12 養菌與滅菌 微生物之增殖.

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1 12 養菌與滅菌 微生物之增殖

2 細 菌

3 細菌及黴菌之生長最適酸鹼值，分別約為pH7及pH5。因而市售培養基，例如NA（或NB）及PDA（或PDB）之酸鹼值，皆已分別調整為pH7及pH5。

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5 微生物之環境 微生物之生長對於溫度會有依賴性，可分為最低、最適、最高的三種主要溫度。

6 微生物之環境 依最適生長溫度的不同，而可將微生物分為低溫菌、中溫菌、高溫菌。至於溫度範圍並無依定的規範，因而常有混淆之情形發生。為了方便記憶，或可採用最適溫度來作為區別之依據。

7 微生物之環境 依微生物種類的不同，所適合生長之酸鹼值亦會有所差異。為了方便記憶，可將黴菌及藻類的適合生長酸鹼值定為pH4-6；酵母菌的定為pH5-7；細菌的定為pH7-8。

8 微生物之營養

9 生化工程應用 E. coli 大腸桿菌之生長曲線
實驗操作日期： 報告者：化工所研一陳克強 黃智銘

10 實驗流程 挑菌， 培養基選擇 Overnight culture Autoclave Shaking bath 培養 分光光度計測量細菌濃度
數據分析

11 Autoclave（滅菌）--Autoclave之目的
生物工程的實驗要求精確，稍一點污染便會導致失敗，來自外界無數看不見的菌類，都可能在操作時造成污染，為確保實驗儀器、設備無菌，在使用前必須先加以滅菌。

12 Autoclave（滅菌） --操作條件 溫度---120～125℃ 壓力---2 atm

13 Autoclave（滅菌）--操作時間 固體---25～30分鐘 液體---15分鐘

14 medium（培養基） M9 mediuml： LB medium：
Na2HPO4‧7H2O 磷源 KH2PO 磷源 NaCl NH4Cl 氮源 MgSO 硫源 CaCl2 glucose 碳源 有時Na、K、Mg、Ca等金屬離子可作為Coemzyme （輔）其所需量很少。 LB medium： Tryptone-b Yeast extract-B NaCl

15 養菌挑菌 (一) 為避免挑菌時污染菌種，以經滅菌的木棒摘取，為避免木棒受污染，必須小心拿取木棒末端。

16 養菌挑菌 (二) 以木棒挑取固態培養基上的一個菌落 （E. coli VJS676），置入含有medium的試管中。

17 Overnight culture 旋轉式震盪機中以37℃、轉速：85 rpm，作隔夜培養，一般培養12-16小時。

18 殺菌： 高溫高壓﹝125℃ ~140℃ ﹞ heat sterilizer, auto clave
化學藥品 酒精，detergent﹝SDS…等﹞ 過濾

19 Fig. 11.1

20 Fig. 11.2a

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22 Fig. 11.2d

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25 三角錐形瓶shaking bath培養 300ml三角錐形瓶中加入30 ml LB medium於shaking bath中，用37℃，108 rpm轉速培養起始濃度設定為0.05（以O.D.值表示），故於Overnight culture所得之菌中，取出0.442ml 菌液，加入錐形瓶中培養。

26 測量O.D----抽樣 抽樣—每隔30分鐘以滴管吸取樣品1ml於比色槽中。

27 Determining cell mass dry weight optical density (O.D.) spectrophotometer O.D. 550 O.D. 600

28 Fig. 7.17

29 Fig. 7.18

30 Fig. 7.19

31 測量O.D. ----量測 利用分光光度計測量於O.D. 600nm時的吸收度。

32 圖表.1 Growth curve of cell Time (hr)