第三章 药物杂质检查 Drug purity and its control

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1 第三章 药物杂质检查 Drug purity and its control
定义: 杂质是药物中存在的无治疗作用, 影响药物稳定性和疗效, 或者对人体有害的物质. ChP将任何影响药品纯度的物质均称为杂质

2 第一节 药物的杂质与限量 一 药物纯度(Purities of drugs)
第一节 药物的杂质与限量 一 药物纯度(Purities of drugs) 杂质存在将影响药物纯度, 杂质检查也叫纯度检查, 目的是保证用药安全, 有效. 四十年代生产的盐酸哌替啶(度冷丁)只有一种结构是有效的, 而产品中混有二种无效的异构体, 直到1970年用GC才将三种异构体分开. 早期使用的反应停是dl, 造成很多胎儿畸形, 后来通过对其不同异构体的代谢产物实验发现, R体具有安全的镇静作用, 而S体的代谢产物具有胎毒性和致畸作用.

3 人类对药物纯度的认识是在防治疾病的实践中积累起来，随着分离检测技术的进步，能进一步发现药物中存在的新杂质，从而加强对生产工艺过程的控制，不断提高药物的纯度。
例如在1848年发现阿片中的盐酸罂粟碱，1981年采用合成法进行生产. ChP1985采用目视比色法检查盐酸罂粟碱中的吗啡，后来对合成的盐酸罂粟碱中的杂质进行研究，采用TLC和IR进行分析，发现还含有一个未知的碱性物质，ChP1990将检查吗啡改为检查有关物质，检查方法为TLC；ChP2010将检查方法又改为HPLC，进一步提高了检测的专属性和灵敏度

4 二 杂质来源 来源: 生产中引入: 中间体, 付产物, 原料, 残留溶剂 无效, 低效晶型, 旋光异构体
二 杂质来源 来源: 生产中引入: 中间体, 付产物, 原料, 残留溶剂 无效, 低效晶型, 旋光异构体 储存中引入: 分解, 水解, 降解, 氧化等

5 例:乙酰化不完全 水杨酸(杂质) +

6 特殊杂质是在特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质，常称为有关物质(Related Substances /Compounds)
三、药物杂质的分类 种类: 按来源: 一般和特殊杂质 按性质: 信号杂质, 有害杂质和无(低)效杂质 按结构: 无机, 有机, 残留溶剂. 特殊杂质是在特定药物的生产和贮藏过程中引入的杂质，常称为有关物质(Related Substances /Compounds)

7 四. 杂质限量检查 药物的纯度是相对的，绝对纯净的药物是不存在的，考虑到:﹙1﹚工厂生产工艺及水平, ﹙2﹚人体耐受程度,﹙3﹚患者负担﹙生产成本﹚, 允许药品中有一定量的杂质存在, ∴杂质检查是限量检查, 即只需要检查杂质是否超出规定的限量. 允许限量的前提: ﹙1﹚不影响疗效, ﹙2﹚不产生毒付作用. ——在保证药物的质量可控和使用安全的前提下, 药物中所含杂质的最大允许量叫杂质限量.

8 三种检查方法 标准对照法 比较法 灵敏度法 检查方法: ﹙1﹚供试品和杂质对照品在相同条件下处理并比较;﹙2﹚一定条件下于供试品中加入试剂,观察有无正反应发生, 即由反应灵敏度控制限量 ; (3)测定杂质的绝对含量，如测定吸收度、pH值等. C×V ×100% S 由标准对照液的浓度和体积(C,V)控制限量 L＝

9 计算：应取标准铅溶液(10gPb/ml)多少ml？
1.比较法 例1.葡萄糖中重金属的检查 规定：含重金属≯百万分之五(5ppm) 计算：应取标准铅溶液(10gPb/ml)多少ml？

10 例2. 对乙酰氨基酚中氯化物的检查 对照品溶液: 标准NaCl溶液(10gCl-/ml) 方法：取5.0ml同法操作比较, 样品管的浊度不得更大. 计算：氯化物限量是多少(% )？

11 如：蒸馏水中氯化物的检查 2.在供试品溶液中加入试剂,在试验条件下反应,不得出现正反应. 即以检测条件下反应灵敏度控制杂质限量.
5滴 mL 0.2mg/50mL4µg/mL

12 规定： A310nm≯0.05 L=0.06% 3.取一定量供试品,在规定条件下测定待检杂质吸光度, 与规定限量比较,
例：肾上腺素中酮体的检查 规定： A310nm≯0.05 L=0.06% 供试品液(2.0mg/ml) 盐酸溶液 样品 (0.05mol/L) A310nm

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14 第二节 杂质的检查方法 因为药物中存在的杂质量很少，所以要选择一个灵敏度高，专属性强的方法，使药物对其所含微量杂质的检测不产生干扰 。

15 一、杂质的研究规范 （一）有机杂质在药品质量标准中的名称
1．以杂质的化学名称作为项目名称 当被检查的杂质是已知化合物时(特定杂质)，就以该化合物的化学名称作为质量标准中的项目名称；阿司匹林中的游离水杨酸。如果杂质的化学名太长，又无通用的简称，可选用相宜的简称或习称作为项目名称，并在质量标准起草说明中写明该已知杂质的结构式；如肾上腺素中的“酮体”。如果杂质亦无相应的简称或习称，则可使用“杂质A”、“杂质B”或“杂质Ⅰ”、“杂质Ⅱ”等作为特定检查的项目名称。

16 2．以某类杂质的总称作为项目名称: 当杂质不能明确为单一物质而又为某一类物质时，则以这类物质的总称作为项目名称。如 “其他生物碱”，“还原糖”和“总糖”，“聚合物”， “有关物质”。
3．以检测方法作为项目名称: 当被检查杂质的结构未知，亦不属于具体的类别时，可用“杂质吸光度”、“溶液透光率”、“易炭化物”等，以检查方法相应的名称作为项目名称。

17 （二）杂质检查项目的确定 杂质检查项目的确定要有针对性。应包括药物在质量研究和稳定性考察中检出的，并在批量生产中出现的杂质和降解产物。应根据其起始原料、生产工艺及稳定性情况确定。除降解产物和毒性杂质外，在原料中已控制的杂质，在制剂中一般不再控制。单一对映体药物，其可能共存的其他对映体应作为杂质检查。消旋体药物，当已有其单一对映体药物的法定质量标准时，应在该消旋体药物的质量标准中设旋光度检查项目。

18 （三）杂质限度的确定 杂质限量的确定要合理，在确保用药安全有效的前提下，应考虑到生产的可行性及批与批之间的正常波动，还要考虑药品本身的稳定性以及测定方法的误差。杂质限度的制订应考虑如下因素：1.杂质及含一定限量杂质的药品的毒理学研究结果；2.给药途径；3.每日剂量；4.治疗周期；5.给药人群；6.杂质药理学可能的研究结果；7.原料药的来源；

19 （四）杂质检查方法的选择与验证 药物中杂质的检测方法包括化学法、光谱法、色谱法等，因药物结构及杂质的不同采用不同的检测方法。有机杂质的检测方法多采用色谱法，特别是HPLC法。 用于杂质检查的分析方法要求专属、灵敏。

20 二、杂质的常用检查方法 （一）化学方法 1.显色反应检查法 当杂质与试剂产生颜色时，采用比色法控制杂质的限量，多为目视比色，例： 氯硝柳胺结构式如下： 需检查生产原料2-氯-4-硝基苯胺和5-氯水杨酸 5-氯水杨酸可以与三氯化铁试液反应生成紫色配位化合物，而产品不会。用灵敏度法进行检查：取本品0.50g，加水10ml，煮沸2分钟，放冷，滤过，滤液加三氯化铁试液数滴，不得显红色或紫色。 2-氯-4-硝基苯胺分子结构含有芳伯氨基，可以发生重氮化-偶合反应而呈色。

21 2.沉淀反应检查法 当杂质与试剂产生沉淀时，采用比浊法控制杂质的限量，也可以采用重量法测定杂质的量。
例： 盐酸肼屈嗪中游离肼的检查 方法：取本品0.10g，加水5ml与水杨醛的乙醇溶液 (1→20)0.1ml，1分钟内不得出现浑浊。 生物碱沉淀剂检查生物碱

22 3.生成气体的检查法 当杂质与试剂反应产生气体时，可用来控制杂质的限量。
如盐酸乙基吗啡中胺盐检查:OH-1/NH3. 4.滴定法 滴定剂只与杂质反应，以一定浓度的滴定液滴定药物中的杂质，可以定量地测定杂质的含量。 如VitE中生育酚的检查→铈量法。

23 (1)杂质对照品法：适用于杂质已知并有杂质对照品的情况.
（二）色谱方法 色谱法是有关物质检查的首选方法，特别是HPLC。 1．薄层色谱法 (1)杂质对照品法：适用于杂质已知并有杂质对照品的情况. 方法 根据杂质限量, 取供试品溶液和一定浓度的杂质对照品溶液, 分别点于同一薄层板上展开, 定位后进行检查.

24 （2）供试品(主成分)自身对照法 高低浓度对比法 适用于杂质的结构不能确定或无杂质对照品的情况. 例：氢化可的松中有关物质检查 供试液:3mg/ml 对照液:60g/ml(供试液稀释50倍) 判断:供试液的杂质斑点数≯3个, 且供试液的杂质斑点颜色≯对照液主斑点颜色.

25 （3）杂质对照品与供试液自身稀释法并用 硫酸奈替米星中有关物质检查 样品150mg/ml(样液), 1.5 mg/ml(标样1), 3mg/ml(标样2), 西梭米星对照1.44mg/ml(标样3) 样液如显杂质斑点, 颜色不得比标3的主斑点颜色深, 其他杂质斑点不得比标1的主斑点更深, 如有一个超过, 不得深于标2的主斑点. （4） 标准药物对照法 ——选用质量符合规定的与供试品相同的药物作为对照品. 供试品如显杂质斑点, 不得多于对照药物斑点数, 且颜色不得更深.

26 2. 高效液相色谱法(HPLC) 根据供试品与杂质的对照品保留时间相同, 并可以测定各杂质峰面积
（1）外标法 （杂质对照品法）适用于有杂质对照品, 如ASA中游离SA检查 （2）加校正因子的主成分自身对照法：适用于已知杂质的控制。以主成分为对照，用杂质对照品测定杂质的校正因子。杂质的校正因子和相对保留时间直接载入各品种质量标准中 。

27 （3）不加校正因子的主成分自身对照法 将供试液稀释成与杂质限量相当的溶液作为对照溶液，取供试品溶液和对照溶液，分别进样，除另有规定外，供试品溶液的记录时间应为主成分色谱峰保留时间的2倍，测量供试品溶液色谱中各杂质的峰面积，并与对照溶液主成分的峰面积比较.特别适于有关物质检查。 （4） 峰面积归一化法：w%=A杂/A总

28 3.气相色谱法(GC) 用于挥发性杂质检查, 检测器:FID, 温度， 柱子:类型和规格, 进样方式和进样量 载气种类和流速
方法: (1)外标法, (2)归一化法. (3) 标准加入法: 供试液+杂质对照品 进样二次 Cx= 4.毛细管电泳法 毛细管电泳法可以用于酶类药物中酶类杂质的检查。 C对 (Ais/Ax)-1

29 (三) 光谱分析法 1. 紫外-可见分光光度法 ——利用药物和待检杂质对光选择吸收性质的差异进行. 例1：肾上腺素中肾上腺酮的检查
例2：苯丙醇中苯丙酮检查: 测定A247/A258, 苯丙醇为0.59, 当含0.5%苯丙酮时, 比值为0.79. 规定供试品的A247/A258不得0.79.

30 例3 地蒽酚中二羟基蒽醌的检查 原理：二羟基蒽醌是地蒽酚制备的原料和氧化分解产物，它的三氯甲烷溶液在432nm处有最大吸收，而地蒽酚在该波长处几乎无吸收。 方法：地蒽酚的三氯甲烷溶液（0.10mg/ml）在432nm处测定，吸光度不得大于0.12，即相当于含二羟基蒽醌的量不大于2.0%。

31 2. 红外分光光度法 IR主要用于药物中无效或低效晶型的检查。如甲苯达唑有三种晶型，其中C晶型为有效晶型，A晶型为无效晶型。A晶型在640cm-1处有强吸收，C晶型在此波数处的吸收很弱；而在662cm-1处，A晶型的吸收很弱，C晶型却有较强吸收。中国药典检查方法为：取供试品与含A晶型为10%的甲苯达唑对照品各约25mg，分别用液体石蜡法测定红外光谱。在620cm-1和803cm-1波数处的最小吸收峰间连接一基线，再在640cm-1和662cm-1波数处的最大吸收峰之顶处作垂线与基线相交，用基线吸光度法求出相应吸收峰的吸光度值，供试品在约640cm-1和662cm-1波数处吸光度之比，不得大于含A晶型为10%的甲苯达唑对照品在该波数处的吸光度之比。

32 3. AAS(Atomic Absorption Spectrophotometry) 据蒸气相中被测元素的基态原子对特征辐射（光波）的吸收来测定该元素含量. 1)选择性好，抗干扰能力强
2)灵敏度高，且无焰法>火焰法 3)准确度高，且火焰法>无焰法

33 本品0.1g HCl(12)10ml 溶,加水至50mlB液;
供试品加限量待测元素对照液A 测定吸收度为a 供试品供试液B 测定吸收度为b 判断:b(a-b)符合规定. 如:Li2CO3中K检查: 本品0.1g HCl(12)10ml 溶,加水至50mlB液; 本品0.1g HCl(12)10ml 溶,加3mlK标液(10µg /ml),加水至50mlA液; 分别测定A,应符合规定. L: 0.03%.

34 （四）其他方法 1.热分析法 (Thermal analysis): 在程序控制温度下, 测定物质的理化性质与温度关系的分析方法.研究物质在受热过程中所发生的晶型转化、熔融、蒸发、脱水等物理变化，或热分解、氧化、还原等化学变化，以及伴随发生的温度、能量或重量改变的方法

35 (1) 热重分析 (thermogravimetric analysis， TGA)
程序控温下, 测定物质质量与温度的关系, T: ℃, 供试品1-20mg, 最多可达200mg. 例: T1:CaC2O4.H2O→CaC2O4+H2O T2: CaC2O4→CaCO3+CO T3: CaCO3→CaO+CO2 ⑴适合于贵重药物及空气中易氧化药物. ⑵样品用量少, 分析速度快, 给出信息多

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37 2.差示热分析(differential thermal analysis, DTA)
⑴样品发生吸热反应，样品T低于参比物，△T为负；⑵样品发生放热反应，样品T高于参比物，△T为正。  供试品发生放热反应温度高 于参比物质从而产生放热峰 供试品发生吸热反应温度低 于参比物质从而产生吸热峰

38 草酸钙在加热过程中有三个失重峰，相应地产生两个吸热峰和一个放热峰：
在134~226℃时，CaC2O4·H2O→CaC2O4+H2O，在DTA曲线上产生一个吸热峰； 在398~478℃时，CaC2O4→CaCO3+CO↑，在DTA曲线上产生一个放热峰； 在635~838℃时，CaCO3→CaO+CO2↑，在DTA曲线上产生一个吸热峰。

39 (differential scanning calorimetry, DSC)
3.差示扫描量热法 (differential scanning calorimetry, DSC) 分析中维持样品和参比物T相同, 测定维持该温度所需能量差, 根据峰的位置, 数目, 形状可用于药物熔点测定, 晶型及纯度分析. DSC用途：熔点测定、晶型鉴别和纯度测定——峰在横轴上位置、形状、数目与物质的性质有关

40 不同纯度苯甲酸的DSC曲线 标准品 98.6% 97.2%

41 2. 酸碱度检查法 药物中的碱性或酸性杂质检查时，可以利用药物与杂质之间的酸碱性的差异，进行检查。
（1）酸碱滴定法：在一定指示液下，用酸或碱滴定供试品溶液中的碱性或酸性杂质，以消耗酸或碱滴定液的毫升数作为限度指标。如苯甲酸钠。 （2）指示液法：将一定量指示液的变色pH范围作为供试液中酸碱性杂质的限度指标。如苯巴比妥。 （3）pH测定法：用电位法测定供试品溶液的pH，衡量其酸碱性杂质是否符合限量规定。

42 3．物理性状检查法 根据药物与杂质在臭味和挥发性的差异、颜色的差异、溶解行为的差异和旋光性等的差异进行检查。
药物中如存在具有特殊气味的杂质，可由气味判断该杂质的存在。 药物具有挥发性，杂质不易挥发。樟脑中不挥发物的检查，取供试品2.0g，在100℃加热使樟脑全部挥发并干燥至恒重；遗留残渣不得过1mg。 药物自身无色，但从生产中引入了有色的有关物质，或其分解产物有颜色。采用检查供试品溶液颜色的方法 药物和杂质的溶解性差异可检查溶液的澄清度 比旋度（或旋光度）的数值可以反映药物的纯度，限定光学异构体杂质的含量

43 第三节 一般杂质检查 一. 氯化物(chlorides)
第三节 一般杂质检查 一. 氯化物(chlorides) 供试品→水25mL,稀硝酸10mL,置50mL纳氏比色管.加水到40mL; 另取规定量的NaCl对照液→水→ 40mL 各加AgNO31 mL ,加水到50 mL,放5min,从上往下比浊. Cl-＋Ag+ → AgCl↓（白） 黑色的背景上 自上而下观察 操作: 平行试验比较两比色管的颜色或浊度,判断杂质限量是否符合规定.

44 讨论： 1. 在硝酸酸性下进行, 可加速AgCl沉淀形成, 避免其它沉淀产生.
2. 标准NaCl含10ugCl／ml, 取用标准5-8 ml，浊度梯度明显。 3. 若供试液不澄清，用含硝酸的蒸馏水洗去滤纸中氯化物后过滤。 4. 若供试液有色，按ChP规定处理：取二份供试液，一份加AgNO3，过滤，滤液加标准NaCl作对照，与另一份供试液有相同颜色背景，→内消色法。

45 5. 有机氯杂质，据氯连接方式不同，采取不同方法处理样品，得无机氯，依法检查。

46 葡萄糖中氯化物检查 0.60g 6.0mL (浓度：10gCl－/ml)

47 二. 硫酸盐（sulfates） 1. 在盐酸介质中进行, 可防止BaCO3, Ba3(PO4)2生成. 2. 标准K2SO4: 0
二. 硫酸盐（sulfates） 1. 在盐酸介质中进行, 可防止BaCO3, Ba3(PO4)2生成. 2. 标准K2SO4: 0.1mgSO4/ml, 比浊范围: 50 ml溶液中取1-5ml标液. 3. ChP加25%BaCl25ml反应.

48 三. 铁盐 (iron) 微量铁盐的存在会加速药物的氧化和降解， 硫氰酸盐法(ChP, USP) 取供试品加水25ml, 稀盐酸4ml,(NH4)2S2O8 50mg, 加水至35ml, 加显色剂30% NH4SCN3ml,加H2O至50ml, 若显色则与对照液比较. Fe3+＋6SCN－→[Fe(SCN)6]3－ 4ml 25ml d.HCl 30%硫氰酸铵 过硫酸铵50mg H2O 50ml 样品 标准溶液

49 1. 盐酸介质中, 可防止铁盐水解, 加入(NH4)2S2O8 可使供试品中Fe2+氧化成Fe3+, 且[Fe(SCN)6]3-稳定. 2
1. 盐酸介质中, 可防止铁盐水解, 加入(NH4)2S2O8 可使供试品中Fe2+氧化成Fe3+, 且[Fe(SCN)6]3-稳定 显色反应是可逆的，加过量的NH4SCN，使反应右移，并可消除其它阴离子与Fe3+的配位 反应（也可以适当提高酸度）。 标准液用Fe(NH4)(SO4)212H2O配制, 10ug Fe3+ /ml，加H2SO4防止铁盐水解, 50 ml比色液，目视比色取标液1-5ml，梯度明显。 用正丁醇提取反应液后比色，可以提高灵敏度。

50 　　　　 重金属影响药物的稳定性及安全性，指在弱酸性条件下能与硫离子作用显色的金属杂质，包括Ag, Pb, Hg, As, Bi, Cd, Cu, Sb, Sn, Co, Ni等，检查时以Pb作代表，ChP(2010)收载3种检查方法． 第一法．硫代乙酰胺法 四．重金属（heavy metals）

51 １．弱酸性下（PH3-3.5）, 硫代乙酰胺水解生成H2S，其S2-与Pb2+作用生成PbS沉淀． ２．用Pb(NO3)2配制标准储备液，临用前稀释成10ugPb/mL的应用液，适宜目视比色范围：10-20ug Pb/27mL比色液，USP固定取标准液２mL． ３．若供试品有色，在加硫代乙酰胺前，在对照管中滴加稀焦糖液或者其它无干扰的有色溶液，使之与供试品管颜色一致→外消色法，再在两管中分别加硫代乙酰胺后比色．

52 第二法（炽灼后检查法）：适于与有机分子结合, 含芳(杂)环, 难溶于水的药物中重金属检查． 供试品高温破坏后，其残渣加硝酸分解有机物后，蒸干，按第一法检查． １.控制温度５00－６00度，太低则灼烧不完全，太高则Pb会损失． ２.硝酸处理后，蒸干除尽，以防氧化H2S. 第三法（ Na2S法）: 适于酸性药物, 如巴比妥, 磺胺 碱性介质, NaOH5ml，水 20ml，pH= 显色剂用Na2S, 临用前现配.

53 第四法（微孔过滤法，ChP2005）适于限量低的药物(2-5g). 1. 供试品和对照液显色后分别过滤, 比较滤膜上铅斑颜色. 2

54 五. 砷盐 (一) 古蔡法 原理: 锌与酸作用产生新生态的氢, 后者与药物中微量As反应, 生成挥发的AsH3→遇HgBr2试纸, 产生黄色到棕色As斑, 与定量标准As 液制成的As斑比较颜色深浅, 判定结果. 黄色 棕色

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56 1. 用As2O3 配标准储备液, 临用前稀释成1ug/ml 的应用液, ChP用2ml标准液做标准As斑, HgBr2试纸灵敏度高, 但As斑不够稳定, ∴显色后立刻比较As斑颜色
2. As5+在酸性溶液中也可以被还原为AsH3,但是速度太慢, 在反应中加KI和酸性SnCl2, 可将As5+还原为As3+, 还可抑制微量Sb干扰.

57 3. Zn及供试品中含少量硫化物, 与酸作用产生H2S, 后者与HgBr2反应生成HgS, ChP用Pb(Ac)2棉花吸收H2S, (1)量多或者塞的过紧, 会影响AsH3通过, (2)量少除不尽H2S, ChP规定用量60mg, 装高60-80mm 供试品为硫化物时, 在酸性下生成H2S和SO2,与HgBr2作用干扰检查, 可加HNO3, 使其氧化生成SO42-消除干扰 药物溶于水, 直接检查, 若As以共价键结合,则先用碱破坏后, 小火炭化, 于 ℃灰化, 再依法检查 含锑的药物会发生类似反应, 生成锑斑, 干扰检查, 可改用白田道夫法检查→与SnCl2作用, 生成胶态砷, 比色.

58 (二)Ag-DDC法 silver diethyldithiocarbamate
第一步：同古蔡氏法生成砷化氢 第二步：砷化氢还原Ag-DDC溶液,产生红色的胶态银. 目视比色法 仪器分析 510nm

59 基本装置类似(一), 检查方法前面同(一), 后面有差别. 1
基本装置类似(一), 检查方法前面同(一), 后面有差别 生成的AsH3与Ag-DDC作用, 生成红色胶态Ag, 于510nm测A或目视比色 在有机碱介质中, 生成的H-DDC可被其吸收, 使反应向右移动, USP用吡啶, 其灵敏度高, 但吡啶有恶臭, ChP用三乙胺的氯仿溶液 Pb(Ac)2棉花60mg, 装高80mm, D管中精密加Ag-DDC溶液5ml, 取标准As对照液5ml a 灵敏度高 b 可仪器测定, 还可定量 c Sb干扰小

60 药物在规定条件下, 经干燥后, 失去的重量, 包括水和其他易挥发物, 如乙醇. (一) 常压恒温
六.干燥失重 药物在规定条件下, 经干燥后, 失去的重量, 包括水和其他易挥发物, 如乙醇. (一)  常压恒温 适于热稳定性好的药物, 105±2℃，干燥至恒重. (二)减压干燥 适合于mp低, 不稳定及水分难除去的药物.   (三)干燥剂干燥 适合于受热易分解or易挥发的药物, 常用干燥剂有变色硅胶, H2SO4, P2O5 等, 变色硅胶使用方便, 价廉, 无腐蚀, 吸水后变色, 105℃干燥后可重复使用. (四)  热分析法

61 七. 水分测定 ChP收载方法:1.费休氏法, 2.甲苯法 (I2+SO2)+H2O2HI+SO3 H2O%=
F:1ml费休试液相当于水的重量(mg) 终点指示:1.自身指示, 2.永停法. (V-V0)F100% W

62 总反应

63 八.炽灼残渣 检查非挥发性无机杂质, BP叫硫酸灰分. 供试品(w1)+恒重坩埚(w2)→精密称定→炭化,加0.5-1mlH2SO4, 低温加热除去H2SO4, ℃灰化→置干燥器, 冷后, 精称至恒重(w3). 1. 若残渣留作重金属检查, 则温度应为 ℃. 2 . 根据限量取不同量的供试品.

64 九.易炭化物 遇H2SO4易炭化或氧化而显色的微量有机物.
甲管加规定的对照液5ml, 乙管加5ml H2SO4, 在两管中分别加供试品,平视观察, 乙管呈色不得超过甲管.

65 色谱系统适用性试验: 1. 理论塔板数n=5.54(tR/w1/2)2 填充柱>1000, 毛细管柱>5000.
ChP从95版开始收载, 表3-4分类，方法为GC, 使用填充柱或者毛细管柱, 检测器为 FID, 如果测定含卤素的溶剂, 用ECD, 柱温40-100℃. 色谱系统适用性试验: 1. 理论塔板数n=5.54(tR/w1/2)2 填充柱>1000, 毛细管柱>5000. 2. 分离度R﹥1.5, R=2(tR2-tR1)/w1+w2 3. 峰面积重复性, RSD﹤10%(n=5) 4.  对称(拖尾)因子, f=w0.05h/2d, 十.残留溶剂测定

66 测定方法: 1.  溶液进样, 2μl , 2. 顶空进样(液上色谱)Headspace Sampling 1ml, 样品不需前处理, 不易污染柱子 自动或手动进样 等温或程序升温.

67 第二法.分光光度法: 规定波长处测定吸收度. 第三法.色差计法: 比较供试品溶液和标准比色液与水之间的色差值. 特点: 比目视比色客观.
十一. 溶液颜色 第一法.目视比色: 供试品溶液与规定色调和色号的标准比色液比较, 不得更深. 第二法.分光光度法: 规定波长处测定吸收度 第三法.色差计法: 比较供试品溶液和标准比色液与水之间的色差值. 特点: 比目视比色客观.

68 十二. 溶液澄清度 检查微量不溶物, 用硫酸肼配标准浊度储备液→乌洛托品与水作用生成甲醛,和肼反应生成白色沉淀腙, 实验前加水稀释成0.5, 1, 2, 3, 4五个不同级号. ChP规定：除另有规定外，供试品溶液澄清度与所用溶剂一样或者不超过0.5号标准为澄清

69 第四节 特殊杂质检查 指在该药物生产和储藏过程中,根据其生产方法、工艺条件及药物本身结构性质可能引入的特有杂质. 阿司匹林——水杨酸
第四节 特殊杂质检查 指在该药物生产和储藏过程中,根据其生产方法、工艺条件及药物本身结构性质可能引入的特有杂质. 阿司匹林——水杨酸 盐酸普鲁卡因——对氨基苯甲酸 特点:待检杂质与药物结构往往相近且含量低. 对检测方法要求灵敏度高,专属性好.

70 光学异构体检查是手性药物重要的质量控制项目之一。在原料药制备工艺研究时，应严格控制手性原料与每步反应产物的光学纯度。
一、特殊杂质的研究规范 对药物中的有关物质进行定性研究具有重要意义，时可设法避免该杂质在合成或者贮藏过程中产生。新原料药和新制剂中的杂质，表观含量在0.1%及其以上（表3-1中的鉴定限度）的杂质以及表观含量在0.1%以下的具强烈生物作用的杂质或毒性杂质，要求定性或确证其结构。注意稳定性试验中的降解产物。 光学异构体检查是手性药物重要的质量控制项目之一。在原料药制备工艺研究时，应严格控制手性原料与每步反应产物的光学纯度。

71 二、特殊杂质的鉴定 在进行药物中有机杂质的鉴定研究中，常常需要对杂质进行分离纯化制备或合成制备，以供安全性和质量研究。 1.合成杂质对照品法
当样品中的杂质量较小，且杂质的分离纯化较困难时，可以合成杂质对照品，通过比较杂质与对照品的色谱性质、UV特征和MS信息，判断杂质与对照品是否是同一种化合物，从而确定杂质的结构。

72 例 盐酸非索非那定中杂质的鉴定：考察长期留存样品的杂质变化情况时，发现留样两年后的样品中有一个杂质（杂质2）的含量增加了1
例 盐酸非索非那定中杂质的鉴定：考察长期留存样品的杂质变化情况时，发现留样两年后的样品中有一个杂质（杂质2）的含量增加了1.53%，采用LC-MS 联用法对该杂质进行鉴定。 色谱条件：色谱柱为ODS柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相为0.01mol/L乙酸铵缓冲液-乙腈(40∶60，pH 6.0)。 质谱条件：4.25kV电喷雾正离子化；扫描范围(m/z)100 ~ 1000；鞘气N2，流速7.5L/min；毛细管温度150℃。

73 定向合成杂质2：由中间体经皂化水解得杂质2，用HPLC法测定合成的杂质2，并与留样中的杂质2的保留时间比较，二者一致

74 2.色谱制备杂质对照品法 当药物中被鉴定的杂质量较大时，先用制备色谱分离得到特定杂质，然后再通过元素分析、UV、IR、NMR和MS来确定有关物质的结构。

75 例：炎琥宁中有关物质的鉴定 检查：分析色谱条件：色谱柱Shim-packC18柱 (250mm×4.6mmID,5μm)；流动相：甲醇-0.05%磷酸二氢钾水溶液(用磷酸调至pH2.5)(65∶35)；检测波长：251nm；流速：1.0 ml/min 制备：HPLC条件制备柱为Shim-pack prep-ODS (250mm×20mmID,5μm)，甲醇-0.1%甲酸水溶液(68∶32)流动相，检测波长251nm，流速5ml/min，进样量1.5ml。根据色谱图，分段收集含有杂质的流出液。将收集的流出液用乙酸乙酯萃取，在40℃水浴上旋蒸挥干，得到杂质1。

76 杂质1的结构鉴定：对炎琥宁和杂质1单体，分别进行NMR、UV、IR分析，并结合LC-MS的结果，推断杂质1的结构

77 小结 1. 杂质定义. 2. 杂质来源和种类. 3. 杂质限量检查. 4. 一般杂质检查: 氯化物, 硫酸盐, 铁盐, 重金属, 砷盐, 澄清度, 水分, 残留有机溶剂, 干燥失重, 颜色等. 5. 色谱系统适用性试验. 6. 特殊杂质检查和鉴定方法.