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精液和前列腺液的检验 内蒙古民族大学 赵文海
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精液和前列腺液的检验 要 求： １.了解精液、前列腺液的含义、成分、标本的采集、检验项目及目的。
要 求： １.了解精液、前列腺液的含义、成分、标本的采集、检验项目及目的。 2.熟悉精液、前列腺液常规检验的项目、方法及临床意义。 临床应用： 1、评估男性的生育功能，用于不孕症的诊断和疗效观察。 2、辅助诊断男性生殖系统疾病。 3、输精管结扎术的疗效观察。 4、计划生育科研工作。 5、为体外授精（in vitro fertilization）和精子库(sperm bank)筛选优质精子。 6、用于法医学鉴定等。
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第一节 精液检验 一.精液检验标本采集 （一）采集方法 １.手淫法 ２.体外排精法 （二）注意事项
第一节 精液检验 一.精液检验标本采集 （一）采集方法 １.手淫法 ２.体外排精法 （二）注意事项 １.标本采集的时机：禁欲3－5天采集，超过5天使精液量增加，精子活力下降。 ２.标本采集的次数：应间隔1－2W检查一次，连续检查2－3次。 ３.标本转运：标本盛于清洁干燥的塑料试管内加盖送检，并注意保温。 ４.不完整的精液标本不宜进行精液分析
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二、精液常规检验 主要项目：理学检查（颜色、量、液化时间、粘稠度、ＰＨ）；镜检（精子活率、精子活力、精子密度、精子形态检查、其它细胞、病原体等）。
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（一）理学检查 １．外观和气味 正常刚射出的精液有一股腥味，呈乳白色或灰白色． ２．精液量：2－5ml/次，少于1ml，大于8ml均为异常。减少：占不孕症的22％，主要见于前列腺和精囊病变、射精管阻塞，先天性精囊缺如等；增多：精子被稀释，占不孕症的5％，此可因垂体前叶促性腺激素的分泌功能亢进，使雄性激素分泌量增多所致，若不射精，称为无精液症。 ３．精液液化：精液离体后5－10分钟开始液化，30min完全液化，超过1h仍不液化和液化不全者均为异常，原因：抑制精子活力，从而减少受孕机会。可能是由于前列腺分泌液化因子减少，导致蛋白水解酶缺乏和前列腺炎症时破坏了蛋白水解酶而引起。疾病：输精管缺乏或先天性精囊缺如等。 ４．精子粘稠度（1）直接玻棒法:3级. Ⅰ级:30min基本液化,细粘液丝; Ⅱ级:60min不液化,粗大粘液丝; Ⅲ级:24h不液化,无粘液丝; （2）粘度计法:0.725：36.1±13.4S; 0.625：41.2±11.4S ５．ＰＨ：
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（二）显微镜检查 方法:涂片加盖玻片镜检. 精子缺乏和无精子症: １精子活率分析 １）精子活动率检查 精子活动率（％）＝活动精子数／（活动精子数＋不活动精子数）*１００ 正常参考值:精子活率≥75% 临床意义:男性不孕症的诊断.现认为只要精子活率≥45%,即使精子数∠0.5*109/L ，仍能受孕。 ２）精子活动力检查：指精子前向运动的能力。WHO分型：4级。 a级 精子呈高速直线运动。 b级 活动较好，精子呈中速直线运动。 c级 活动不良，活动迟钝，原地转动。 d级 不活动，死精子。
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其运动与温度有关，最适温度为：37℃ 正常参考值：射精后60min内：a级≥25％或a级＋b级≥50％ 临床意义：男性不孕症的诊断.精子活动力∠40%,且以c级活动力精子为主，可能是不孕症的原因之一。疾病：①精索静脉曲张、v回流不畅、睾丸组织缺氧等②生殖系统非感染性疾病③应用抗代谢药、抗疟药、雌激素、氧化氮芥等。 ２．精子密度与精子总数检查 精子密度（精子浓度）：是指单位体积内的精子数，乘以一次射精量，即为1次射精的精子总数。 １）粗略估计法
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２）精子计数 原理 试剂 操作 计算 精子数／Ｌ＝５个中方格的精子数×稀释倍数×５×１０×１０６ 精子总数：精子密度×精液量 正常参考值：精子总数≥40×106/次；精子浓度： （50－100）×109/L。 临床意义：疾病：①精索静脉曲张、v回流不畅、睾丸组织缺氧等②先天性、后天性睾丸疾病：睾丸畸形、萎缩、结核、淋病、炎症等；③输精管或精囊缺如；④重金属的损害：pb、镉中毒⑤放射性损害；⑥应用抗癌药和长期应用棉酚等；⑦50岁以上的老年人。
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３.精子形态学检查 方法：涂片、固定、染色、镜检。 ①正常精子（见图） ②异常精子（见图） ③未成熟的生殖细胞（见示意图） ４.其他细胞：ＲＢＣ、ＷＢＣ、肿瘤Ｃ
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正常参考值：正常形态精子为：82－94％ 临床意义：精子形态异常与生殖系统的感染、外伤、雄激素变化、化学药物中毒及遗传因素有关。 （1）、生殖系统的非特异性感染，可致尖头和其他不规则精子比例增加。 （2）、精索静脉曲张：可引起精子头、体部肿胀、缺陷。 （3）、药物中毒：如：呋喃类、烷基化合物、激素、安体舒通、5－羟色胺、单胺氧化酶抑制剂、环磷酰胺、甲胺蝶呤、以及大剂量的阿司匹林等，精液会出现未成熟的精子。 （4）、工业废物与环境污染：pb、砷、放射性污染等，可致精子畸形和或数量减少。
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三.精子穿透试验 １.体内穿透试验 ２.体外穿透试验
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(一)体内穿透实验：又称性交后实验（PCT）。
方法：在排卵期或近排卵期性交后数小时，检查宫颈口粘液和精子数量、活率及活力，从而评价精子穿透宫颈口粘液的能力。 正常参考值：性交4－6h后，可见正常活动度精子数› 25个/HP；6－8h后，可见正常活动度精子数›70个/HP 临床意义：如宫颈粘液中存在抗精子抗体或精子表面结合有抗精子抗体，精子将出现凝集现象；精子本身若有遗传或代谢障碍、逆行射精等，精子也不能穿透宫颈粘液；宫颈粘液异常，如宫颈疾病（炎症、粘连、囊肿等）所致、或粘液粘滞度大、酸性粘液、脓性粘液等，均可导致本试验异常。
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（二）体外穿透试验： 1、精子－宫颈粘液玻片穿透试验：是在玻片上观察精子对宫颈粘液的穿透力。 方法：在一片洁净的玻片上相约4mm处，分别滴排卵期的宫颈粘液和液化的精液1滴，轻轻加上盖玻片，使两液滴慢慢接触而形成交界面，然后置于37度孵育10－15min，取出镜检。以紧临界面的第一个HP设为F1，紧靠F1的第二个视野为F2，分别记录F1和F2中活动的精子数。 结果判断（1）正常：精子穿透粘液，并90％以上精子呈直线运动。（2）较差：精子能穿透粘液，但运动距离小，离开粘液与精液界面∠500µm。（3）异常：精子穿透粘液后，很快失去活力或仅有摆动。（4）异常：精子不能穿透以上界面或于界面精液侧出现凝集。 正常参考值：精子穿透粘液，且90％以上精子呈直线运动。 临床意义：不孕症，并结合其他检查综合分析结果。
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临床意义：不孕症，阳性提示精子或宫颈粘液中存在抗精子抗体。
2、精子－粘液接触试验（SCMC）： 在精子与宫颈粘液接触后，观察精子的运动功能是否受损害及损害程度。 方法：取精液及近排卵期宫颈粘液等量混合，在室温下静止30min，观察并计数非正常运动精子的出现率，以未与宫颈粘液混合的精液作对照，求出摆动精子的出现率（％）。摆动精子越多，意味着受损越严重。此外，还可以其他供者的精液或宫颈粘液分别进行交叉试验，以确保抗精子抗体是来自精液或宫颈粘液。 正常参考值：阴性（精子摆动出现率0－25％） 临床意义：不孕症，阳性提示精子或宫颈粘液中存在抗精子抗体。
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3、仓鼠卵－精子穿透试验：又称精子穿透试验（SPT）是评价精子功能最常用的试验。 SPT是检测精子获能、顶体反应和结合卵子能力的一种技术复杂而严格的生物学试验。
方法：用相差显微镜观察，计算卵子受精率和受精指数（FI） 计算公式：受精率＝受精卵数/卵细胞总数*100％；FI＝穿透卵细胞的精子数/卵细胞总数 正常参考值：受精率≥10％，受精指数（FI） ≥5 临床意义：受精指数（FI） ∠5，示生育力下降。与以上其他试验结果有良好的相关性。 对不孕症的诊断符合率达90％，可作为不孕症的诊断依据，还可用于评价人工授精试验的依据，但试验影响因素很多，注意进行质量控制。
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4、精子低渗肿胀试验（HOS）：是观察精子在低渗溶液中的变化情况，。
方法：将精子置入低渗溶液中，由于低渗作用，精子尾部可肿胀、弯曲。用相差显微镜进行观察，计算100－200个精子，计算出肿胀精子的％。 结果判断：a型:未出现肿胀；b型：尾尖出现肿胀；C型：尾尖出现弯曲、肿胀；d型：尾尖肿胀伴弯曲、肿胀；e型：尾弯曲、肿胀；f型：尾粗短、肿胀；g型：全尾部肿胀。 正常参考值：g型肿胀精子率›50％ 临床意义：HOS试验可以预测精子膜有无损害，常用来判断精液中是否存在AsAb。有人认为， HOS试验中精子形态与游离自由基被超氧化物歧化酶破坏有关。
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四.化学检查 精液中某些生化指标的改变对男性病的诊断及治疗有重要的意义．如ＡＣＰ、ＬＤＨ－Ｘ、精子顶体酶、Zn、精浆柠檬酸、精浆果糖等。
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1.酸性磷酸酶（ACP）：主要来自前列腺，属于前列腺酸性磷酸酶（PAP）
正常参考值（1）速率法：80－1000U/ml （2）β－硝基酚法：›200/UL 临床意义：用以了解前列腺的功能和对前列腺疾病的诊断。减低：前列腺炎症；增加：前列腺癌和前列腺肥大等； 精子PAP活性减低，受孕的几率也减低。 2。乳酸脱氢酶－X（LDH－X）：精液共有6种乳酸脱氢酶，以乳酸脱氢酶－X的活性最强，相当于乳酸脱氢酶总活性的1/3，广泛存在于精母细胞、精子细胞、和精子线粒体内，具有组织特异性，对精子生成、代谢、获能和受精均具有重要作用。 方法：电泳分离扫描 正常参考值（1） LDH－X 相对活性≥40％，绝对活度（1430±940）U/L 临床意义：活性减低或消失：见于睾丸组织萎缩；少精或无精症患者。有时精液常规检查正常的不孕症患者，也可出现LDH－X活性下降，因此， LDH－X活性检测对男性不孕症的诊断是一项有价值的指标。
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3。精子顶体酶（acrosin）的测定：精子形成的早期就有丰富的顶体酶原mRNA表达，当精子头部进入卵透明带，精子体外获能，顶体酶原活化，从而启动肽链相互作用，促进顶体反应发生。
方法：速率法 正常参考值（37±21）U/L 临床意义：顶体酶活性降低：不孕症；与精子活力、活率正相关，与精子畸形、WBC等副相关。 4。精浆柠檬酸测定：主要来自前列腺，其作用主要是络合钙离子，从而调节精浆中钙离子的浓度，与射精后精液凝固及液化过程密切相关。 方法：紫外比色法 正常参考值：50μmol/L 临床意义：用以评价前列腺功能和判断雄激素的分泌状态。
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5.精浆果糖：精浆果糖是精子能量的主要来源，是由精囊腺分泌的。精浆果糖的高低直接影响精子活力，同时睾酮的水平也影响精囊果糖的分泌。因此，精浆果糖的含量测定不仅能反应精囊腺的分泌功能，而且还反应睾丸内分泌功能。 方法：显色法和紫外分光酶分析法 正常参考值：间苯二酚法：9.11－17.67mmol/L；吲哚比色法： ≥ 13 μmol/L 临床意义：精浆果糖为零时，见于先天性两侧输精管和/或精囊腺缺如、两侧输精管完全阻塞或逆行射精；精浆果糖降低：精囊炎和雄激素分泌不足等。 6.精浆锌：为了维持人体生殖内分泌系统的功能，需要锌、锰、镁、铁、钾、钠等多种金属元素的参与，期中锌与生殖功能关系最为密切。精浆中的锌比血液中的锌高，主要存在于睾丸、副睾和前列腺中。 方法：原子吸收光谱法和比色法 正常参考值：原子吸收光谱法：163.02±45.26 μg/ml；比色法： ≥ 2.4 μmol/1次射精 临床意义：用于不孕症的诊断，减少或缺乏：可（1）抑制脑垂体促性腺激素的释放，影响性腺发育及性腺的生殖和内分泌功能；（2）影响精子生成、成熟、激活和获能过程。
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五.免疫学检查 近年来免疫学检查迅速发展，如： １.抗精子抗体（AsAb）： ①混合抗免疫球蛋白试验（MAR） ②免疫珠试验 ③精子凝集试验 ２.精浆免疫抑制物质 ３.精浆免疫球蛋白测定
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1、混合抗免疫球蛋白试验（MAR）：用混匀的未加处理的新鲜精液，与包被的乳胶粒或绵羊红细胞混合，再加入特异的单克隆抗IgG抗血清。若胶乳粒和活动精子之间形成混合凝集即表示精子表面存在IgG抗精子抗体。
正常参考值：阴性 临床意义：①50％以上的精子与颗粒黏附，可能为免疫性不孕；②10％－50％的精子与颗粒黏附，可疑为免疫性不孕。 2、免疫珠试验（immunobeasd assay）免疫珠是兔抗人免疫球蛋白与聚丙烯酰胺通过共价结合的一种微球，此实验可以同时检测IgG、IgA、IgM类型的抗体。 正常参考值：免疫珠黏附率∠ 20％ 临床意义：黏附率≥20％为免疫珠黏附为阳性，此时精子在宫颈粘液中的穿透和体内受精无明显受损倾向；黏附率≥50％有临床意义，但如仅见精子尾端与免疫珠黏附，也可见于某些生育力正常的男性精液。
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3、精子凝集试验（SAT）：血清、生殖道分泌物中存在的AsAb与精子膜上抗原相结合，精子可出现各种各样的凝集现象，如：头－头，头－尾，尾－尾凝集。
正常参考值:阴性 临床意义：阳性证明存在AsAb。 4、精子制动试验（SIT）： AsAb与精子表面抗原相互作用激活补体系统。导致精子顶体破坏，膜通透性及完整性受损，精子失去活力。检查AsAb的试验很多，其中SAT、SIT与免疫珠试验呈正相关。用ELISA检测患者的血清、精浆或宫颈粘液中的AsAb。 临床意义：当精子活动力、活动率和低渗肿胀试验均异常时，多提示精液中存在AsAb，可通过SIT试验进行筛选。
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（二）精浆免疫抑制物质（SPIM）：人类精液中含有30余种Ag，因其含有SPIM故当精液进入女性生殖道后通常不会引起免疫应答。免疫抑制效应可能是多种物质综合作用的结果，其中妊娠相关蛋白A（PAPP－A）也称男性抑制物质（MIM），能抑制机体对精子的免疫反应，保护受精卵，维持正常的生殖生理过程。 正常参考值（1）SPIM抗补体试验：430±62U/L；（2）MIM单向免疫扩散试验： 3.0±0.3g/L 临床意义：降低可见于不孕症,习惯性流产、配偶对丈夫精液过敏等。 （三）精浆免疫球蛋白测定： 正常参考值（1）IgA：90.3±57.7mg/L；（2）IgG： 28.6±16.7mg/L;（3）IgM： 2.3±1.9mg/L 临床意义： AsAb阳性者, IgM增高;生殖炎症时,分泌型IgA增高.
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六.微生物学检查 １.细菌 ２.支原体 ３.衣原体 ４.病毒 5.原虫 七.精子自动分析系统
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细菌学检查
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精子自动分析系统
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精子质量自动分析系统
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精子质量自动分析系统 系 统 特 点 系统采用现代化的计算机图像处理技术和先进的高新智能技术，对精子的动静态特征进行全面的量化分析，使试验结果更具有专业性、科学性和可比性。精子质量自动分析系统与传统的分析方法比较，具有速度快、量化性好、准确性高、检测参数丰富等特点，为临床和科研提供了客观的检测依据。另外它还具有操作简单、污染性小、智能化程度高等特点 本系统还可选配显微镜荧光装置，用于性病诊断，并为此配置了相应的软件和教学图谱。
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适 用 范 围: 特别适用于临床精液检测，能够极大的提高临床检测水平。可广泛应用于检测男性不育、试管婴儿、优生优育研究等方面。
选配显微镜荧光装置后，可用于泌尿系统疾病、性病诊断和鉴别诊断 各种血液病的诊断和鉴别诊断 自身免疫疾病的诊断和鉴别诊断 寄生虫感染 在某些专业机构，如生物研究所、濒临稀有动物研究所、畜牧人工繁殖研究所及人工受精站等，也具有很高的应用价值
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适 用 范 围: 特别适用于临床精液检测，能够极大的提高临床检测水平。可广泛应用于检测男性不育、试管婴儿、优生优育研究等方面。
选配显微镜荧光装置后，可用于泌尿系统疾病、性病诊断和鉴别诊断 各种血液病的诊断和鉴别诊断 自身免疫疾病的诊断和鉴别诊断 寄生虫感染 在某些专业机构，如生物研究所、濒临稀有动物研究所、畜牧人工繁殖研究所及人工受精站站等，也具有很高的应用价值
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系 统 技 术 指 标: 1、样品的允许采集数量（个） 1～1000 2、检测速度的范围 （ μ m/s） 0～300 3、图像的采集帧数（帧） 1～50 4、颗粒直径分辨率（ μ m） 1～50 5、对一组图像的分析时间 不大于30秒 6、图像的采集组数（组） ～10 7、可一机多用 8、全面直观的数据图像检测分析，检测数据丰富，分析数据全面。可检测34项精液指标，三种速度分布统计图。
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谢谢大家！
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第二节 前列腺液检查 前列腺液的主要成份：电解质、酶、免疫物质、有形成份及其他一些物质。
第二节 前列腺液检查 前列腺液为前列腺外分泌功能分泌的前列腺液占精液的３０％，为乳白色液体。 前列腺液的主要成份：电解质、酶、免疫物质、有形成份及其他一些物质。 检查目的：用于慢性前列腺炎、病原性微生物及性传播疾病的诊断。
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一.标本的采集 用前列腺按摩法采集，弃去第一滴， 二.理学检查 量、色、粘稠度、ＰＨ 三.镜检 １.直接涂片镜检 ①卵磷脂小体 ②血细胞
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１）ＲＢＣ ２）ＷＢＣ ３）上皮Ｃ ③前列腺颗粒细胞 ④淀粉样体 ⑤精子 ⑥结石 ⑦其他
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２.涂片染色镜检 ①肿瘤细胞检查 ②细菌学检查 四.化学检查 五.微生物学检查——细菌培养 六.小结
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阿贝折射仪 谢谢大家！ 内蒙古民族大学
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