血型鉴定和交叉配血实验.

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1 血型鉴定和交叉配血实验

2 实验目的 学习ABO血型鉴定方法，掌握血型鉴定原理。 观察红细胞凝集现象。

3 实验原理-血型鉴定 ABO血型是根据红细胞表面存在的凝集原决定的。存在A凝集原的称为A血型，存在B凝集原的称为B血型。而血清中还存在凝集素（Immunoglobuli M ）。当A凝集原与抗A凝集素相遇或B凝集原与抗B凝集素相遇时，会发生红细胞凝集反应。一般A型标准血清中含有抗B凝集素，B型标准血清中含有抗A凝集素，因此可以用标准血清中的凝集素与被测者红细胞反应，以确定其血型（表型）。

4 实验原理-交叉配血 同种动物不同个体的红细胞凝集称为同族血细胞凝集作用。不同动物的血液互相混合有时也可产生红细胞凝集，称为异族血细胞凝集作用。对于动物的天然血型抗体了解不多，而且免疫效价也很低，所以同种动物第一次输血，一般不会引起严重后果。但第二次输血就必须进行交配试验，才能决定是否能相互输血。 交叉配血既可检验血型测定是否有误，又能发现他们的红细胞或血清中， 是否还存在一些其它的凝集原或凝集素，足以引起红细胞凝集反应。在进行并叉式配血试验时，应在 37℃下进行，以保证可能有的凝集反应得以充分显示。

5 交叉配血 交叉配血中红细胞悬液和血清的制备方法：
静脉采血3ml，取下针头，将其中的0.4ml注入已加入106mmol/L枸橼酸钠抗凝剂0.1ml的试管中（血液与抗凝剂的比例为4:1），混匀，待用。剩余血液加入另一支试管中，使其自然凝固。分离血清备用。 洗涤红细胞：取抗凝血一份，加8－10倍量的生理盐水，颠倒混匀后，1000r/min离心5分钟，弃去上清液，再加入8－10倍量的生理盐水，颠倒混匀后，1000r/min离心5分钟，如此反复三次。最后弃去上清液后即得压积红细胞。 配制5%红细胞悬液：取压积红细胞1滴，加2ml生理盐水，颠倒混匀即可。 洗涤红细胞的目的：洗脱红细胞表面上残留的血浆蛋白，以免造成血型不符的假象

6 实验对象、药品和仪器 人 双凹玻片，采血针，竹签，75%酒精棉球，干棉球，玻璃蜡笔（记号笔），尖头滴管，显微镜，消毒牙签，5ml注射器及针头，生理盐水，碘酒棉球，滴管，小试管。 A、B型标准血清

7 实验方法和步骤 1. ABO血型的鉴定 取双凹玻片一块，在两端分别标上A和B，中央标记受试者的号码。
75%酒精棉球消毒无名指端，用采血针刺破指端，用消毒后的尖头滴管吸取少量血，分别与A端和B端凹面中的标准血清混合，放置1～2 min后，能肉眼观察有无凝血现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察。 根据凝集现象的有无判断血型。

8 实验方法和步骤 ABO血型的鉴定 A端 B端 A型标准血清 B型标准血清 抗B凝集素 抗A凝集素 黄色 蓝色 A端 B端 A端检出 B端检出
判断 未凝集 凝集 A凝集原 A型 B凝集原 B型 AB型 O型

9 实验方法和步骤 2.交叉配血实验   分别对供血者和受血者消毒、静脉取血，制备成血清和红细胞悬浮液。红细胞悬浮液是将受检者的血液1-2滴，加入装有生理盐水约1 ml的小试管中，即为2-5%的红细胞悬浮液。加盖备用。 取双凹玻片一块，在两端分别标上供血者和受血者的名称或代号，分别滴上它们的血清少许。  将供血者的红细胞悬浮液吸取少量，滴到受血者的血清中（称为主侧配血）；将受血者的红细胞悬浮液吸取少量，滴入供血者的血清中（称为次侧配血），混合。放置10～30  min后，肉眼观察有无凝集现象，肉眼不易分辨的用显微镜观察。交叉配血反应结果判定见p74表

10 注意事项 指端、采血针和尖头滴管务必做好消毒准备。做到一人一针， 不能混用。使用过的物品（包括竹签）均应放入污物桶，不得再到采血部位采血。
消毒部位自然风干后再采血，血液容易聚集成滴，便于取血。取血不宜过少，以免影响观察。 采血后要迅速与标准血清混匀，以防血液凝固。 在进行交叉配血实验时，一定要防止将主侧配血和次侧配血搞混。

11 实验结果和讨论 为什么在配血试验时，如果主侧发生凝集反应，不论次侧配血如何都不能输血？ 

12 出血时间和凝血时间的测定

13 实验目的  学习出血时间和凝血时间的测定方法 熟悉测定两时间的意义

14 实验原理-出血时间 出血时间就是指小血管受到破损后血液流出至小血管封闭自行停止出血所需的时间，有时又称止血时间。止血的发生主要与小血管的收缩封住出血口、血小板粘附、聚集和释放血小板活性物质等一系列生理反应过程有关。观察出血时间是检测毛细血管功能和血小板数量及功能状态是否正常的简便而有效的方法。正常人出血时间约为1～4 min，出血时间延长见于血小板数量减少或毛细血管功能缺损情况。

15 实验原理-凝血时间 血液流出血管后，受到刺激的血小板就会释放出一系列凝血因子，使血中的纤维蛋白原转化成网状的纤维蛋白，血液发生凝固。测定凝血时间可反映血液本身出凝血因子是否缺乏或减少。凝血时间用于检查血液本身的凝血过程是否正常，而与血小板和毛细血管功能的关系较小。

16 实验对象、仪器 人 小烧杯、酒精棉球、采血针、滤纸片、秒表、玻片

17 实验方法和步骤 1.出血时间的测定 2.凝血时间的测定（玻片法）

18 实验结果和讨论 报告该实验者的出血时间和凝血时间。并对大组的结果加以统计，用平均值±标准差表示。 出血时间长短与何种因素有关？
出血时间长的人凝血时间是否一定延长？ 论述测定出血时间和凝血时间的临床意义

19 实验注意事项 出血时间：不可挤压出血 凝血时间：

20 影响血液凝固的因素

21 实验目的 以血液凝固时间作为指标，了解对血液凝固影响的因素，加深对生理止血过程的理解。

22 实验原理 血液凝固是一个酶的有限水解激活过程，在此过程中有多种凝血因子参与。根据凝血过程起动时激活因子来源不同，可将血液凝固分为内源性激活途径和外源性激活途径。内源性激活途径是指参与血液凝固的所有凝血因子在血浆中，外源性激活途径是指受损的组织中的组织因子进入血管后，与血管内的凝血因子共同作用而启动的激活过程。

23 实验对象、药品和仪器 家兔 25%氨基甲酸乙酯溶液，肝素（8 U/ml）、2%草酸钾溶液、生理盐水，液状石蜡。
免手术台，常规手术器械，动脉夹，动脉插管(或细塑料导管)，注射器，试管8支，小烧杯2个，试管架,竹签1束(或细试管刷),秒表。

24 实验方法和步骤 1.静脉注射氨基甲酸乙酯溶液，按5 ml/kg的量，将兔麻醉，仰卧固定于兔手台上。正中切开颈部，分离一侧双凹玻片，采血针，竹签，75%酒精棉球，干棉球，玻璃蜡笔（记号笔），尖头滴管，显微镜，消毒牙签，5ml注射器及针头，标准ABO血清，生理盐水，碘酒棉球，移液管。远心端用线结扎阻断血流，近心端夹上动脉夹。在动脉当中斜向剪一小切口，插入动脉插管(或细塑料导管)，结扎导管以备取血。

25 实验方法和步骤 2. 试管准备好。 　　试管1   不加任何处理（对照管） 　　试管2   用液状石蜡润滑整个试管内表面 　　试管3   放少许棉花 　　试管4   置于有冰块的小烧杯中 　　试管5   加肝素8U 　　试管6   加草酸钾1～2 ml 　　试管7   加肺组织浸液0.1 ml

26 实验方法和步骤 3.放开动脉夹，每管加入血液2 ml。将多余的血盛于小烧杯中，并不断用竹签搅动直至纤维蛋白形成。
4.记录凝血时间   每个试管加血2 ml后，即刻开始计时，每隔壁15 s 倾斜一次，观察血液是否凝固，至血液成为凝胶状不再流动为止，记录所经历的时间。5、6、7号试管加入血液后，用拇指盖住试管口将试管颠倒两次，使血液与药物混合。 5.如果加肝素和草酸钾的试管不出现血凝,可再向两管内分别加入0.025 mol•L-1的CaCl溶容液2～3滴,观察血液是否发生凝固?

27 注意事项 采血的过程尽量要快，以减少计时的误差。对比实验的采血时间要紧接着进行。
判断凝血的标准要力求一致。一般以倾斜试管达45度时，试管内血液不见流动为准。 每支试管口径大小及采血量要相对一致，不可相差太大。

28 实验结果 将实验结果及各种条件下的凝血时间按下表填写,并进行比较、分析解释产生差异的原因。 表 血液凝固及其影响因素 实验管号 实验处理
表 血液凝固及其影响因素 实验管号 实验处理 凝血时间 1 不加任何处理 2 用液状石蜡润滑整个试管内表面 3 放少许棉花 4 置于有冰块的小烧杯中 5 加肝素8U 6 加草酸钾1～2ml 7 加肺内组织浸液0.1ml

29 思考题 血液凝固的机制及影响血凝的外界因素？ 为什么有几管不凝？为什么有几管比对照组管凝血时间长？为什么有几管比对照管凝血时间短？