组织学实验指导（1） 编制：武玉玲 郝晶.

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1 组织学实验指导（1） 编制：武玉玲 郝晶

2 绪论 组织学教学过程包括理论课和实验课两部分。实验课的目的主要是通过显微镜观察组织切片的经典技术方法，验证和巩固所学的理论知识；加深、扩大对所学知识的理解；掌握正确使用光学显微镜的方法，并培养同学们观察、比较、分析、综合各种客观现象的思维方法和独立思考的能力。

3  实验室规则 (1)上实验课时，不得迟到或早退，有事须向任课老师请假。 (2)保持实验室清洁，不得随地吐痰、乱仍果皮、纸屑等污物。
(3)保持实验室安静，不得大声喧哗，有问题时可以与邻近同学小声讨论或举手请教老师。 (4)爱护室内公共财务，如有损坏，照价赔偿。 (5)实验完毕，必须整理好切片，将显微镜及切片盒放回原处；值日生要整理好卫生，关好门窗及日光灯。

4 一、一般光学显微镜的构造及其使用方法 和保护
（一）光学显微镜的构造 一般光学显微镜的基本结构包括两部分：机械部分和光学部分。 机械部分主要包括下列部件：

5 2 １.镜座 ２.镜臂 ３.载物台 ４.镜筒 ５.物镜转换器６.粗调螺旋 7.微调螺旋 4 5 6 3 7 1

6 4 光学部分主要包括： 反光镜、聚光镜、目镜和物镜。 1.反光镜 2.聚光镜 3.物镜 4.目镜 3 2 1

7 (二)光学显微镜的使用方法 低倍镜的使用：
1.对光：转动粗调节螺旋，降低载物台；旋转物镜转换器，使10倍物镜头对准镜台孔；然后升高聚光镜，打开光圈，将反光镜的凹面对准光源，直至视野明亮为止。 2.将要观察的切片放在载物台上，固定好，并将要观察的部位移至中央。 3.调焦距：旋转粗调螺旋，升高载物台，至物镜距玻片约0.5cm时，再缓慢降低镜台，直到看清图像为止。 4.调节两瞳孔间的距离：一边用双眼自目镜中观察，一边用双手握住两个目镜管，前后或左右移动，直到双眼看到一共同视野为止。 5.为使右眼图像更清晰，可轻轻转动微调螺旋，欲使左眼图像清晰，需旋转镜管长度调节环。

8 高倍镜的使用： 用低倍镜看清图像后，将要进一步放大的结构移至视野中央，一边从侧面观察，一边旋转物镜转换器，将高倍镜头对准镜台孔；升高聚光镜，将光线调节到最亮的程度；然后，稍微转动微调螺旋，即可观察到清晰的图像。 油镜的使用： 用低倍镜看清图像后，将所要观察的结构移至视野中央，在标本所要观察的部位滴一滴镜油，旋转物镜转换器，将油镜头对准镜台孔，使油镜头下端与镜油接触，然后，轻轻转动微调螺旋，即可看清物像。使用油镜时，应把聚光镜的光圈充分开大。 用完油镜后，必须用擦镜纸蘸清洗剂，将镜头和玻片擦净。

9 （三）显微镜的保护 1.搬动显微镜时，应该用右手握镜臂,左手托镜座，平贴胸前，以防撞碰。切勿用一只手斜提，前后摇摆。
2.每次使用显微镜前，要检查显微镜的主要部件有无缺损，发现问题，及时报告。使用时，要严格按操作程序，正确地缓慢移动有关机械部分。 3.禁止拆卸显微镜的各个部件，更不允许与其它显微镜对换，以免安装不当影响观察效果。 4.如镜头表面有灰尘，应该用擦镜纸擦，不允许用口吹、手指抹，或用其它纸、布擦。 5.显微镜用完后，将4倍镜头对准镜台孔，升高镜台，降下聚光器，打开光圈，盖好防尘罩，放回原处。

10 （四）标本观察注意事项 1.取切片标本时，一定要认清标本盒的反正，其正面（有字的一面）朝上，方能打开盒盖。按号取出标本，用完后，按号放回，损坏要赔偿。 2.观察标本时，先用肉眼观其大体形态，再用低倍镜观其一般结构，需要进一步观察的部位，换用高倍镜，一般不用油镜。放标本时，一定要使有盖玻片的一面向上。旋转调节螺旋时，动作要轻;低倍镜换高倍镜时，注意不要使镜头碰到切片。 3.观察切片时，注意力要集中，密切联系课堂所学理论，有步骤地进行观察。要求课前复习有关理论，预习实验指导，以便在课堂上作到主动。

11 4.绘图时，要选择结构清楚的部位，不要抄画，也不要乱 画。图上的注字要清楚、端正。图的布局：
4.绘图时，要选择结构清楚的部位，不要抄画，也不要乱 画。图上的注字要清楚、端正。图的布局： 中等动脉横切片，HE 染色，X100

12 5.观察标本时，要注意组织细胞的断面形态与立体形态的关系。同一细胞或组织，在不同的断面上，其形态不一样。

13 二、切片标本制作技术简介 制作光镜组织学标本最常用的方法是石蜡包埋切片法,即用石蜡把组织块包起来，使组织变硬，便于切薄。其主要步骤如下： 1.取材、固定 取材一般在动物死后2小时以内取。将取下的新鲜的组织块迅速投入固定液中进行固定。固定液的种类很多，常用的有：福尔马林、酒精、丙酮及一些混合固定液。固定的目的在于使组织中的蛋白质迅速凝固，以停止其死亡前的变化，从而保持标本的结构接近于其生前的正常状态。 2.脱水、透明、浸蜡 固定后的组织用水冲洗后，组织中充满水分，妨碍石蜡的侵入，必须用不同浓度的酒精将组织中的水分脱净，这一过程称为脱水。脱水后组织中含有酒精，仍不能与石蜡相融，要用二甲苯或氯仿替代酒精，组织经过二甲苯后呈现透明状态，这一过程称为透明。把透明后的组织块投入融化的石蜡中浸润，使组织内的空隙充满石蜡，产生一定的硬度，这叫浸蜡。

14 3 .包埋、切片 浸蜡后，把组织块放入装有溶化的固体石蜡的包埋器中，待石蜡凝固后，组织块便被包埋在里面，成为蜡块，这一过程称为包埋。把包埋好的蜡块修好，粘在木块上，便可放到切片机上，切成5--6um厚的薄片，然后贴在干净的载玻片上，置于50℃左右的温箱内烤干。 包埋器 蜡块 粘好的木块 载玻 片

15 4.染色、封固 贴好的切片，经过脱蜡、酒精侵水等过程后，即可进行染色。常用的染色方法是苏木素伊红染色法（Hematoxylin Eosin stain），简称Ｈ&Ｅ染色法。苏木素是一种碱性染料，可使组织细胞中的酸性物质（又称嗜碱性物质）染成紫蓝色，如细胞核中的染色质等；伊红是一种酸性染料，可使组织细胞中的碱性物质（又称嗜酸性物质）染成红色，如多数细胞的细胞质、核仁等在H&E染色的切片中均呈红色，很易跟细胞核区别。另外，还有硝酸银染色、三色或多色染色等，在此不作介绍。染色后，经酒精脱水、二甲苯透明，即可封固。 封固时,在切片标本上滴一滴树胶，盖上盖玻片，干后即成为既可以在镜下观察又能够长期保存的标本。 三、切片观察: 载玻片 标签 盖玻片 组织标本 HE染色、封固后的切片