？ 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

31 准备培养基 淀粉培养基250ml*2/500ml三角瓶 蛋白胨5g, 牛肉粉5g,可溶性淀粉2g,
NaCl 5g, 琼脂20g,水1000ml, pH 24-25个平皿/组 生长曲线用培养基： 牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基, 配方（for 1000mL）: 牛肉粉3+蛋白胨10+NaCl 5+葡萄糖10(g/L), pH7.5 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

32 调课通知 11.24(周一班),11.25 (周二班),11.24或25(周三班） 8:30am做生长曲线和啤酒酸奶实验(一天)晚上10:30之前结束实验. 12.3 (周一班)，12.4 (周二班),12.5 (周三班）下午考试 1：30，2:45, 4:00分批开始考试(考试50分钟，每批次15人) 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：

33 谢谢大家! 史上最快最全的网络文档批量下载、上传、处理，尽在：