植物组织培养 第9章 常见植物的脱毒与快速繁殖技术 大 家 好 ！.

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1 植物组织培养 第9章 常见植物的脱毒与快速繁殖技术 大 家 好 ！

2 本章主要内容(4学时) 蔬菜的脱毒与快繁 果树的脱毒与快繁 花卉植物的脱毒与快繁 农作物的脱毒与快繁 药用植物的试管快繁 树木的脱毒与快繁
第9章 常见植物的脱毒 与快速繁殖技术 本章主要内容(4学时) 蔬菜的脱毒与快繁 果树的脱毒与快繁 花卉植物的脱毒与快繁 农作物的脱毒与快繁 药用植物的试管快繁 树木的脱毒与快繁

3 本章教学目的与要求 (1)掌握马铃薯的生物学习性，掌握马铃薯脱毒培养的过程以及马铃薯脱毒苗的鉴定方法；掌握番茄的生物学特性及快速繁殖方法；
第9章 常见植物的脱毒 与快速繁殖技术 本章教学目的与要求 (1)掌握马铃薯的生物学习性，掌握马铃薯脱毒培养的过程以及马铃薯脱毒苗的鉴定方法；掌握番茄的生物学特性及快速繁殖方法； (2)掌握苹果的脱 毒方法与快繁技术；掌握葡萄的脱毒与快技术；掌握草莓的脱 毒与快繁技术； (3)掌握兰花、香石竹、菊花、非洲菊、矮牵牛、百合等花卉的生物学特性，组培快速繁殖方法及自然繁殖法； (4)掌握甘薯的生物学特性，脱毒与快繁的方法及技术； (5)掌握芦荟、桔梗等药用植物的快繁技术； (6)掌握毛白杨、河北杨等绿化苗木的快繁技术。

4 第9章常见植物的脱毒 与快速繁殖技术 第一节 蔬菜的脱毒与快繁 蕃茄 马铃薯

5 第一节 蔬菜脱毒与快繁 一、马铃薯的组织培养

6 第一节 蔬菜脱毒与快繁 微型薯

7 第一节 蔬菜脱毒与快繁 马铃薯是一种全球性的重要经济作物。适应性广，营养价值高，耐贮藏适运输，既是一种重要的粮食作物也是一种调节市场供应的重要蔬菜。马铃薯原产于拉丁美洲，当被发现可以食用后，很快传到世界各地，成为栽培很广的一种作物。

8 马铃薯病毒的种类 危害有17种之多，如X病毒、S病毒、Y病毒、M病毒、A病毒、花叶病毒、纺锤形块茎病毒等。
第一节 蔬菜脱毒与快繁 马铃薯病毒的种类 危害有17种之多，如X病毒、S病毒、Y病毒、M病毒、A病毒、花叶病毒、纺锤形块茎病毒等。 马铃薯病毒可使块茎产量减少50%~80%。

9 （一）、马铃薯特性和生物学习性 1、形态特性 根 根系由出生根和匍匐根组成。 茎 分地上部分和地下部分。 叶 全缘，心脏形。
第一节 蔬菜脱毒与快繁 （一）、马铃薯特性和生物学习性 1、形态特性 根 根系由出生根和匍匐根组成。 茎 分地上部分和地下部分。 叶 全缘，心脏形。 花 为聚伞花序。 果实 浆果。

10 2、 生物学习性 马铃薯性喜冷气候，不耐高温和霜冻。 发芽适温为12~18℃。 地上茎叶生长温度为17~21℃。
第一节 蔬菜脱毒与快繁 2、 生物学习性 马铃薯性喜冷气候，不耐高温和霜冻。 发芽适温为12~18℃。 地上茎叶生长温度为17~21℃。 块茎形成要求昼温14~24℃，夜温12~14℃。 结薯期要求12h左右的短日照和疏松、湿润、肥沃以及通气良好的土壤条件。土壤板结，薯块表面粗糙和薯形不整。

11 （二）、马铃薯脱毒技术 通过微茎尖组织培养技术能从马铃薯体内脱除PLRV、PVY、PVA、PAF、PVG、PVM、PSW等病毒。
第一节 蔬菜脱毒与快繁 （二）、马铃薯脱毒技术 通过微茎尖组织培养技术能从马铃薯体内脱除PLRV、PVY、PVA、PAF、PVG、PVM、PSW等病毒。

12 我国马铃薯栽培现状 全国现有马铃薯播种面积300多万公顷，每年需合格种薯45亿公斤，脱毒原种4亿公斤，脱毒小薯或微型薯45亿粒。
第一节 蔬菜脱毒与快繁 我国马铃薯栽培现状 全国现有马铃薯播种面积300多万公顷，每年需合格种薯45亿公斤，脱毒原种4亿公斤，脱毒小薯或微型薯45亿粒。 我国的马铃薯平均单产仅为13.60吨/公顷，是世界单产最高国这瑞士（48.80吨/公顷）的1/4。最主要的因素就是种薯质量差，品种布局不合理。

13 1．脱毒种薯生产程序 微茎尖组织培养-----诱导出苗-----联免疫吸附试验法或指示植物方法鉴定-----脱毒试管基础苗。
第一节 蔬菜脱毒与快繁 1．脱毒种薯生产程序 微茎尖组织培养-----诱导出苗-----联免疫吸附试验法或指示植物方法鉴定-----脱毒试管基础苗。 固体、液体培养基相结合-----扩繁基础苗----在防虫网室栽植或封闭温室扦插-----原原种（或称脱毒小薯）。原原种----原种1代----原种2代----良种1代-----良种2代。

14 第一节 蔬菜脱毒与快繁 2．茎尖培养脱毒 （1）茎尖消毒 一般在室内发芽，芽经热处理（38℃）2周。然后取1厘米的茎尖，水洗干净，无菌条件下先用70％的酒精浸组织15-20秒，再用2％次氯酸钠溶液浸泡4--5min，然后用无菌水冲洗3次。

15 第一节 蔬菜脱毒与快繁 取材和接种 把消毒芽在解剖镜下逐层剥去幼叶，露出圆滑的生长点，留1-2个叶原基，0.2—0.3毫米，随即接种于MS液体培养基上，每升加0.1mgNAA 、 0.2mgGA3、0.5BA，2%蔗糖，p H值5.8。

16 培养条件： 温度：21~25℃ 光照度：2000-3000 lx 光照时间：12h/d
第一节 蔬菜脱毒与快繁 培养条件： 温度：21~25℃ 光照度： lx 光照时间：12h/d 2-3周长愈伤，4-5周长绿点，3--6月长成2-3厘米小芽，越慢越好，出芽很快的扔掉。

17 第一节 蔬菜脱毒与快繁 （2） 继代和生根 培养成功的马铃薯脱毒苗，经ELISA（试剂盒）鉴定后（试管苗应每3月检测一次，每年4次）采用固体、液体培养基相结合方法扩繁。 取试管苗单节切段扦插在（或平放）固体培养基上，每瓶可插20个左右茎段，经20d左右发育成5~10cm高小植株，继续进行切段繁殖，此法速度快，每月可繁殖5~8倍，试管苗多节接种在液体培养基上，进行浅层静止液体培养。

18 马铃薯继代培养基： MS+NAA0.2-0.5+D-泛酸钙10，3%蔗糖； 20-25℃，3000-4000LX，14-16hr光照；
第一节 蔬菜脱毒与快繁 马铃薯继代培养基： MS+NAA D-泛酸钙10，3%蔗糖； 20-25℃， LX，14-16hr光照； 每3周继代一次，单芽茎段约1厘米； 原则试管苗用2年—3年。

19 第一节 蔬菜脱毒与快繁 马铃薯试管苗

20 (3) 驯化 炼苗室温度：白天23~27℃，夜间不低于14℃。
第一节 蔬菜脱毒与快繁 (3) 驯化 炼苗室温度：白天23~27℃，夜间不低于14℃。 炼苗具体方法：移植前7d左右，将长有3~5片叶、高2~3cm的试管苗，在不开瓶口的状态下，从培养室移至温室排好。为防止强光、高温灼伤试管苗，在温室顶上加盖一层黑色遮阳网。

21 （三）、马铃薯无病毒苗的鉴定材料 1、指示植物鉴定
第一节 蔬菜脱毒与快繁 （三）、马铃薯无病毒苗的鉴定材料 1、指示植物鉴定 在马铃薯的病毒鉴定中，汁液鉴定是最常用的方法，Ｘ病毒、Ｓ病毒和纺锤块状病毒很容易通过汁液来接种。 2、鉴定寄主的准备 马铃薯常用的鉴定寄主植物有苋科的千日红，茄科的洋酸浆、毛曼佗罗等。寄主植物应在无虫网室中培养。

22 ３.接种液制备及接种 叶片洗净后。在消毒的研钵中研成糊状，用纱布滤出汁液，再用蒸馏水稀释１０倍作为接种物(混入６００目的金刚砂)。
第一节 蔬菜脱毒与快繁 ３.接种液制备及接种 叶片洗净后。在消毒的研钵中研成糊状，用纱布滤出汁液，再用蒸馏水稀释１０倍作为接种物(混入６００目的金刚砂)。 用左手心紧靠在鉴定寄主植物的背面，以右手指蘸取接种液，均匀的在叶背面擦过，以不造成叶片产生伤痕为度，最后把叶面上多余的接种物用清水洗净，放置在１５～２４的防虫室中，一般５－１０天可发病。

23 （四）、马铃薯无病毒株的繁殖 （１） 直接块茎繁殖 （２） 扦插繁殖 （３） 组织培养切段繁殖 A：继代培养 B：低温保存
第一节蔬菜脱毒与快繁 （四）、马铃薯无病毒株的繁殖 （１） 直接块茎繁殖 （２） 扦插繁殖 （３） 组织培养切段繁殖 A：继代培养 B：低温保存

24 二、番茄的组织培养 （一）、形态特征和生物学习性
第一节蔬菜脱毒与快繁 二、番茄的组织培养 （一）、形态特征和生物学习性 番茄的叶片为长羽状，在叶轴上生有裂片，顶生裂片，小裂片，间裂片，这些裂片是叶的深裂，缺刻的变化。两性花，聚伞花序，浆果。 蕃茄耐低温，喜光照，对水分需求量极大，喜肥，适于微酸性或中性土壤。

25 （二）、番茄的组织培养 第一节蔬菜脱毒与快繁 1、外植体：幼嫩叶片 。 2、消毒：用0.1%升汞浸泡4min，再用无菌水冲洗3-4次 。
3、愈伤组织培养条件：MS + BA2mg/L + IAA1mg/L ，温度25℃，每天光照10h，光照度2000lx 。 4、分化培养：分化培养基MS+BA4中。 5、生根培养：MS+IAA2 mg/L。 6、炼苗栽植：将培养有根试管苗的瓶口打开。煅炼3d后取出，洗去根上带有的培养基，移栽到营养土中，浇透水，并罩上塑料薄膜，以保温保湿，4-5d后去掉薄膜，新叶长出时即定植田间。

26 （三）、番茄的胚培养 第一节蔬菜脱毒与快繁
1、外植体制备：授粉后30-40d收获果皮完整的果实，果实放入95%乙醇中表面消毒，浸在5%NaCI中5min，用无菌蒸馏水充分淋洗。果实放在无菌吸水纸上，除去种子上的胶状复被。 2、培养基：启动：MS+硫胺素0.3mg/L+2,4-D2mg/L+椰乳100ml/L，pH6.0；继代： MS+ 2,4-D2mg/L；分化：MS+BA1.5mg/L；生根：MS+NAA2mg/L。 3、培养条件：愈伤组织启动和继代，用暗培养，27℃。芽再生和生根在室温20-30℃.16h/d 的光照，2000lx。

27 第9章常见植物的脱毒 与快速繁殖技术 第二节 果树的脱毒与快繁 葡萄 苹果 草莓

28 一、苹果的脱毒与快繁 （一）、苹果的形态特性和生物学特性 第二节果树脱毒与快繁
苹果（Malus pumila）属落叶乔木，树木高大。果实为假果。 苹果喜凉；喜光；适合在微酸性到中性土壤中栽种。

29 （二）、脱毒技术 1、病毒种类：苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎痘病毒和苹果茎沟病毒等 。
第二节果树脱毒与快繁 （二）、脱毒技术 1、病毒种类：苹果褪绿叶斑病毒、苹果茎痘病毒和苹果茎沟病毒等 。 2、微尖嫁接脱毒：砧木：去顶的离体培养幼苗，接穗：试管培养的无毒新稍；嫁接后培养生叶，移栽即可。 3、热处理脱毒：把植株置于38 ℃下25-50天。 4、茎尖培养脱毒：把 mm的茎尖离体培养。 5、脱毒苗的鉴定：抗血清法，电子 显微镜法，ELISA法、指示植物法。

30 （三）、苹果茎尖脱毒快繁技术 1、材料与消毒：带芽或茎尖的茎段；常规消毒，用无菌水洗3～5次 ；切茎尖约0.1～0.5mm。
第二节果树脱毒与快繁 （三）、苹果茎尖脱毒快繁技术 1、材料与消毒：带芽或茎尖的茎段；常规消毒，用无菌水洗3～5次 ；切茎尖约0.1～0.5mm。 2、芽的诱导：MS或LS+BA2+300～500CH或LH+3%蔗糖的培养基上，诱导芽的分化。 3、继代增殖培养：MS+BA0.5～1+CH300 培养基上增殖。 4、生根培养：1/2MS或 White，Nitsh附加IAA1、IBA0.2和GA33 等。

31 （四）苹果花粉培养 1、选材与预处理：选取中心花蕾吐红，周围花蕾明显增大，但花序尚未分离的花蕾，置于冰箱中1-3℃预处理。
第二节果树脱毒与快繁 （四）苹果花粉培养 1、选材与预处理：选取中心花蕾吐红，周围花蕾明显增大，但花序尚未分离的花蕾，置于冰箱中1-3℃预处理。 2、消毒：70%的酒精浸约0.5min，再在10%漂白粉上清夜中浸15～20min。 3、胚状体诱导：接种到MS+2,4-D0.4 + KT0.2 + IAA4 + 3～8%蔗糖培养基上，25～30℃下培养。 4、生根：同茎尖脱毒中所用方法。

32 （五）胚培养 1、取材消毒：取授粉30～50d内的幼果，用70%酒精擦拭。取出种子，剥出幼胚或成熟胚。
第二节果树脱毒与快繁 （五）胚培养 1、取材消毒：取授粉30～50d内的幼果，用70%酒精擦拭。取出种子，剥出幼胚或成熟胚。 2、启动培养：接种在BA0.25+IAA0.5的1/2MS培养基上。培养条件为25～30℃和1500～2000lx光照14h。 3、分化增殖：移植到加有BA0.5～1.0和CH300的1/2MS培养基上 ，在光下培养条件同上。 4、生根培养：同茎尖培养。

33 二、葡萄的脱毒与快繁 （一）、形态特征和生物学习性
第二节果树脱毒与快繁 二、葡萄的脱毒与快繁 （一）、形态特征和生物学习性 葡萄属落叶木质藤本植物，葡萄地上部分的茎细。节上具有卷须，可向上攀援。叶近圆型或卵型，3～5裂。 葡萄原产于温带地区，不太抗寒。葡萄的根系抗寒力很弱，在－5～－7℃时即受冻。

34 （二）、葡萄的组织培养 第二节果树脱毒与快繁
1、选材接种：从生长旺盛的葡萄新梢顶端取1～2㎝的茎尖。消毒。分离出约2㎜长的茎尖，接种到培养基上。 2、培养基：MS培养基（无机盐减半为好），再添加BA1～2，NAA0.01，LH100，蔗糖2%，琼脂0.6%，而B5培养基愈伤组织化严重，茎尖生长不好。 3、苗分化：BA0.5，同时添加GA30.2，黑暗处理可促进幼茎的伸成，提高成苗率。 4、根分化：将苗转入MS+IAA0.4+NAA0.05培养基中进行生根。

35 第二节果树脱毒与快繁 （三）、葡萄无病毒苗的培养  葡萄受到26种病毒的危害。由于病毒的危害，葡萄的长势减弱，产量降低，果实的糖分含量减少，风味变劣。葡萄卷叶病是危害最大的病毒病。

36 （三）、葡萄无病毒苗的培养 第二节果树脱毒与快繁 1、热处理脱毒：
（三）、葡萄无病毒苗的培养  1、热处理脱毒： （1）葡萄无性系处理：材料置于38℃，CO21200×10-6的人工空气侯箱内。经30min处理，较易从枝条尖端或休眠芽中除去扇叶病毒。 （2）将感染材料的修面芽插入健康指示植物的蔓中，然后在38℃的环境中保持2个月，以后取出枝条和接种芽继续生长。 （3） 直接将葡萄蔓浸泡在50℃的 温水中10～20min，可以治疗皮尔斯病，但不能治疗黄点病及卷叶病。

37 （三）、葡萄无病毒苗的培养 第二节果树脱毒与快繁 2、组织培养脱毒技术
（三）、葡萄无病毒苗的培养  2、组织培养脱毒技术 （1）、茎尖接种后变绿、增大期的培养：在25℃，相对湿度80%，16h的长日照条件下水培生成的嫩茎取0.2～0.3mm 茎尖接种于 1/2MS，添加NAA0.1，BA1.0，Kt0.5，腺嘌呤4.0，蔗糖30g/L，琼脂6.0，pH5.8培养基上。 （2） 从畸形叶和茎叶伸长期：采用1/2MS，添加IAA0.2，BA0.1，KT0.5，腺嘌呤4.0，蔗糖30g/L的培养基。 （3）地上部和地下部的伸长期：Galzy（1964）培养基，添加NAA0.1。

38 三、草莓的脱毒与快繁 （一）、形态特征和生物习性
第二节果树脱毒与快繁 三、草莓的脱毒与快繁 （一）、形态特征和生物习性 草莓（Fragaria）属多年生草本植物，植株矮小，呈半平卧丛状生长，基生三出复叶。果实为聚合瘦果生于花托上。 草莓喜光但又较耐阴，要求肥沃、疏松、透水、通气的中性微酸性或微碱性土壤。

39 （二）、草莓脱毒苗的培养 1、热处理脱毒 将草莓植株在40～41℃温度下处理4～6周。 2、微茎尖脱毒
第二节果树脱毒与快繁 （二）、草莓脱毒苗的培养 1、热处理脱毒 将草莓植株在40～41℃温度下处理4～6周。 2、微茎尖脱毒 （1）、初代培养 ：取草莓顶芽，用自来水流水冲洗2～4h，然后剥去外层叶片，消毒， 切取0.2mm的茎尖。接入MS + BA NAA0.25培养基中。培养条件为22～25℃，日照16～18h光强3000lx。

40 （二）、草莓脱毒苗的培养 (2) 继代培养：把芽丛割成芽丛小块，转入MS培养基中，令其长大 。并进行分株，扩大繁殖。
第二节果树脱毒与快繁 （二）、草莓脱毒苗的培养 (2) 继代培养：把芽丛割成芽丛小块，转入MS培养基中，令其长大 。并进行分株，扩大繁殖。 (3) 生根培养：在培养基中加入NAA1或IBA1。

41 第9章常见植物的脱毒 与快速繁殖技术 第三节 花卉植物的脱毒与快繁

42 第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 一、兰花的脱毒与快繁 兰花系兰科(Orchidaceae)植物，在自然条件下主要靠分株繁殖，繁殖率一年只有几倍，所以无法大量繁殖生产，而且由于长期进行无性繁殖，带病毒株增多，逐渐使种性降低，影响生长。 

43 （一）蝴蝶兰属的培养 第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 1、茎尖的培养
第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 （一）蝴蝶兰属的培养 1、茎尖的培养 (1)  取材消毒：将芽除去叶后，用水冲洗，再用10％的漂白粉表面灭菌15min。除去叶原基后，用5％的漂白粉中灭菌l0min，以后用无菌水冲洗3～5次。切取茎尖和腋芽，约2～3mm，接种到培养基中。 (2) 培养基：采用Vacin和Went培养基，添加15％CM进行液体培养，或加9g／L的琼脂进行固体培养。     (3)培养条件：为温度25℃，光照强度2000Lx，照明16～24h。液体培养基用60r／min的速度进行振荡培养。培养1个月即可形成原球茎球状体，即可进行继代增殖。

44 （一）蝴蝶兰属的培养 第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 2.花梗腋芽的培养
第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 （一）蝴蝶兰属的培养 2.花梗腋芽的培养 (1)采芽：将带腋芽的花梗进行冲洗，用10％的漂白粉溶液表面灭菌20min，除去腋芽的苞叶，再在5％的漂白粉溶液中表面灭菌3min，无菌水冲洗净。仅取腋芽，接种到培养基上。 (2)培养基和培养条件：用德兰属1号培养基培养原球状体，育苗用卡德兰属1号加10％香蕉汁；培养条件是光照强度2000Lx，光照时间每天13h，保持恒温25℃。 (3)继代培养：用原球茎球状体繁殖。 (4)育苗：不切块继续培养即可分化产生叶片，移到育苗的培养基，3～6个月可得到能栽植的苗。

45 （一）蝴蝶兰属的培养 第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 3.叶片的培养：
第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 （一）蝴蝶兰属的培养 3.叶片的培养： (1)取材：叶片是从试管内培养的材料上切取。取展开叶最上部先端、中央或基部约6～8mm2 。 (2)培养基和培养条件：用 Kyoto改良培养基，加复合肥料3.5g／L、肌醇1000、烟酸1、维生素B11、NAAl、腺嘌呤10、BAl0、蔗糖2％、琼脂1.0％。 25℃恒温，光照500Lx,日照16h。 (3)继代培养：用改良的Kyoto培养基进行继代培养，或在Vacin和Went培养基中去掉蔗糖和琼脂，加20％的CM的液体培养基进行振荡培养。 (4)育苗：原球茎球状体2～3个月即可萌芽，形成细苗，以后转移到Kyoto培养基，加10％的香蕉汁，经数月后可得到能移f栽的大苗。

46 （二）、卡特兰的培养 第三节 花卉植物的 脱毒与快繁
第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 （二）、卡特兰的培养 1.取材和消毒：选择5～10cm长的嫩茎，从基部采芽。先用流水冲洗，切去叶片酒精，漂白粉等消毒。 2.培养基和培养条件：MS基本培养基，附加维生素，氨基酸，NAA0.186mg／L，Kt0.02mg／L，GA30.173mg／L，蔗糖30g／L，琼脂6g／L，不加CM。启动培养温度15～20℃，成活以后，则保持在25℃。光照强度 Lx，照明16～22h。 3.防止培养材料变褐方法：(1)采芽后，用无菌水冲洗再接种 (2)  在培养基中加(50～100)×10-6芸香甙。 (2)  开始培养到成活，保持温度15～20℃。 (4) 调pH值至5.5，减轻褐化，提高成活率。 (5)避免6～8月采芽（由于多酚类物质的积累，褐化较严重）。

47 二、香石竹的组织培养 （一）形态特性和生物学习性 第三节 花卉植物的 脱毒与快繁
第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 二、香石竹的组织培养 （一）形态特性和生物学习性 香石竹为石竹科石竹属草本植物，原产南欧地中海北岸。须根系，茎直立，多分枝，株高70～100cm，茎部半木质化。叶线状披针形，全缘，叶质较厚，上半部向外弯曲，对生，基部抱茎。花通常单生或2～3朵聚伞状排列。 石竹是一种中日性花卉。喜干燥、通风，，喜冷凉，最适宜的生长温度为19～21℃，忌高温多湿。喜保肥、通气、排水良好的腐殖质或砂质壤土，最适宜的土壤pH值为6～6.5。

48 （二）、组织培养育苗 第三节 花卉植物的 脱毒与快繁
第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 （二）、组织培养育苗 1、取材灭菌： 取长势健壮植株上较为粗壮的嫩芽，剥去成熟叶片，在清水中清洗后，常规消毒，切取 mm的茎尖。 2、培养基：选用MS或White培养基。附加BA或KT 0．5～2mg／L(单位下同)；NAA、IAA浓度为0．2～2，2,4-D为0.1～1。 3、分化增殖： 于MS附加BA2，IAA0.5进行分化；于MS附加BA0.5～2、IAA0. 5进行丛生芽诱导。 4、生根：于1/2MS上，温度20～25℃，光照强度20001x．光照10～12h/d。

49 三、菊花的组织培养 （一）形态特性和生物学习性 第三节 花卉植物的 脱毒与快繁
第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 三、菊花的组织培养 （一）形态特性和生物学习性 菊花系多年生植物，株高60-180cm，茎直立粗壮，多分枝。叶形大，互生，叶片有深缺刻。花序单生或聚生，边缘为舌状花，中部为筒状花，也有全为舌状或筒状花的，形状各异，种子为细小的瘦果，中间膨大，两端突出。 适宜的生育温度为15-25℃，喜阳光充足，通风良好，在光照条件下生长健壮。比较耐旱，不耐潮湿，忌低洼积水。秋菊、冬菊为典型的短日照植物，只有光照长度在12h以下时才能开花

50 第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 （二）、菊花的组织培养快速繁殖 1、取材：外植体很多，如茎段、侧芽、叶、花序梗、花序轴等，但最好采用茎尖或侧芽，其次是花序轴。经一般 灭菌过程后即可接种。 2、培养基与培养条件：MS、B5、N6、White 均可，多用MS。附加BA2～3mg／L，NAA0．02～0．2mg／L。 于22～28℃（24～26℃最佳）。光照12～16h/d，光强1000～4000Lx。

51 第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 （二）、菊花的组织培养快速繁殖 3、继代培养 ：可通过茎尖直接分化出新芽，或经愈伤组织分化出新芽；也可用茎切段作微型扦插繁殖（MS或MS+NAA0.1） 。 4、生根和移栽 ：将无根幼苗转入1／2 MS+NAA(或IBA)0.1的培养基中，经两周即可生根（培养条件同上） 。

52 第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 （三）、菊花花瓣的培养 1、取材：在菊花开花前2～3d将整个花蕾剪下，冲洗十几分钟，用75％的酒精浸泡10～15min进行表面灭菌，后用无菌水冲洗两次，再用10％的漂白粉澄清液浸泡20min后。切取舌状花约5mm见方大小 。 2、培养基与培养条件：MS培养基，添加BAl～3mg/L，NAA0.5～2mg／L。置于温度25℃左右，光照强度2000Lx，每天照光12h的条件下培养，或获得愈伤组织。

53 第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 （四）、菊花的脱毒 危害菊花的病毒有：①菊花斑纹病毒；②菊花矮缩类病毒；③菊花轻斑驳病毒；④番茄不孕病毒。此外还有畸花病毒、绿花病毒、褪绿斑驳病毒、花叶病毒等。 1、茎尖培养脱毒：取顶芽或腋芽经表面消毒后，切取0.5mm以下茎尖进行培养脱毒。 2、热处理脱毒：在35～36℃的条件下栽培2个月，可以达到脱毒的效果（但是热处理只能除去菊花矮缩类病毒和番茄不孕病毒）。

54 四、非洲菊的组织培养 （一）、形态特性和生物学习性 第三节 花卉植物的 脱毒与快繁
第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 四、非洲菊的组织培养 （一）、形态特性和生物学习性 非洲菊(Gerbera hybrida)属菊科大丁草属，多年生宿根草本花卉。全株具细毛，叶片基生，椭圆至长椭圆形。花序顶生，舌状花较大，排列成一轮或数轮。 非洲菊性喜冬季温和，夏季凉爽的气候条件。最适生长温度为20～25℃。4～5月和8～10月为盛花期。喜阳光充足的环境。土壤要求有机质丰富、排水良好、pH值为6～6.5的微酸性壤土。

55 （二）、非洲菊组织培养育苗 第三节 花卉植物的 脱毒与快繁
第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 （二）、非洲菊组织培养育苗 1、取材消毒：常用花托作为外植体，用0.1％的吐温浸泡10～15min，取出洗净后再放入0.1％氯化汞中消毒20min。将花托切成2-3mm见方的小块。 2、培养基与培养条件：初代培养基为MS+BA2mg／L(单位下同)十NAA0.2 + IAA0.2。培养条件为24土2℃，光照强度为2000～30001x，每天光照12～16h。 3、分化生根：转入MS+Kt5+IAA0.2培养基进行分化培养。待苗高2cm时，转移到I／2 MS 十 NAA0.1生根培养基中生根。

56 五、矮牵牛的组织培养 （一）、形态特性和生物学习性 第三节 花卉植物的 脱毒与快繁
第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 五、矮牵牛的组织培养 （一）、形态特性和生物学习性 矮牵牛(Petunia bybrida)，又名碧冬茄，茄科，矮牵牛属。多年生草本植物，株高40～60cm，茎直立或卧倒，全身被短毛。上部叶片对生，中下部叶片互生，卵圆形。花单生于枝顶或叶腋间，花冠喇叭状，花色丰富，朔果卵形。 矮牵牛原产南美洲。喜温暖，向阳和通风良好的环境条件，不耐寒，耐暑热，在炎热的夏季仍能正常开花，要求排水良好疏松的酸性沙质土地。   

57 第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 （二）、矮牵牛组织培养育苗 1、叶片培养 ：选择嫩叶作为外植体，进行常规消毒后将其切成5mm见方，接种到MS + BA0.5的培养基上诱导愈伤组织及丛生芽。所得芽丛接种于MS+BA0.05的继代培养基上。 2、茎尖茎段接种：选择茎尖、带芽的茎段作为外植体。消毒后，切取茎尖0.5cm或带腋芽茎段lcm接种到MS+BA1+IBA0.02的诱导培养基上。1周后，芽开始萌动，逐渐长大成新梢。继代可用切割茎段法进行。

58 六、百合的组织培养 （一）、形态特性和生物学习性 第三节 花卉植物的 脱毒与快繁
第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 六、百合的组织培养 （一）、形态特性和生物学习性 百合是百合科(Liliaceae)百合属植物的统称，为多年生的草本植物。鳞茎无皮，广卵形，白色或黄白色，茎高30～90cm，直立，上叶多而散生，披针形。花单生或数花横向着生茎顶，花朵呈喇叭状、筒状，有清香。 百合属于球根花卉，要求肥沃、疏松和排水良好的沙壤土，以利于鳞茎发育。百合喜微酸性土壤，土壤pH值在5.5～6.5最为适宜。

59 （二）、繁殖方法 1、分球：使用百合老鳞茎(母球)生长过程中于茎轴上逐渐形成小鳞茎 进行繁殖。 2、鳞片扦插：使用成熟鳞叶进行扦插。
第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 （二）、繁殖方法 1、分球：使用百合老鳞茎(母球)生长过程中于茎轴上逐渐形成小鳞茎 进行繁殖。 2、鳞片扦插：使用成熟鳞叶进行扦插。 3、叶插及分珠芽：使用地上茎进行扦插，或使用腋生珠芽进行繁殖。 4、播种。

60 （三）、百合组织培养育苗 1、花器的组织培养
第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 （三）、百合组织培养育苗 1、花器的组织培养 (1) 、取材和灭菌：采取开花前数日的花蕾。花蕾的表面用酒精灭菌，再在酒精灯上灼烧数秒钟，在无菌培养皿内剥开花蕾，花丝，子房，花柱等分别切取3～5mm长，接种到培养基上。也可用花瓣和萼片培养。 (2) 、培养基及培养条件：采用MS，KC等培养基，蔗糖浓度以7.0％为适，发芽和子球形成率可达90％左右。光照度2000Lx，每天照用15h，保温20℃。

61 第三节 花卉植物的 脱毒与快繁 （三）、百合组织培养育苗 2、鳞片组织培养 初代培养：切取0.5cm见方鳞片小块接人MS+2,4-D1+IAAI+Kt0.5培养基中，置于20土2℃，照光9-10h／d，光强1200Lx条件下培养。 诱导愈伤组织及不定芽。 继代培养：将愈伤组织转移到分化培养基（MS + NAA2 + IBAO.4 + Kt0.05）上，10周后，可分化出许多大小不等的鳞茎，并在小鳞茎的基部长出许多粗壮的根。

62 第9章常见植物的脱毒 与快速繁殖技术 第四节 农作物的脱毒与快繁

63 一、甘薯的脱毒与快繁 第四节 农作物的 脱毒与快繁
第四节 农作物的 脱毒与快繁 一、甘薯的脱毒与快繁 甘薯（Ipomoea batatas L. Lam）属于旋花科，是一年生植物。我国近年来甘薯种植面积达到666.7万公顷，占世界的80%以上。病毒病成为我国甘薯生产的最大障碍之一。 如：甘薯花椰菜花叶病毒（SPCLV），甘薯羽状斑驳病毒（SPFMV），甘薯潜隐病毒（SPLV），甘薯脉花叶病毒（SPVMV），甘薯轻斑驳病毒（SPMMV），甘薯黄矮病毒（SPYDV），烟草花叶病毒（TMV），烟草条纹病毒（TSV），黄瓜花叶病毒（CMV）等。

64 （一）、甘薯脱毒 第四节 农作物的 脱毒与快繁 1、取材：取枝条，去叶切成数段。每段带一个腋芽。 2、消毒：常规消毒。
第四节 农作物的 脱毒与快繁 （一）、甘薯脱毒 1、取材：取枝条，去叶切成数段。每段带一个腋芽。 2、消毒：常规消毒。 3、剥离茎尖：剥去顶芽和腋芽上较大的幼叶，切取 毫米含1-2个叶原基的茎尖组织，接种在培养基上。 4、茎尖培养培养基与培养条件：培养基为MS mg/L IAA mg/L BA ；培养于温度25-28℃，光照度 lx，光照14h/d的条件下。 5、茎尖苗的初级快繁：将小植株切段进行短枝扦插。切段直插于MS培养基中，培养条件同茎尖培养。 6、脱毒鉴定：病毒病症状学诊断法、指示植物检定法、电子显微镜检定法、血清学检测法

65 （二）、甘薯的快繁 第四节 农作物的 脱毒与快繁 1、脱毒苗的快繁：可使用1/2或1/4MS（大量元素）培养基进行增殖。
第四节 农作物的 脱毒与快繁 （二）、甘薯的快繁 1、脱毒苗的快繁：可使用1/2或1/4MS（大量元素）培养基进行增殖。 2、原原种的繁育 ：在无病毒土壤上种脱毒苗，让其结薯，即为原原种薯 。 3、原种的繁育 ：以原原种为种植材料在无病毒土壤中栽种，结薯即为原种。 4、种薯的繁育 ：种薯可分为不同的等级，一级种薯的生产要求：在隔离地块上栽培原种，地块四周500米以内的范围内不栽甘薯，种薯每种一年降一级。

66 （三）、脱毒试管苗的大规模移栽技术及管理方法
第四节 农作物的 脱毒与快繁 （三）、脱毒试管苗的大规模移栽技术及管理方法 1．培育壮苗 2．适当炼苗 3．精心移栽 4．控制湿、温、光等条件 5．适时定植 6．严防病虫害

67 第9章常见植物的脱毒 与快速繁殖技术 第五节 药用植物的试管快繁

68 一、芦荟的试管快繁 第五节 药用植物的 试管快繁 百合科芦荟属植物共有300多种， 为多年生常绿植物，分布于热带和来
第五节 药用植物的 试管快繁 一、芦荟的试管快繁 百合科芦荟属植物共有300多种， 为多年生常绿植物，分布于热带和来 热带地区。由于芦荟具有多种药用功效 和保健美容作用，近年来，芦荟产业已经在国内外成为新的开发热点。 芦荟植株生长数年后才开花结实，种子一般也很少，而且种子细小，又不耐保存，存放一年后发芽率就很低。 生产上常用的扦插和分株法都不能在短时间内提供大量种苗。因此，只有通过组织培养快繁方法，才能生产出大小一致、性状稳定的优良种苗。

69 一、芦荟的试管快繁 第五节 药用植物的 试管快繁
第五节 药用植物的 试管快繁 一、芦荟的试管快繁 1．初代培养物的建立：采用茎段和腋芽作为外植体 ，以MS为基本培养基，NAA为0.2mg/L，BA3-5mg/L 2．取材与消毒 ：截取上端嫩芽或侧芽，将生长点切成1-2cm的小块，冲洗干净，然后用2%洗洁精或饱和洗衣粉摇动5分钟。然后用70%的酒精灭菌1分钟，立即用0.15%升汞溶液再灭菌10分钟。最后用无菌水冲洗4-5次。 3．培养条件：温度26±3℃，光照10-12h/d，照度为 lx，空气湿度大，有利芦荟生长。

70 二、桔梗的组织培养 （一）、形态特性和生物学习性 第五节 药用植物的 试管快繁
第五节 药用植物的 试管快繁 二、桔梗的组织培养 （一）、形态特性和生物学习性 桔梗为桔梗科属多年生草本植物。株高30～90cm。根肥大肉质，圆锥形，茎直立，叶片卵状至卵状披针形，先端尖，基部楔形或近圆形，边缘有不规则锯齿，花单生或数朵成疏生的总状花序；花冠呈状，蓝紫色或白色，大型，直径3～5cm。蒴果倒卵圆形，成熟时先端裂开。 桔梗喜欢生长在阳光充足，温暖湿润，雨量充沛的丘陵地区。

71 （二）、桔梗的快繁 第五节 药用植物的 试管快繁 １、 播种：用种量0.5-1公斤/亩，播后畦面盖稻草保湿。播后半月左右即可发芽出苗。
第五节 药用植物的 试管快繁 （二）、桔梗的快繁 １、 播种：用种量0.5-1公斤/亩，播后畦面盖稻草保湿。播后半月左右即可发芽出苗。 ２、 组织培养：一般用茎尖和茎段作为外植体，接种和培养方法参照其他作物的方法。 ３、 移栽：桔梗喜肥，生长期间宜多施追肥，一般结合中耕除草时追肥。第一次亩施稀淡人畜粪废水1000－1500公斤，第二次亩施猪烘水1500－2000公斤，促进根部生长肥大，注意雨季排水。

72 第9章常见植物的脱毒 与快速繁殖技术 第六节 树木的脱毒与快繁

73 第六节 树木的脱毒与快繁 一、毛白杨的快繁 1、无菌苗的建立 采用休眠芽作外植体，经消毒后，削取2mm长，带有2~3个幼叶的茎尖 ，接种于MS + 0.5mg/LBA + 水解乳蛋白100mg/L的预培养基上，经5~6d后，选择未污染的茎尖转MS + 0.5mg/LBA mg/LNAA + 赖氨酸100mg/L上。 培养室温度25~27℃,日光灯连续照光，光照度为1000lx左右。经2~3个月培养，部分茎尖即可分化出芽。

74 第六节 树木的脱毒与快繁 一、毛白杨的快繁 2、扩大繁殖 （1）茎切段生芽扩大繁殖法：取诱导出的幼芽，从基部切下，转接到新的生根培养基上。（MS mg/L IBA + 盐酸硫胺素10mg/L + 蔗糖浓度为1.5%）。 （2）叶切块生芽扩大繁殖法：从叶基部中脉处切取1~1.5cm²并带有约0.5cm长叶柄的叶切块，转接到诱导培养基上（MS+0.25mg/L IAA+3%蔗糖+7%琼脂）。约经10d培养，即可从叶柄的切口处观察到有芽出现，之后逐渐增多成簇。

75 第六节 树木的脱毒与快繁 一、毛白杨的快繁 3、移栽与管理：打开瓶口炼苗，逐渐降低湿度，并逐渐增强光度，进行驯化，使新叶逐渐形成蜡质，产生表皮毛，逐渐恢复气孔功能，减少水分散失。初始光照应为日光的1/10,每3d增加10%，经过10～30d炼苗即可移入大田，避免中午强光。湿度，开始3d饱和湿度，其后每2～3d降低5%～8%，直到与大气相同。

76 二、河北杨的快繁 1、无菌苗的建立 （1）取材 以春季萌发的新梢或由根部萌发的新枝条作为外植体来源。截取嫩枝上部4~5cm作为接种材料。
第六节 树木的脱毒与快繁 二、河北杨的快繁 1、无菌苗的建立 （1）取材 以春季萌发的新梢或由根部萌发的新枝条作为外植体来源。截取嫩枝上部4~5cm作为接种材料。 （2）消毒、接种及培养条件 以70%的酒精消毒数秒，再用0.1%~0.2%的氯化汞消毒5~10min，然后用无菌水冲洗3~4次。材料接种后置于25±2℃培养室内进行培养，每天用日光灯照明13h，光照度为2000~3000lx。 （3）芽的分化 培养基是1/2MS大量元素+MS微量元素+0.3mg/L BA+0.05mg/L NAA+2.5%蔗糖+0.5%琼脂，pH5.8。

77 第六节 树木的脱毒与快繁 二、河北杨的快繁 2.扩大繁殖 采用分割带芽愈伤组织进行继代培养，培养基为1/2MS大量元素+MS微量元素+MS有机成分+0.3mg/L BA+2%蔗糖+0.6%琼脂。 3.根的诱导 当不定芽长至2~3cm高时，将其转接到生根培养基上（1/2MS大量元素+MS微量元素+MS有机物+0.02mg/L NAA+1.5%蔗糖+0.06%琼脂）。 4.移栽管理

78 第9章 常见植物的脱毒 与快速繁殖技术 本章小结： (1)马铃薯茎尖培养脱毒程序：①取材；②消毒；③接种；④培养基；⑤病毒鉴定。病毒鉴定方法主要有指示植物法、症状鉴定法。 (2)苹果花粉培养阶段组成：①选取适期花蕾；②花蕾预处理和消毒；③诱导胚状体形成；④诱导生根；⑤移栽。 (3)苹果的栽培管理要注意几个问题：①育苗技术；②土壤改良；③施肥方法；④灌溉时期；⑤整形和修剪技术。 (4)葡萄茎尖培养经过下列变化：茎尖接种后变绿，增大期；形成畸形叶期；芽形成和伸长期；形成小叶和叶伸长期；生根期；地上部和地下部伸长期；上盆期. (5)在葡萄栽培棚架是应用最广泛的类型。

79 第9章 常见植物的脱毒 与快速繁殖技术 本章小结： (6)草莓脱毒苗的培养主要有微茎尖培养和花粉培养两种。一般用嫁接法进行病毒鉴定。无毒苗的繁殖程序分为五步：鉴定出无毒苗、原种种苗培养、原种种苗繁殖、良种种苗繁殖和生产用苗繁殖。 (7)蝴蝶兰脱毒：茎尖培养——原球茎——继代培养——增殖——生根炼苗。通过原球茎增殖的方法，可大大提高繁殖速度，实现蝴蝶兰生产的工厂化育苗。 (8)香石竹的茎尖脱毒培养一般结合热处理：将带毒植株进行盆栽，放入人工控制箱内，采用38-40℃高温处理6-8周，再切1mm大小的茎尖培养。

80 第9章 常见植物的脱毒 与快速繁殖技术 本章小结： (9) 菊花的继代增殖，多数是诱导愈伤组织产生丛生芽而获得大量的试管苗。菊花生根有两种方法：嫩茎试管生根；无根嫩茎的扦插。 (10)百合经茎尖培养脱毒、鉴定合格后，可通过两种增殖方式：①经愈伤组织增殖；②是诱导分化不定芽。 (11) 侵染甘薯的病毒有十几种，甘薯脱毒快繁工艺流程：①脱毒；②快繁。脱毒试管苗栽培管理注意：培育壮苗；适当炼苗；精心移栽；控制湿、温、光等条件；适时定植；严防病虫害。 (12)桔梗的栽培管理注意：①播种;②移栽; ③ 桔梗喜肥，生长期间宜多施追肥。

81 第9章 常见植物的脱毒 与快速繁殖技术 谢谢!