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T-SPOT.TB诊断结核感染 临床应用进展
河南省胸科医院 刘欣欣
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结核的现状 我国是世界上22个结核病高负担国家之一，结核感染导致的死亡人数是其他传染性疾病总死亡人数的2倍以上。
结核病是全球严重的公共卫生问题之一。据WHO统计，全球约有20亿人感染结核分枝杆菌，每年有约200万人死于结核。 我国是世界上22个结核病高负担国家之一，结核感染导致的死亡人数是其他传染性疾病总死亡人数的2倍以上。
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结核的传统诊断手段 结核菌素皮试： 细菌学检查：常规培养：2月；快速培养：1周；
低敏感性：免疫力低下人群中其敏感性大大降低。 低特异性：与卡介苗接种和其他环境分枝杆菌有交叉，易造成“假阳性”结果。 细菌学检查：常规培养：2月；快速培养：1周； 阳性率取决于采集标本中细菌数量，不利于早期诊断。 病理学检查：阳性率低，对取材标本有较高要求，有创伤，对肉芽肿性病变需进一步鉴别。
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基于T淋巴细胞检测结核感染的原理 结核感染的免疫应答反应以细胞免疫为主，结核感染后体内长期存在抗原特异性的记忆性T细胞
当再次遇到抗原刺激时，能迅速活化增殖，释放r干扰素 r干扰素是结核分枝杆菌感染后机体免疫应答中最重要的细胞因子
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基于T淋巴细胞检测结核感染的原理 T-SPOT.TB技术：
利用结核杆菌感染者外周血单个核细胞（PBMC）中存在结核特异性T细胞，这些淋巴细胞在受到结核特异 抗原刺激后分泌r干扰素而设计的T细胞免疫斑点试验。 检测外周血中受结核特异抗原刺激释放r干扰素的T淋巴细胞，经酶联免疫显色后，通过ELISPOT分析系统 对斑点进行计数，1个斑点代表一个细胞，计算出抗原特异性细胞的频率。
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基于T淋巴细胞检测结核感染的原理 包
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基于T淋巴细胞检测结核感染的原理
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基于T淋巴细胞检测结核感染的原理
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基于T淋巴细胞检测结核感染的原理 空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑点数大于20时视为试验有效
T-SPOT.TB试验结果用每106 PBMCs中斑点形成细胞（SFCs）的数目来描述，即SFCs/106 PBMCs
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T-SPOT.TB的临床意义 T-SPOT.TB高灵敏度
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T-SPOT.TB的临床意义 种类 内容摘要 受试者数量 文献发表 活动性结核/灵敏度
将T-SPOT.TB的检测结果与最后通过涂片和培养确诊的结果进行比较。包括牛型结核杆菌和非洲型结核杆菌感染的患者。T-SPOT.TB的灵敏度为97.2%。（CI %） 72 Meier et al Eur J Microbiol Infect Dis (2005)；24: 在经培养确诊的活动性结核受试者中，T-SPOT.TB的灵敏度为96.6%。其中29例免疫力低下患者，T-SPOT.TB的灵敏度为100% 87 Lee et al. ERJ 2006; 28:24–30 在确诊病例（涂片或培养阳性）和临床诊断病例（有临床症状和抗痨治疗有效）中，T-SPOT.TB的灵敏度为90.3%，并且不受CD4细胞数量影响。 30 Clark et al. Clin. Exp. Imm. 2007; 150(2):238-44 在经痰培养或肺部病变组织病理活检确诊的结核患者中，T-SPOT.TB的灵敏度为92%。 140 Kang et al Chest. 2007 Sep;132(3):959-65 在确诊的肺结核患者和疑似肺外结核患者中，T-SPOT.TB的阳性率94%。 32 Kim et al. Arch Intern Med. 2007; 167;20: 在免疫力正常和免疫力低下的受试人群中，T-SPOT.TB的灵敏度分别为94%和95%。所有受试者中，42%为肺外结核患者。 186 Kim et al. Am J Med 2009；122, 经培养确诊、抗痨治疗不超过2周的结核患者用T-SPOT.TB检测，阳性率98%（57/58）。 58 Janssens et al ERJ 2007；30(4):722-8 在经培养确诊的活动性结核患者中，T-SPOT.TB的灵敏度为94%。 Dominguez et al Clin Vacc Immunol 2008; 15;168-71 在经培养确诊的活动性结核患者中，T-SPOT.TB的灵敏度为94.1%。 270 Chee et al J Clin Microbiol. 2008; 46(6):
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T-SPOT.TB的临床意义 T-SPOT.TB高特异性 ESAT-6＆CFP 10均来自结核分枝杆菌基因组RD1区域
仅结核分枝杆菌复合群（人型、牛型、非洲型）存在 RD1区基因 卡介苗和大多数环境分枝杆菌缺失RD1区基因 T-SPOT.TB不会受卡介苗接种影响
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T-SPOT.TB的临床意义 种类 内容摘要 受试者数量 文献发表 特异性
14 Adams et al Sc. J Inf. Dis.. 2008;40(3): 经过结核筛查的无症状的受试者，T-SPOT.TB检测结果全部为阴性，特异性100%。 47 Clark et al. Clin. Exp. Imm. 2007; 150(2):238-44 在德国用T-SPOT.TB对健康的卫生保健工作者进行筛查。仅1例阳性（1/95） ，为影像学工作者，接触病人超过35年。 TST检测假阳性结果34% （32/95）。 95 Barsegian et al. J of Hospital Inf 2008；69(1):69-76 在接触结核的健康医务工作者和健康对照受试者中用TST和T-SPOT.TB检测。155健康医务工作者中，TST阳性的27例，而T-SPOT.TB仅3例阳性。健康对照组T-SPOT.TB全部阴性而TST有3例阳性。 218 Storla et al. BMC Infectious Diseases 2009,9:60
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基于T淋巴细胞检测结核感染的原理 T-SPOT.TB在诊断结核感染方面具有良好的敏感性和特异性，在现有结核诊断方法存在缺陷的今天， T-SPOT.TB 可以给临床诊断提供参考。 基于结核抗原特异性T细胞向病变部位集中的特点， T-SPOT.TB的检测物已不局限于静脉血，支气管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、脑脊液等也可用于对肺内及肺外结核的诊断。
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