仪器设备使用介绍 李东芹 作物遗传改良国家重点实验室 2016 09 28.

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1 仪器设备使用介绍 李东芹 作物遗传改良国家重点实验室

2 一、常规小仪器使用介绍 ***所有仪器通用的使用注意事项 注意仪器功率，不能随意乱接电源 每个设备位置固定，不能随意搬到别的地方使用
提前按每台仪器的规定进行预约，违规预约无效 按仪器操作规程规范操作，第一次使用前要详细了解仪器的操作步骤及注意事项 不具备上机操作资格的不可擅自使用仪器; 不能私自用本实验室仪器帮室外的同学测试样品 . 发现问题及时报告，并在仪器运行日志上记载

3 仪器使用完毕后 关闭仪器电源 清洁仪器及配件，并将配件收藏到指定的位置 填写仪器运行日志 整理、清洁实验台面（地面） 实验材料及物品收放归位
做好实验记录 ***对于违反仪器管理规定的同学，视情况公开检讨、罚款、通报批评等，造成仪器损坏等重大损失的由个人和所属课题组共同承担维修费用。

4 冰箱及超低温冰箱的使用 实验材料、试剂的存贮 存贮温度（室温、4℃、-20 ℃、-80 ℃）
标记清楚（试剂或材料名称、日期、试剂配置人或材料所有者） 放置在指定位置（人或试剂、材料种类） 定时清理掉时间长的不要的物品

5 冰箱使用注意事项 *不得关闭冰箱的报警装置及电源开关（专人值日检查）
*所有的材料均应醒目地标明所有者的姓名，放置于指定冰箱的指定隔层中，不得随意乱放 *叶片等室外材料均应标明取样时间及姓名，采用大包装套小包装 *开启冰箱必须有救火意识。关门时务必关紧 *对于标示不清楚或愈期不处理以及未经许可放入他人箱层的材料，冰箱管理人及该箱层使用人都有权随意处置

6 通风柜的使用 苯酚、氯仿、二甲苯等挥发性及腐蚀性的有机溶剂使用时必须戴手套在通风柜内操作
用过的废液绝对不允许倒至水池中，必须分类收集，标注清楚，交与学校负责部门（国资设备处）处理 使用后应清洁台面，至没有气味时关闭电源

7 移液器的使用 不能超量程使用 吸取溶液后不能倒置，吸取、打出试剂时动作应轻柔 用过的tip不能丢到桌面上，应直接放到废物杯中
用后放置到安全位置，小心摔坏 日常保养及校准

8 天平的使用 天平的选择：按样品的称量量来选择不同量程及精度的天平 ***注意事项： 1.首次使用或者挪动地方需调水平和质量校准
2.称量时要轻拿轻放，样品要尽量放在样品盘正中心。 3.不可超载，不能连续负载 4.称量样品洒出时，要及时用样品刷清扫（带手套关机后取出称盘和防风圈，清扫完毕后先装防风圈，再放称量盘) 5.远离会引起气流变化和温度速变的门、窗附近 6. 远离离心机、摇床等易产生震动、旋转或来回移动设备的地方 7.远离磁场或产生磁场的地方

9 离心机的使用和注意事项 离心机要安装在平坦结实的地面或实验台上，不允许倾斜 离心管与转头配套（离心管的大小，离心管底部形状）
用天平称量离心管重量（重量平衡），盖上离心管盖子并旋紧；离心管对称放置 在启动离心机前，确定转子盖或转子固定已可靠上紧。 转子在使用时绝对不可超过最高额定转速 绝对不可试图用手将转子减速或停转。 请勿在转子上使用锋利的工具，否则可能在转子表面上留下刮痕 善后（取转头、关闭电源、机体清洁、运行登记）

10 无菌操作及超净工作台的使用 超净工作台的预约 使用前房间及超净工作台的灭菌 酒精灯及酒精的使用 无菌操作 用后清理，登记

11 PCR 仪的使用 除专人外，不准在PCR程序中设置密码 使用PCR仪必须首先预约登记，并严格按预约的时间段使用
PCR板放平、橡皮盖压好，对于部分机型（如ABI9700，2700及伯乐的MyCycler 等关盖时双手平衡用力压下PCR 仪盖 PCR仪反应结束后应及时取出 不得将PCR仪作为恒温器使用 登记运行日志

12 摇床的使用及注意事项 放置于平坦、坚固的地面或台面 设置转速、温度等参数
为避免摇台高速旋转工作时产生较大的震动，培养瓶应均匀的布满摇台，并且所装液体大致相当（如果培养瓶不足，各瓶要对称放置），检查培养瓶是否夹好 启动时缓缓调节“调速”旋钮至所需转速

13 放射性同位素操作相关设备 放射性同位素操作人员必须经过培训（知识培训、操作培训） 专用同位素室、专用仪器设备、专用操作台面
铅服、工作服、有机玻璃挡板、手套 盖革计数器、杂交炉、冰箱、摇床 意外事故处理：台面污染、皮肤等 发现问题及时处理

14 盖革计数器 操作放射性同位素之前检测实验台内、外的所有 物品及设施，并如实登记具体信号（用前有污染 找前面的使用者处理，并告知房间管理人或实验 室管理老师） 实验过程中实时监测各用品是否被污染，特别是 手套，一旦污染及时更换，以免造成二次污染 防止计数器被污染、用后及时关机；经常检查电 池电量是否充足，长期不用请将电池取出。 实验结束用后检测所有物品及设施，并如实登记 信号强度，如有污染马上按规定清洁，无法清洁 干净的及时报告管理者

15 专用冰箱及摇床 放射源一定要放在铅罐里密封好，然后放到冰箱指定位置
含有放射性同位素的试管等：如果没有足够的铅罐存放，应盖紧盖子放在试管盒内，试管盒放置于冰箱内带盖的有机玻璃盒内，不允许没有任何防护措施直接将含有放射性物质的试剂放置在冰箱里 摇床上最好放一个不锈钢或塑料托盘，以防万一有放射性试剂漏出污染摇床时便于清洗和处理 打开摇床取、放物品时要用有机玻璃挡板防护

16 杂交炉及杂交管 杂交管要对称夹好 杂交管盖子要用手拧紧，以防管内溶液漏出，但不能太紧以免温度升上来后打不开或盖子胀裂
用前要检查杂交管盖子内的橡胶垫子是否完好 一旦有溶液漏出，要及时清理（注意防护、粘有放射性废物的纸要收到放射性废物专用设施内） 杂交管使用温度不要超过70℃ 用后及时清洗杂交管，收藏到指定、安全的位置

17 放射性废物的存放和处理 废物存放：专用容器，挡板隔离，不同核素单独存放，标示清楚核素名称及最后容器封口的时间
废物处理：半衰期短的核素（如：32P、33P、35S），放置10个半衰期后掩埋，半衰期长的核素（如3H、14C）：标注核素名称及相关信息，通知学校国资设备处将其交至专门的放射性废物处理保藏机构

18 二、大型仪器使用介绍 实验仪器开放共享管理系统 网址： 122.205.95.167
注册会员帐号后登陆,首页文档里下载使用说明，熟悉仪器预约使用流程, ，选择自己所在的课题组（按导师分组）。 点击仪器速览就可以看到全部在线的仪器，根据实际需要进行预约，仪器管理员同意后就可以刷卡使用仪器。 学校国资处大型仪器共享网及湖北省仪器协作网。

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20 仪器列表

21 质谱仪介绍 质谱仪按其测试对象分为无机质谱和有机质谱。实验室现有的几台质谱仪，其中电感耦合等离子质谱仪（ＩＣＰ—ＭＳ）和同位素质谱为无机质谱，分别用于无机金属元素和无机非金属元素的测定。其它的几台仪器均为有机质谱仪，而每台质谱又因为质量分析器的不同而导致其应用范围不同。比如ABI5500及4000Qtrap三重四级杆质量分析器侧重于极性、中等极性小分子化合物的定量分析； 离子阱检测器多用于化合物结构鉴定、代谢组学、药物代谢等Qtof飞行时间质量分析器多用于蛋白等大分子定性定量分析； 大家可以根据自己的样品类别和研究目的来选择预约仪器。

22 色谱、质谱分析原理 色谱分离原理：混合物中各组分由于化学性质和结构上存在差异，导致它们在互不相溶的固定相和流动相中吸附能力，分配系数或其它亲合作用力有差别。随着流动相的移动，各组分在两相间经过反复多次的分配平衡（吸附和解吸），使得性能有微小差异的组分产生很大的分离效果，按一定顺序由固定相中先后流出，进入检测器进行检测 。 质谱仪工作原理：物质在一定能量作用下被离子化（离子化方式很多种，常用电喷雾和大气压化学电离），形成质荷比（m/e）大小不同的离子，这些离子在一定电场、磁场力作用下按不同的质荷比大小分离开来，通过测定离子质荷比及其强度来对被测物质定性定量分析。

23 液质联用仪 液质联用仪是利用液相色谱将有机混合物分离，按出峰先后顺序依次进入质谱仪，将液相的高分离能力和质谱仪的高分辨高灵敏检测能力相结合，优势互补，既可以定性也可以定量，是目前最具前途的分析技术之一。可广泛应用于难挥发性化合物、极性化合物、热不稳定化合物和大分子化合物（包括蛋白质、多肽、多糖、多聚物等）的分析。自然界约70-80%的化合物都可以它来分析。 有些化合物虽然满足以上条件，但因化学结构稳定很难离子化，或者本身可以离子化但是结构很稳定很难打出碎片；或者一些同分异构体化合物母离子、子离子都相同仪器不能辨别分离等原因也不能测试。

24 气质联用仪 气相色谱工作原理： 样品在进样口高温汽化后被载气带入色谱柱中，由于色谱柱固定相对各组份的吸附或溶解能力 不同，因此各组份在色谱柱中的运行速度就不同，经过一定的柱长后，便彼此分离，按顺序 离开色谱柱进入 质谱仪检测。 应用范围：气质联用技术具有高灵敏度、高重复性、可检库鉴定已知物等特点。主要用于易挥发、热稳定性化合物的定性定量分析，或者经过衍生化反应后可以生成易挥发、热稳定的衍生物的化合物分析；不能用于大分子、难挥发性物质和热不稳定性物质的分析。

25 1.流动相选择及注意事项 流动相必须用HPLC级的试剂，水要用二次水，该试剂要能充分的溶解样品并且不能与样品产生化学反应。 流动相的黏度要尽量小，特殊情况下还要考虑流动相的物化性质与检测器 匹配问题。比如使用UV检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。 流动相使用前用专用溶剂过滤器用0.45um或更细的滤膜过滤 ；流动相过滤后要用超声波脱气，脱气后应该恢复到室温后使用（有在线脱气机这一步也可省略）。 流动相最好现配现用，特别是缓冲盐溶液或者纯水相容易发霉长菌，可以加入叠氮化钠，防止细菌生长。（叠氮化钠剧毒，一般很少用，只要现配现用一般都没问题）

26 2.色谱柱的选择及注意事项 色谱柱有很多很多种，一般按固定相的极性分为强极性、中等极性、非极性等，还有很多专用色谱柱，如糖柱。大家在文献中经常看到的反相色谱、正相色谱也是相对于色谱柱的极性来划分的。流动相极性大于色谱柱的极性就是反相分离色谱，流动相极性小于色谱柱极性就是正相分离色谱。我们比较常用的C18柱反相分离色谱，以此为例来说一下注意事项： 1.要注意柱子能耐最大压力和PH值范围，不得分离超过其PH范围的样品 2. C18柱绝对不能进蛋白样品，血样、生物样品。 3.每次做样前要先用测试用溶剂平衡色谱柱二十分钟以上，做完样品后应该用当前测试使用的溶剂清洗流路系统30分钟左右；当使用缓冲盐溶液时，做完样品后用含水量较高的溶剂（C18柱不可用纯水冲洗）冲洗管路及柱子一小时左右，然后用80%以上的甲醇水冲洗30分钟左右，以充分洗去离子，防止缓冲盐在流路中析出造成堵塞。 4.长时间不用仪器，应该将柱子取下用堵头封好保存。保存柱子最好用纯乙腈，含水量较高的溶剂易长霉，不能用于柱子保存。

27 3.检测器的选用及注意事项 液相色谱检测器有很多种，常用的有示差折光、紫外、荧光、二极管阵列、电化学、化学发光、蒸发光散射检测器等。示差折光和蒸发光散射为通用型检测器，其它均为选择型检测器。要根据样品性质及现有条件来选用。

28 外标法 定量 用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。此法可分为工作曲线法及外标一点法等。工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。在完全相同的条件下 ，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度，或用回归方程计算， 外标单点校准法用一种浓度的对照品溶液对比测定样品溶液中某组分的含量。将对照品溶液与样品溶液在相同条件下多次进样，测得峰面积的平均值 ，利用W=A(W)/(A) 式中W与A分别代表在样品溶液进样体积中所含i组分的重量及相应的峰面积。(W)及(A)分别代表在对照品溶液进样体积中含纯品i组分的重量及相应峰面积。 标液配制：先准确称取一定量的样品，配制一浓度较高的母液，然后再逐一稀释成不同浓度梯度的四到五个标准溶液。

29 内标法定量 内标法是将一定量的纯物质作内标物，加入到准确称量的试样中，根据被测试样和内标物的质量比及其相应的色谱峰面积之比，来计算被测组分的含量。 内标化合物选择原则： 1.内标物应是该试样中不存在的纯物质; 2.它必须完全溶于试样中，并与试样中各组分的色谱峰能完全分离; 3.加入内标物的量应接近于被测组分; 4.色谱峰的位置应与被测组分的色谱峰的位置相近，或在几个被测组分色谱峰中间。 内标法的优点是测定的结果较为准确，通过测量内标物及被测组分的峰面积的相对值来进行计算的，在一定程度上消除了操作条件等的变化所引起的误差。 内标法的缺点是操作程序较为麻烦，每次分析时内标物和试样都要准确称量，有时寻找合适的内标物也有困难。 外标法简便，但进样量要求十分准确，要严格控制在与标准物相同的操作条件下进行，否则造成分析误差，得不到准确的测量结果。

30 谢 谢！