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实验一、血涂片的制备和细胞大小的测量 一、目的要求 二、实验原理 2.认识红细胞及各种白细胞的典型形态; 3.掌握显微测微尺的使用方法。
1.掌握血涂片的制备方法; 2.认识红细胞及各种白细胞的典型形态; 3.掌握显微测微尺的使用方法。 二、实验原理 涂片技术是制备血液样品最常用的技术。将血液样品制成单层细胞的涂片标本,染色后可对血液中各种细胞进行形态观察、细胞计数、细胞大小测量等工作。 根据测量结果计算各细胞及细胞核的体积 椭球形:v=4πab2/3 a-长半径 b-短半径 圆球形:v=4πr3/3 r-半径 圆柱形:v=r2h r-半径 h-高
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四、实验内容、方法与步骤(见实验指导书)
三、实验用品 1.器材:医用一次性采血针、酒精棉球、镊子、经脱脂洗净的载玻片 、 双凹片(推片)。 2.试剂:Wright’s染液:Wright’s色素粉末0.1g,溶于60 ml甲醇。 四、实验内容、方法与步骤(见实验指导书) 1.血涂片的制备与血细胞的观察 2.显微测微尺的使用 五、实验报告 1.绘制各种不同类型的血细胞,并说明它们的主要作用; 2.任选5个红细胞,测量其直径,并计算出平均值。
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采血前用70%酒精棉球消毒人的指腹
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采血
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由于第一滴血中含单核白细胞较多,因此弃去第一滴血
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推片:挤出第二滴血置于载玻片的右侧
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再取另一张边缘光滑的双凹片,斜置于血滴的前缘,先向后稍移动轻轻触及血滴,使血液沿玻片端展开成线状。
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两玻片的角度以30~45°为宜,轻轻将双凹片向前匀速推进,即涂成血液薄膜。
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染色 待涂片在空气中完全干燥后,滴加数滴Wright’s染液盖满血膜为止,染色1~3 min。然后滴加等量蒸馏水,使其与染液均匀混合,静置10~15 min。用蒸馏水冲去染液,吸水纸吸干,镜检。
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红细胞 也称红血球,是血液中数量最多的一种血细胞,无细胞 核,也无细胞器,主要功能是运输和交换氧和二氧化碳。
红细胞 也称红血球,是血液中数量最多的一种血细胞,无细胞 核,也无细胞器,主要功能是运输和交换氧和二氧化碳。
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淋巴细胞 白细胞的一种。由淋巴器官产生,机体免疫应答功能 的重要细胞成分
淋巴细胞 白细胞的一种。由淋巴器官产生,机体免疫应答功能 的重要细胞成分
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单核细胞 是体积最大的白细胞。其细胞核常偏位,呈多形性, 如卵圆形、肾形、马蹄形、不规则形等
单核细胞 是体积最大的白细胞。其细胞核常偏位,呈多形性, 如卵圆形、肾形、马蹄形、不规则形等
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嗜中性粒细胞 即中性白细胞,呈圆形,胞质淡红色。胞核幼稚 型的呈杆状或马蹄形,成熟的呈分叶状,三叶的 较多见,中性粒细胞来源于骨髓的造血干细胞
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嗜酸性粒细胞 是白细胞的一种,嗜酸性粒细胞增多的原因很多: 1. 变态反应性疾病:如哮喘、荨麻疹、食物过敏和血管神经性水肿。 2
嗜酸性粒细胞 是白细胞的一种,嗜酸性粒细胞增多的原因很多: 变态反应性疾病:如哮喘、荨麻疹、食物过敏和血管神经性水肿。 各种皮肤病:如天疱疮、疱疹性皮炎等
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嗜碱性粒细胞 胞质内含有较大的、椭圆形的嗜酸性颗粒。这类 白细胞也具有吞噬功能。
嗜碱性粒细胞 胞质内含有较大的、椭圆形的嗜酸性颗粒。这类 白细胞也具有吞噬功能。
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显微测微尺的使用 显微测微尺是用来测量在显微镜下所观察到的物体的长度、面积的工具,包括镜台测微尺、目镜测微尺两部分。
在使用的过程中,镜台测微尺起标定作用,利用它可以确定目镜测微尺旋钮上每小格代表的实际长度。 目镜测微尺标定完成后,即可用于细胞样品的测量。
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镜台测微尺 共分为10格 每格又可分为10个小格,每小格的实际长度为0.01mm=10µm 总长1mm 总长0.1mm
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可以通过旋转旋钮移动目镜测微尺中交叉线的位置
μ
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使用方法 1.取下目镜,将目镜测微尺的刻度面向下放入目镜中,旋上透镜;
2.将镜台测微尺盖片面朝上放在载物台上,用低倍镜观察, 调节焦距看清镜台测微尺的刻度; 3.移动镜台测微尺,同时转动目镜,使目镜测微尺与镜台测微尺平行靠近,并将两尺的“0”点刻度线或某刻度线对齐.然后从左向右查看两尺刻度线另一重合处,记录重合线间目镜测微尺与镜台测微尺的格数.按下式计算目镜测微尺每格等于多少微米。 4.移去镜台测微尺,换血涂片,测量细胞长度。 细胞长度=目镜测微尺测量所占小格数×目镜测微尺每 小格代表的实际长度
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目镜测微尺的标定 n×a X= M X:目镜测微尺每格的实际长度 a:镜台测微尺每格的实际长度 n:镜台测微尺的刻度数。
例如:镜台测微尺一小格为10µm,在目镜测微尺“0”点到另一点与镜台测微尺正好重合,镜台测微尺的刻度数为5小格,当目镜测微尺的刻度数也为5小格,则目镜测微尺每格的实际长度即为10µm(物镜10×);如目镜测微尺的刻度数为20小格,则目镜测微尺每格的实际长度即为2.5µm(物镜40×)。
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