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精液和前列腺液的检验 内蒙古民族大学 赵文海.

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1 精液和前列腺液的检验 内蒙古民族大学 赵文海

2 精液和前列腺液的检验 要 求: 1.了解精液、前列腺液的含义、成分、标本的采集、检验项目及目的。
要 求:  1.了解精液、前列腺液的含义、成分、标本的采集、检验项目及目的。  2.熟悉精液、前列腺液常规检验的项目、方法及临床意义。 临床应用: 1、评估男性的生育功能,用于不孕症的诊断和疗效观察。 2、辅助诊断男性生殖系统疾病。 3、输精管结扎术的疗效观察。 4、计划生育科研工作。 5、为体外授精(in vitro fertilization)和精子库(sperm bank)筛选优质精子。 6、用于法医学鉴定等。

3 第一节 精液检验 一.精液检验标本采集 (一)采集方法 1.手淫法 2.体外排精法 (二)注意事项
第一节 精液检验 一.精液检验标本采集  (一)采集方法  1.手淫法  2.体外排精法  (二)注意事项  1.标本采集的时机:禁欲3-5天采集,超过5天使精液量增加,精子活力下降。  2.标本采集的次数:应间隔1-2W检查一次,连续检查2-3次。  3.标本转运:标本盛于清洁干燥的塑料试管内加盖送检,并注意保温。  4.不完整的精液标本不宜进行精液分析

4 二、精液常规检验 主要项目:理学检查(颜色、量、液化时间、粘稠度、PH);镜检(精子活率、精子活力、精子密度、精子形态检查、其它细胞、病原体等)。

5 (一)理学检查 1.外观和气味  正常刚射出的精液有一股腥味,呈乳白色或灰白色. 2.精液量:2-5ml/次,少于1ml,大于8ml均为异常。减少:占不孕症的22%,主要见于前列腺和精囊病变、射精管阻塞,先天性精囊缺如等;增多:精子被稀释,占不孕症的5%,此可因垂体前叶促性腺激素的分泌功能亢进,使雄性激素分泌量增多所致,若不射精,称为无精液症。 3.精液液化:精液离体后5-10分钟开始液化,30min完全液化,超过1h仍不液化和液化不全者均为异常,原因:抑制精子活力,从而减少受孕机会。可能是由于前列腺分泌液化因子减少,导致蛋白水解酶缺乏和前列腺炎症时破坏了蛋白水解酶而引起。疾病:输精管缺乏或先天性精囊缺如等。 4.精子粘稠度(1)直接玻棒法:3级. Ⅰ级:30min基本液化,细粘液丝; Ⅱ级:60min不液化,粗大粘液丝; Ⅲ级:24h不液化,无粘液丝; (2)粘度计法:0.725:36.1±13.4S; 0.625:41.2±11.4S 5.PH:

6 (二)显微镜检查 方法:涂片加盖玻片镜检. 精子缺乏和无精子症: 1精子活率分析 1)精子活动率检查  精子活动率(%)=活动精子数/(活动精子数+不活动精子数)*100 正常参考值:精子活率≥75% 临床意义:男性不孕症的诊断.现认为只要精子活率≥45%,即使精子数∠0.5*109/L ,仍能受孕。 2)精子活动力检查:指精子前向运动的能力。WHO分型:4级。  a级 精子呈高速直线运动。  b级 活动较好,精子呈中速直线运动。  c级 活动不良,活动迟钝,原地转动。 d级 不活动,死精子。

7 其运动与温度有关,最适温度为:37℃ 正常参考值:射精后60min内:a级≥25%或a级+b级≥50% 临床意义:男性不孕症的诊断.精子活动力∠40%,且以c级活动力精子为主,可能是不孕症的原因之一。疾病:①精索静脉曲张、v回流不畅、睾丸组织缺氧等②生殖系统非感染性疾病③应用抗代谢药、抗疟药、雌激素、氧化氮芥等。  2.精子密度与精子总数检查 精子密度(精子浓度):是指单位体积内的精子数,乘以一次射精量,即为1次射精的精子总数。 1)粗略估计法

8  2)精子计数  原理  试剂  操作  计算 精子数/L=5个中方格的精子数×稀释倍数×5×10×106  精子总数:精子密度×精液量  正常参考值:精子总数≥40×106/次;精子浓度: (50-100)×109/L。 临床意义:疾病:①精索静脉曲张、v回流不畅、睾丸组织缺氧等②先天性、后天性睾丸疾病:睾丸畸形、萎缩、结核、淋病、炎症等;③输精管或精囊缺如;④重金属的损害:pb、镉中毒⑤放射性损害;⑥应用抗癌药和长期应用棉酚等;⑦50岁以上的老年人。 

9  3.精子形态学检查 方法:涂片、固定、染色、镜检。  ①正常精子(见图)  ②异常精子(见图)  ③未成熟的生殖细胞(见示意图)  4.其他细胞:RBC、WBC、肿瘤C

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38 正常参考值:正常形态精子为:82-94% 临床意义:精子形态异常与生殖系统的感染、外伤、雄激素变化、化学药物中毒及遗传因素有关。 (1)、生殖系统的非特异性感染,可致尖头和其他不规则精子比例增加。 (2)、精索静脉曲张:可引起精子头、体部肿胀、缺陷。 (3)、药物中毒:如:呋喃类、烷基化合物、激素、安体舒通、5-羟色胺、单胺氧化酶抑制剂、环磷酰胺、甲胺蝶呤、以及大剂量的阿司匹林等,精液会出现未成熟的精子。 (4)、工业废物与环境污染:pb、砷、放射性污染等,可致精子畸形和或数量减少。

39 三.精子穿透试验 1.体内穿透试验 2.体外穿透试验

40 (一)体内穿透实验:又称性交后实验(PCT)。
方法:在排卵期或近排卵期性交后数小时,检查宫颈口粘液和精子数量、活率及活力,从而评价精子穿透宫颈口粘液的能力。 正常参考值:性交4-6h后,可见正常活动度精子数› 25个/HP;6-8h后,可见正常活动度精子数›70个/HP 临床意义:如宫颈粘液中存在抗精子抗体或精子表面结合有抗精子抗体,精子将出现凝集现象;精子本身若有遗传或代谢障碍、逆行射精等,精子也不能穿透宫颈粘液;宫颈粘液异常,如宫颈疾病(炎症、粘连、囊肿等)所致、或粘液粘滞度大、酸性粘液、脓性粘液等,均可导致本试验异常。

41 (二)体外穿透试验: 1、精子-宫颈粘液玻片穿透试验:是在玻片上观察精子对宫颈粘液的穿透力。 方法:在一片洁净的玻片上相约4mm处,分别滴排卵期的宫颈粘液和液化的精液1滴,轻轻加上盖玻片,使两液滴慢慢接触而形成交界面,然后置于37度孵育10-15min,取出镜检。以紧临界面的第一个HP设为F1,紧靠F1的第二个视野为F2,分别记录F1和F2中活动的精子数。 结果判断(1)正常:精子穿透粘液,并90%以上精子呈直线运动。(2)较差:精子能穿透粘液,但运动距离小,离开粘液与精液界面∠500µm。(3)异常:精子穿透粘液后,很快失去活力或仅有摆动。(4)异常:精子不能穿透以上界面或于界面精液侧出现凝集。 正常参考值:精子穿透粘液,且90%以上精子呈直线运动。 临床意义:不孕症,并结合其他检查综合分析结果。

42 临床意义:不孕症,阳性提示精子或宫颈粘液中存在抗精子抗体。
2、精子-粘液接触试验(SCMC): 在精子与宫颈粘液接触后,观察精子的运动功能是否受损害及损害程度。 方法:取精液及近排卵期宫颈粘液等量混合,在室温下静止30min,观察并计数非正常运动精子的出现率,以未与宫颈粘液混合的精液作对照,求出摆动精子的出现率(%)。摆动精子越多,意味着受损越严重。此外,还可以其他供者的精液或宫颈粘液分别进行交叉试验,以确保抗精子抗体是来自精液或宫颈粘液。 正常参考值:阴性(精子摆动出现率0-25%) 临床意义:不孕症,阳性提示精子或宫颈粘液中存在抗精子抗体。

43 3、仓鼠卵-精子穿透试验:又称精子穿透试验(SPT)是评价精子功能最常用的试验。 SPT是检测精子获能、顶体反应和结合卵子能力的一种技术复杂而严格的生物学试验。
方法:用相差显微镜观察,计算卵子受精率和受精指数(FI) 计算公式:受精率=受精卵数/卵细胞总数*100%;FI=穿透卵细胞的精子数/卵细胞总数 正常参考值:受精率≥10%,受精指数(FI) ≥5 临床意义:受精指数(FI) ∠5,示生育力下降。与以上其他试验结果有良好的相关性。 对不孕症的诊断符合率达90%,可作为不孕症的诊断依据,还可用于评价人工授精试验的依据,但试验影响因素很多,注意进行质量控制。

44 4、精子低渗肿胀试验(HOS):是观察精子在低渗溶液中的变化情况,。
方法:将精子置入低渗溶液中,由于低渗作用,精子尾部可肿胀、弯曲。用相差显微镜进行观察,计算100-200个精子,计算出肿胀精子的%。 结果判断:a型:未出现肿胀;b型:尾尖出现肿胀;C型:尾尖出现弯曲、肿胀;d型:尾尖肿胀伴弯曲、肿胀;e型:尾弯曲、肿胀;f型:尾粗短、肿胀;g型:全尾部肿胀。 正常参考值:g型肿胀精子率›50% 临床意义:HOS试验可以预测精子膜有无损害,常用来判断精液中是否存在AsAb。有人认为, HOS试验中精子形态与游离自由基被超氧化物歧化酶破坏有关。

45 四.化学检查  精液中某些生化指标的改变对男性病的诊断及治疗有重要的意义.如ACP、LDH-X、精子顶体酶、Zn、精浆柠檬酸、精浆果糖等。

46 1.酸性磷酸酶(ACP):主要来自前列腺,属于前列腺酸性磷酸酶(PAP)
正常参考值(1)速率法:80-1000U/ml (2)β-硝基酚法:›200/UL 临床意义:用以了解前列腺的功能和对前列腺疾病的诊断。减低:前列腺炎症;增加:前列腺癌和前列腺肥大等; 精子PAP活性减低,受孕的几率也减低。 2。乳酸脱氢酶-X(LDH-X):精液共有6种乳酸脱氢酶,以乳酸脱氢酶-X的活性最强,相当于乳酸脱氢酶总活性的1/3,广泛存在于精母细胞、精子细胞、和精子线粒体内,具有组织特异性,对精子生成、代谢、获能和受精均具有重要作用。 方法:电泳分离扫描 正常参考值(1) LDH-X 相对活性≥40%,绝对活度(1430±940)U/L 临床意义:活性减低或消失:见于睾丸组织萎缩;少精或无精症患者。有时精液常规检查正常的不孕症患者,也可出现LDH-X活性下降,因此, LDH-X活性检测对男性不孕症的诊断是一项有价值的指标。

47 3。精子顶体酶(acrosin)的测定:精子形成的早期就有丰富的顶体酶原mRNA表达,当精子头部进入卵透明带,精子体外获能,顶体酶原活化,从而启动肽链相互作用,促进顶体反应发生。
方法:速率法 正常参考值(37±21)U/L 临床意义:顶体酶活性降低:不孕症;与精子活力、活率正相关,与精子畸形、WBC等副相关。 4。精浆柠檬酸测定:主要来自前列腺,其作用主要是络合钙离子,从而调节精浆中钙离子的浓度,与射精后精液凝固及液化过程密切相关。 方法:紫外比色法 正常参考值:50μmol/L 临床意义:用以评价前列腺功能和判断雄激素的分泌状态。

48 5.精浆果糖:精浆果糖是精子能量的主要来源,是由精囊腺分泌的。精浆果糖的高低直接影响精子活力,同时睾酮的水平也影响精囊果糖的分泌。因此,精浆果糖的含量测定不仅能反应精囊腺的分泌功能,而且还反应睾丸内分泌功能。 方法:显色法和紫外分光酶分析法 正常参考值:间苯二酚法:9.11-17.67mmol/L;吲哚比色法: ≥ 13 μmol/L 临床意义:精浆果糖为零时,见于先天性两侧输精管和/或精囊腺缺如、两侧输精管完全阻塞或逆行射精;精浆果糖降低:精囊炎和雄激素分泌不足等。 6.精浆锌:为了维持人体生殖内分泌系统的功能,需要锌、锰、镁、铁、钾、钠等多种金属元素的参与,期中锌与生殖功能关系最为密切。精浆中的锌比血液中的锌高,主要存在于睾丸、副睾和前列腺中。 方法:原子吸收光谱法和比色法 正常参考值:原子吸收光谱法:163.02±45.26 μg/ml;比色法: ≥ 2.4 μmol/1次射精 临床意义:用于不孕症的诊断,减少或缺乏:可(1)抑制脑垂体促性腺激素的释放,影响性腺发育及性腺的生殖和内分泌功能;(2)影响精子生成、成熟、激活和获能过程。

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50 五.免疫学检查 近年来免疫学检查迅速发展,如:  1.抗精子抗体(AsAb):  ①混合抗免疫球蛋白试验(MAR)  ②免疫珠试验  ③精子凝集试验  2.精浆免疫抑制物质  3.精浆免疫球蛋白测定

51 1、混合抗免疫球蛋白试验(MAR):用混匀的未加处理的新鲜精液,与包被的乳胶粒或绵羊红细胞混合,再加入特异的单克隆抗IgG抗血清。若胶乳粒和活动精子之间形成混合凝集即表示精子表面存在IgG抗精子抗体。
正常参考值:阴性 临床意义:①50%以上的精子与颗粒黏附,可能为免疫性不孕;②10%-50%的精子与颗粒黏附,可疑为免疫性不孕。 2、免疫珠试验(immunobeasd assay)免疫珠是兔抗人免疫球蛋白与聚丙烯酰胺通过共价结合的一种微球,此实验可以同时检测IgG、IgA、IgM类型的抗体。 正常参考值:免疫珠黏附率∠ 20% 临床意义:黏附率≥20%为免疫珠黏附为阳性,此时精子在宫颈粘液中的穿透和体内受精无明显受损倾向;黏附率≥50%有临床意义,但如仅见精子尾端与免疫珠黏附,也可见于某些生育力正常的男性精液。

52 3、精子凝集试验(SAT):血清、生殖道分泌物中存在的AsAb与精子膜上抗原相结合,精子可出现各种各样的凝集现象,如:头-头,头-尾,尾-尾凝集。
正常参考值:阴性 临床意义:阳性证明存在AsAb。 4、精子制动试验(SIT): AsAb与精子表面抗原相互作用激活补体系统。导致精子顶体破坏,膜通透性及完整性受损,精子失去活力。检查AsAb的试验很多,其中SAT、SIT与免疫珠试验呈正相关。用ELISA检测患者的血清、精浆或宫颈粘液中的AsAb。 临床意义:当精子活动力、活动率和低渗肿胀试验均异常时,多提示精液中存在AsAb,可通过SIT试验进行筛选。

53 (二)精浆免疫抑制物质(SPIM):人类精液中含有30余种Ag,因其含有SPIM故当精液进入女性生殖道后通常不会引起免疫应答。免疫抑制效应可能是多种物质综合作用的结果,其中妊娠相关蛋白A(PAPP-A)也称男性抑制物质(MIM),能抑制机体对精子的免疫反应,保护受精卵,维持正常的生殖生理过程。 正常参考值(1)SPIM抗补体试验:430±62U/L;(2)MIM单向免疫扩散试验: 3.0±0.3g/L 临床意义:降低可见于不孕症,习惯性流产、配偶对丈夫精液过敏等。 (三)精浆免疫球蛋白测定: 正常参考值(1)IgA:90.3±57.7mg/L;(2)IgG: 28.6±16.7mg/L;(3)IgM: 2.3±1.9mg/L 临床意义: AsAb阳性者, IgM增高;生殖炎症时,分泌型IgA增高.

54 六.微生物学检查 1.细菌 2.支原体 3.衣原体 4.病毒 5.原虫 七.精子自动分析系统

55 细菌学检查

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57 精子自动分析系统

58 精子质量自动分析系统

59 精子质量自动分析系统 系 统 特 点  系统采用现代化的计算机图像处理技术和先进的高新智能技术,对精子的动静态特征进行全面的量化分析,使试验结果更具有专业性、科学性和可比性。精子质量自动分析系统与传统的分析方法比较,具有速度快、量化性好、准确性高、检测参数丰富等特点,为临床和科研提供了客观的检测依据。另外它还具有操作简单、污染性小、智能化程度高等特点 本系统还可选配显微镜荧光装置,用于性病诊断,并为此配置了相应的软件和教学图谱。

60 适 用 范 围: 特别适用于临床精液检测,能够极大的提高临床检测水平。可广泛应用于检测男性不育、试管婴儿、优生优育研究等方面。
选配显微镜荧光装置后,可用于泌尿系统疾病、性病诊断和鉴别诊断  各种血液病的诊断和鉴别诊断 自身免疫疾病的诊断和鉴别诊断 寄生虫感染 在某些专业机构,如生物研究所、濒临稀有动物研究所、畜牧人工繁殖研究所及人工受精站等,也具有很高的应用价值

61 适 用 范 围: 特别适用于临床精液检测,能够极大的提高临床检测水平。可广泛应用于检测男性不育、试管婴儿、优生优育研究等方面。
选配显微镜荧光装置后,可用于泌尿系统疾病、性病诊断和鉴别诊断  各种血液病的诊断和鉴别诊断 自身免疫疾病的诊断和鉴别诊断 寄生虫感染 在某些专业机构,如生物研究所、濒临稀有动物研究所、畜牧人工繁殖研究所及人工受精站站等,也具有很高的应用价值

62 系 统 技 术 指 标:  1、样品的允许采集数量(个)  1~1000 2、检测速度的范围 ( μ m/s)     0~300 3、图像的采集帧数(帧)      1~50 4、颗粒直径分辨率( μ m)      1~50 5、对一组图像的分析时间      不大于30秒 6、图像的采集组数(组)      ~10 7、可一机多用 8、全面直观的数据图像检测分析,检测数据丰富,分析数据全面。可检测34项精液指标,三种速度分布统计图。

63 谢谢大家!

64 第二节 前列腺液检查 前列腺液的主要成份:电解质、酶、免疫物质、有形成份及其他一些物质。
第二节 前列腺液检查    前列腺液为前列腺外分泌功能分泌的前列腺液占精液的30%,为乳白色液体。 前列腺液的主要成份:电解质、酶、免疫物质、有形成份及其他一些物质。 检查目的:用于慢性前列腺炎、病原性微生物及性传播疾病的诊断。

65 一.标本的采集 用前列腺按摩法采集,弃去第一滴, 二.理学检查  量、色、粘稠度、PH 三.镜检  1.直接涂片镜检  ①卵磷脂小体  ②血细胞

66  1)RBC  2)WBC  3)上皮C  ③前列腺颗粒细胞  ④淀粉样体  ⑤精子  ⑥结石  ⑦其他

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86  2.涂片染色镜检  ①肿瘤细胞检查  ②细菌学检查 四.化学检查 五.微生物学检查——细菌培养 六.小结

87 阿贝折射仪 谢谢大家! 内蒙古民族大学


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