第七章 芳香胺类药物的分析 基本要求 第一节 芳胺类药物的分析 第二节 苯乙胺类药物分析 第三节 苯丙胺药物分析 练习与思考 返回主目录.

Presentation on theme: "第七章 芳香胺类药物的分析 基本要求 第一节 芳胺类药物的分析 第二节 苯乙胺类药物分析 第三节 苯丙胺药物分析 练习与思考 返回主目录."— Presentation transcript:

1 第七章 芳香胺类药物的分析 基本要求 第一节 芳胺类药物的分析 第二节 苯乙胺类药物分析 第三节 苯丙胺药物分析 练习与思考 返回主目录

2 【大纲要求】 二、熟悉本类药物的基本化学结构与特点。 返 回
一、掌握典型药物普鲁卡因、对乙酰氨基酚、肾上腺素、马来酸依那普利等及其制剂的鉴别反应、杂质检查和含量测定方法。 二、熟悉本类药物的基本化学结构与特点。 返 回

3 第一节 芳 胺类药物的分析 一、对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构与主要化学性质 芳伯氨基未被取代 芳胺类药物分为两类 芳伯氨基被酰化
第一节 芳 胺类药物的分析 芳伯氨基未被取代 芳胺类药物分为两类 芳伯氨基被酰化 一、对氨基苯甲酸酯类药物的基本结构与主要化学性质 （一）基本结构与典型药物

4 苯佐卡因 盐酸普鲁卡因

5 盐酸丁卡因 盐酸普鲁卡因胺

6 （二）主要理化性质 1.芳伯氨基特性：重氮化－偶合反应；芳醛缩合成Schiff碱；易 氧化变色等。盐酸丁卡因无此特性。
水解特性：分子结构中的酯键或酰胺键易水解，除盐酸 丁卡因外水产物为对丁基苯甲酸外，上述均 为对氨基苯甲酸。 弱碱性：除苯佐卡因外，其余均含有叔胺氮的侧链，故具 有弱碱性。 4. 其它特性：因结构中有 芳伯氨基或同时具有脂烃胺侧链，其 游离碱多为碱型油状液体或低熔点固体，难溶于 水，可溶于有机溶剂。其盐酸盐则易溶于水。

7 二、酰胺类药物的基本结构与主要化学性质 （一）基本结构与典型药物

8 对乙酰氨基酚（扑热息痛） 醋氨苯砜

9 盐酸布比卡因 盐酸利多卡因

10 （二）主要化学性质 2.水解产物易酯化：对乙酰基酚和醋氨苯砜，酸水解生成醋酸，在硫酸中与乙醇反应，发出醋酸乙酯香味。
1.水解后显芳伯氨基特性：分子结构中含有芳酰氨基，酸水解后显芳伯氨基的特性反应。注意空间位阻的影响。 2.水解产物易酯化：对乙酰基酚和醋氨苯砜，酸水解生成醋酸，在硫酸中与乙醇反应，发出醋酸乙酯香味。

11 3.酚羟基特性：对乙酰基酚有游离酚羟基；醋氨苯砜酸水解有酚羟基，可与FeCl3发生显色反应，可相互区别。
4.弱碱性：利多卡因和布比卡因烃胺侧链有叔胺氮，显碱性，可与生物碱沉淀剂发生沉淀反应，可相互区别。 5.与金属离子发生沉淀反应：利多卡因和布比卡因酰氨基上氮可与Cu2+,Co2+生成有色配位化合物沉淀。

12 三、鉴别试验 氨基的药物，均可发生此反应。 （一）重氮化-偶合反应 Ar-NH2 重氮盐 橙黄~猩红色 -萘酚
分子结构中含有芳伯氨基或潜在芳伯 氨基的药物，均可发生此反应。 OH- Ar-NH2 HCl 重氮盐 橙黄~猩红色 NaNO2 -萘酚

13 直接反应：苯佐卡因、盐酸普鲁卡因、 盐酸普
鲁卡因胺 间接反应：对乙酰氨基酚、醋氨苯砜 利多卡因和布比卡因由于空间位阻很难发生此反应。

14 丁卡因虽无芳伯氨基，但可与NaNO2反应生成N－亚硝基化合物的乳白色沉淀。

15

16

17 （二）与三氯化铁反应 对乙酰氨基酚 + FeCl3 蓝紫色化合物

18 （三）与金属离子反应 1. 与铜和钴离子反应： 利多卡因与硫酸铜生成蓝紫色配位化合物； 与氯化钴生成亮绿色沉淀。

19

20 2. 羟肟酸铁盐反应 基于普鲁卡因胺分子中的 芳酰胺结构。

21 3. 与汞离子反应 盐酸利多卡因 + H2NO3 + Hg(NO3)2 黄色 对氨基苯甲酸酯 ＋ H2NO3 + Hg(NO3)2
红色或橙黄色

22 (四) 水解产物反应 1. 盐酸普鲁卡因的鉴别 盐酸普鲁卡因 + NaOH 普鲁卡因 油状物 对氨基苯甲酸钠 + 二乙氨基乙醇
 油状物 对氨基苯甲酸钠 + 二乙氨基乙醇 （使湿润的红色石蕊试纸变兰色） 对氨基苯甲酸钠 + HCl 对氨基苯甲酸（白色）

23

24 2. 苯佐卡因的鉴别  乙醇 苯佐卡因 + NaOH  乙醇 + I2 + NaOH CHI3（碘仿臭气，黄色沉淀）

25 (五) 制备衍生物测熔点 1. 三硝基苯酚衍生物的制备：利多卡因和布比卡因

26 2. 硫氰酸盐衍生物的制备：盐酸丁卡因

27 (六) 紫外特征吸收光谱法 1. 在λmax 处测定供试液的百分吸收系数
例如：对乙酰基酚在0.4%NaOH中于λmax =240nm;E1%1cm = 715 在HCl(0.1nol/L)-甲醇于λmax =249nm; E1%1cm = 880 2. 在规定的浓度2下测定λmax 例如：醋氨苯砜5μg/ml; λmax =256nm; 284nm 再例如：盐酸普鲁卡因胺5μg/ml; λmax = 280nm

28 (七)红外吸收光谱法 利用化合物结构中特殊基团的振动和转动等红外活性振动产生的红外吸收峰对药物进行鉴别的方法。要求能够对IR图中的cm-1（σ）进行正确的归属。

29

30 四、特殊杂质检查 （一）对乙酰氨基酚中的特殊杂质检查 1.乙醇溶液的澄清度与颜色：因其生产工艺用铁粉作还原剂，可
能带入，致使乙醇溶液产生混浊，中间体对氨基酚易氧化产生 有色化物，在乙醇溶液中显橙红色或棕色。 检查方法：配制0.1g/ml本品乙醇溶液，溶液应澄清，无色； 如显混浊，与1号浊度标 准液比较，不得更浓； 如显色，与棕红色2号或橙红色2号 标准液比较， 不得更深。

31 2. 有关物质检查：Ch.P是以对氯苯乙酰胺为对照品，
采用TLC 法中的杂质对照品法。 3. 对氨基酚检查：利用对氨基酚在碱性条件下可与 亚硝基铁氰化钠生成蓝色配位化 合物，采用比色法。

32 (二)盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查
为什么要检查？ 怎样检查？ 采用TLC法中的杂质对照品法进行检查。

33 （三）盐酸氯普卡因注射液中有关物质和光解产物的检查
由于盐酸氯普卡因注射液在生产和贮藏过程中会产生4-氨基-2-氯苯甲酸，影响疗效和成品的颜色，故此需要对降解产物进行检查 1、高效液相色谱法（HPLC） 2、液相色谱与质谱联用法（LC-MS）

34 MS LC LC-MS LC-MS/MS LC-ESI-MS/MS电喷雾电离质谱仪 LC-APCI-MS/MS大气压电离子化-质谱 LC-ESI-TOF-MS/MS电喷雾电离飞行时间质谱仪 LC-MALDI-TOF-MS/MS基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱

35 Agillent 安捷伦 Waters 沃特斯 Bruker 布鲁克 Varian 瓦里安 AB 美国应用生物系统 Shimadzu 岛津 Finnigan 菲尼根

36 LC-MS分析： 1、色谱条件 Zobax SB-C18 (150 mm×4.6 mm, i.d., 5 μm) Column temperature: 25 ℃ Mobile phase:0.5%HAc-CH3CN (0.5%HAc)=87: 13 flow rate: 1.0 ml/min Detection wavelength: 254 nm

37 2、质谱条件 Positive Scan mode 80~600 mau 喷雾电压：4000V 裂解电压：70V N2-9.5 L/min 干燥气压力：40psi 干燥气温度：350℃

38

39

40 Total ion chromatogram, TIC
Chromatography Chromatographic

41 （四）盐酸罗哌卡因对映体的纯度检查

42 GITC

43

44 An 60μl aliquot of the supernatant was directly injected into the same HPLC system fitted with a chiral stationary phase column (Chiralcel OJ-H, 250mm×4.6 mm, 5m), protected by a guard column (10mm×4 mm) packed with the same packing material (Daicel Chemicals, Japan).

45 五、含量测定 （一）亚硝酸钠滴定法 Ch.P中的苯佐卡因、盐酸普鲁卡因和盐酸普鲁卡 因胺及其制剂可直接采用本法、醋氨苯砜及注射液水
Ar-NH2、Ar-NHCOR、Ar-NO2均可采用此法 Ch.P中的苯佐卡因、盐酸普鲁卡因和盐酸普鲁卡 因胺及其制剂可直接采用本法、醋氨苯砜及注射液水 解后用本法。

46

47 1. 原理： Ar-NH2 + RCOOH Ar-NHCOR + H2O Ar-N2+Cl- + NaCl + 2H2O
1. 原理： H + Ar-NH2 + RCOOH Ar-NHCOR + H2O Ar-N2+Cl- + NaCl + 2H2O Ar-NH2 + NaNO2 + 2HCl

48 测定主要条件： (1) 加KBr增加反应速度 HBr>HCl>HNO3 NaNO2 + HCl HNO2 + NaCl
重氮化的反应历程为： NaNO2 + HCl HNO NaCl HNO2 + HCl NOCl H2O KHCl

49

50 KBr + HCl HBr + KCl HNO2 + HCl NOBr + H2O ∵ KHBr 比KHCl大300倍
KKBr ∵ KHBr 比KHCl大300倍 ∴生成NOBr量大得多 ∴加快反应速度

51 ①重氮化速度加快； ②重氮盐在酸性介质中稳定； ③防止生成氨基偶氮化合物。 (2) 加过量HCl加速反应：
Ar-N2+Cl- + H2N-Ar Ar-N=N-NH-Ar + HCl 一般摩尔比为Ar-NH2 : HCl = 1 : 2.5~6 。

52 (3) 室温条件下滴定: 温度高反应速度快；每升高10℃加快2.5倍 太高,可使Ar-N2+Cl- + H2O Ar-OH + N HCl (4) 滴定管尖端插入液面下滴定

53 3. 指示终点的方法 + (1) 用停滴定法 溶液 检流计 V VV 终点前： 无过量 无电流 G HNO2
R1 R2 + V 3. 指示终点的方法 (1) 用停滴定法 溶液 检流计 终点前： 无过量 无电流 HNO2 终点时：有过量 有电流（使指针偏离零 HNO 永停在某一位置） (2) 外指示剂法 用KI-淀粉指示剂 指示终点的原理： 2NaO2 + 2KI + 4HCl NO + I KCl + 2NaCl + 2H2O

54 (二）非水溶液滴定法 基于盐酸丁卡因、盐酸利多卡因和盐酸布比卡因 侧链叔胺氮在滴定盐酸丁卡因时，因其在冰醋酸中碱
性弱，加醋酐可增加其碱性。因醋酐合乙酰氧离子比 醋酸和质子的酸性强，可增加碱性。 2(CH3CO)2O (CH3CO)3O++CH3COO- 相当于 ［B]HCl + Hg(Ac)2 [B]HAc + HgCl2 [B]HAc + HClO4 [B]HClO4 + HAc

55 （三）分光光度法 1. 对乙酰基酚原料的含量测定 在0.4%NaOH介质中，257nm
D%＝［E1%1cm]样／［E1%1cm]标×100％ ；E1%1cm＝715 2. 对乙酰基酚片溶出度测定 （测定条件同上） 1片＋稀HCl 24ml + H2O ml 精密量取5ml + 0.4%NaOH10ml + H2O ml λ257nm测定A。 W×1／1000×5／100×100＝C （g/100ml) W(g) = 200 ×C; C = A/715 ∴ 溶出度＝W／标示量×100％＞80％为合格

56 （四）比色法 中性条件下的重氮化反应 pH4-9 盐酸普鲁卡因 +1,2-蒽醌-4-磺酸钠 棕红色化合物，max482nm处测定A

57 准确移取2．0 mL盐酸普鲁卡因标准溶液于10 mL比色管中，依次加入1，2-萘醌4．磺酸钠1．0 mL，pH 4
准确移取2．0 mL盐酸普鲁卡因标准溶液于10 mL比色管中，依次加入1，2-萘醌4．磺酸钠1．0 mL，pH 4.70的HAc-NaAc缓冲溶液2．0 mL，用水稀释到刻度，混匀，室温下放置30 min。以试剂空白为参比，分别在300nm和484 nm处测定其吸光度。以484 nm和300 nm吸光度之差对浓度绘制标准曲线

58

59 等吸收双波长分光光度法测定盐酸 普鲁卡因注射液的含量
准确称量在105℃下干燥至恒重的盐酸普鲁卡因标准 品100．3 mg，于1000 ml的容量瓶中用磷酸缓冲液(pH 6．5)溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml于6个5O0ml容量瓶中，用磷酸缓冲液(pH6.5)溶解并稀释至刻度，盐酸普鲁卡因的质量浓度则分别为2.006，4.012，6.018，8.024，10.03，12.04 g／ml，以磷酸缓冲液为参比，将标准品液和参比液(磷酸缓冲液)盛于1 cm的石英比色皿中，于289 nm和241 nm处的测定吸收

60

61 （五）盐酸普鲁卡因胺的快速荧光测定 盐酸普鲁卡因胺 + 荧胺 荧光物 pH7.5
λex400nm（激发波长）、λem485nm（发射波长）处测定荧光强度，标准曲线法定量。

62 （六）HPLC法 此法主要用于盐酸普鲁卡因注射液的测定。因该注射液中 常含有降解产物对氨基苯甲酸；可以苯甲酸为内标同时测定两
者的含量，该法简单准确。 色谱条件：色谱柱为ODS 流动相为甲醇－1％HAc(40:60) UV检测器250nm 返 回

63 HPLC法测定赫酸普鲁卡因葡萄糖注射液中盐酸普鲁卡因和对氨基苯甲酸的含量
色谱柱：Nova-Pak Cl8 (150 mm×4．0 mm，4 m)(大连依利特公司)；流动相为甲醇一10 mmol·L～ NaH PO 溶液(pH 6.48，2 mmol·L 三乙胺)(30：70，V／V)；流速为0.7 ml·rain～；柱温：30℃ ；检测波长为287 nm；进样量为10μl

64

65 High-performance capillary electrophoresis HPCE
七：体内药物分析 High-performance capillary electrophoresis HPCE 电泳分析条件： 40 mmol/l的H3PO4-Tris buffer pH=5.0 毛细管：59 cm×70μm 柱温：18℃ 压力进样：3Kpa×5s 工作电压：20 KV 检测波长：220 nm

66 分析样品的处理： 血浆→碱化→乙醚：二氯甲烷萃取→离心→挥干有机溶剂→缓冲溶液溶解残渣→进样分析

67 第二节 苯乙胺类药物的分析 一、苯乙胺类药物的基本结构与主要化学性质 （一）基本结构与典型药物 *

68 常见的苯乙胺类药物

69

70

71

72 （二）主要化学性质 显弱碱性。 2.酚羟基特性 本类药物结构中有酚羟基，可与 FeCl3;发生氧化。
1.弱碱性 本类药物结构中有烃氨基侧链，为仲胺氮 显弱碱性。 2.酚羟基特性 本类药物结构中有酚羟基，可与 FeCl3;发生氧化。 3.光学活性 多数药物结构中有手性碳原子，具有旋 光性。

73 二、鉴别试验 (一)与三氯化铁反应 Ar-OH＋FeCl3 络合显色 ＋ 碱液 紫色或紫红色

74

75 (二）甲醛－硫酸反应 在此试剂中形成醌式结构而显色。 药 物 三氯化铁 甲醛－硫酸 。
药 物 三氯化铁 甲醛－硫酸 肾上腺素 mol/LHCl显绿色,甲氨试液显红－紫红 红色 重酒石酸去甲肾上腺素 绿色,加NaCO3试液显紫色－红色 淡红色 盐酸去氧肾上腺素 紫色 玫瑰红橙红棕红 盐酸异丙肾上腺素 深绿色,加5％NaCO3试液显蓝紫色－红色 棕色暗紫色

76 本类药物具有Ar-OH，易被氧化剂I2, H2O2,
(三）氧化反应 本类药物具有Ar-OH，易被氧化剂I2, H2O2, K3Fe(CN)6氧化而显色， 例如：肾上腺素在中性或酸性条件下，被I2, H2O2 氧化后，生成肾上腺素红； 盐酸异丙肾上腺素在酸性条件下，被I2氧化，生成异丙肾上腺素红。

77 (四）紫外特征吸收与红外吸收光谱 例如： 盐酸异丙肾上腺素 0.05mg/ml λmax = 280nm A =0.50
这一类药物均可采用红外吸收光谱进行鉴别

78

79 (五）与亚硝基铁氰化钠 (Rimini试验）
是鉴别脂肪伯氨基的特殊反应，可用于重酒石酸间羟胺鉴别。 D ＋亚硝基铁氰化钠 ＋ 丙酮 ＋ Na2CO3 红紫色

80 (六) 双缩脲反应 碱，盐酸伪麻黄碱鉴别： 显蓝紫色 D ＋ CuSO4 + NaOH ＋乙醚，醚层(紫红色)水层(蓝色)
是鉴别芳环氨基醇的特殊反应；可用于盐酸麻黄 碱，盐酸伪麻黄碱鉴别： D ＋ CuSO4 + NaOH 显蓝紫色 ＋乙醚，醚层(紫红色)水层(蓝色)

81 三、特殊杂质检查 化不完全，易引入酮体杂质。 利用酮体在310nm有吸收，本类药物无吸收。 (一) 酮体检查
本类药物在生产过程中多采用酮体氢化制得，若氢 化不完全，易引入酮体杂质。 采用UV法检查： 利用酮体在310nm有吸收，本类药物无吸收。 例如：肾上腺素本项检查 配2.0mg/ml λ=310nm A≤0.05 盐酸去氧肾上腺素 配2.0mg/ml λ=310nm A≤0.02 盐酸异丙肾上腺素 配2.0mg/ml λ=310nm A≤0.15

82 采用TLC法中的高低浓度对比法进行检查。
(二) 有关物质的检查 盐酸去氧肾上腺素、硫酸沙丁胺醇－TLC 盐酸苯乙双胍-PC 盐酸氨溴索－HPLC 采用TLC法中的高低浓度对比法进行检查。

83 盐酸氨溴索的检查方法 对照样品制备：本品→供试品溶液→对照溶液
供试样品制备：本品→甲醇溶解→加甲醛溶液→加热→吹干溶剂→用水和流动相溶解→HPLC分析 色谱条件：RP-HPLC 0.01mol/lNH4H2PO4-CH3CN (50:50); 248 nm 分析：对照溶液主成分峰为满量程的20％~25%，记录至主成分峰保留时间的2倍，注入供试品溶液，如有杂峰，各杂峰的面积之和不得大于对照液主峰面积的三分之一。

84 Main peak

85 (三) 盐酸苯乙双胍中有关双胍的检查－PC法
样品制备：本品甲醇溶解即得 展开：7.5×50 cm，EtOAc-ethanol-water (6:3:1) 显色：10％铁氰化钾＋10％亚硝基铁氰化钠＋10％NaOH 检测：剪下显色斑点后甲醇萃取用UV法测定

86 四、含量测定 (一) 非水溶液滴定法 本类药物的原料药多采用此法。 1. 重酒石酸去甲肾上腺素的测定 相当于［B］的有机酸盐可直接滴定。
2.盐酸克仑特罗的测定 相当于［B］的HX酸盐不能直接滴定，需加Hg(Ac)2处理后滴定。 3.硫酸沙丁醇的测定 相当于［B］的H2SO4盐可直接滴定, 也可处理后滴定。

87

88 (二) 溴量法 本类药物重酒石酸间羟胺、盐酸去氧肾上腺素及 其注射液用此法。 基本原理：

89 基本操作：供试品→精密称定→加水溶解后精密加溴滴定液＋盐酸→放置并振摇→加碘化钾→振摇→用Na2S2O3滴定至近终点→加淀粉指示液→继续滴定至蓝色消失
同时进行空白实验

90 （三）提取酸碱滴定法 基本原理：药物的盐酸盐或硫酸盐易溶于水，而药物本身不溶于水，加适量碱化试剂后，用适当的有机溶剂萃取，提取也蒸干后用中性乙醇溶解，用标准酸液直接滴定，或加入滴定过量的标准酸溶液，用标准碱溶液进行回滴。

91 硫酸苯丙胺的含量测定： 乙醚 ［B］H2SO4 + NaOH + NaCl 提取［B］ 蒸去乙醚 + H2SO4 终点 NaOH标准液滴定

92 (四) 紫外分光光度法与比色法 利用药物分子结构中的芳伯氨基进行重氮化－偶合反应，以及分子结构中的Ar-OH与Fe3＋络合显色，进行比色测定。 盐酸异丙肾上腺素注射液 重酒石酸间羟胺注射液 盐酸甲氧明注射液 硫酸沙丁胺醇注射液及胶囊

93 例如：盐酸克伦特罗栓的含量测定 上述偶合剂可与HNO2显色，干扰比色测定，可先加氨基 磺酸铵分解过量的HNO2。
HNO2＋2H2NSO3NH4 2N2 + (NH4)2SO4 + H2SO4 +H2O

94 λex410nm、λem520nm处测定荧光强度，对照法定量。
(五) 荧光分光光度法 肾上腺素测定： 一定条件下 肾上腺素 +I2 肾上腺红 N-甲基-3,5,6-三羟基吲哚 λex410nm、λem520nm处测定荧光强度，对照法定量。

95 (六) HPLC法 例一、重酒石酸去甲肾上腺素注射液的测定 采用RPIP-HPLC-UV法；用外标一点法进行定量测 定。
例二、血浆中儿茶酚胺类（肾上腺素类）药物的测定 采用RPIP-HPLC-ECD 法；用标准曲线法进行定量 测定。

96 (七) 衍生化GC法 （GC-FID 以盐酸美西律作内标物)
应用示例：盐酸芬氟拉明片的含量测定 盐酸芬氟拉明＋三氟乙酰肝 衍生物 返 回

97 其它分析技术与方法 采用分子印迹技术合成了对盐酸克伦特罗有高度选择性的分子印迹聚合物，以此聚合物为识别物质，在线分离富集盐酸克伦特罗，建立了一种测定盐酸克伦特罗的流动式化学发光传感器(MIP-CLflow sensor)。其原理为高锰酸钾在多聚磷酸和吐温-20介质中氧化分子印迹聚合物结合的盐酸克伦特罗，甲醛能大大增强该化学发光反应。盐酸克伦特罗浓度在1.0ng／mL-50ng／mL范围内同发光强度成良好的线性关系

98 高效毛细管电泳法用于饲料中盐酸克伦特罗 与沙丁胺醇含量的测定
毛细管：75 m(i.d)× 50 cm，有效长度39 cm，未涂层石英毛细管柱(河北永年锐沣色谱器件有限公司)；缓冲液为60 mmol／L的柠檬酸一柠檬酸钠缓冲溶液，pH为6.32；分离温度25℃；分离电压12 kV；检测波长200 nm；压力进样：3．4 kPaX 20 s．实验前，依次用0.1 mol／L的NaOH溶液、水和缓冲溶液冲洗毛细管5、2、2 min，两次进样间用缓冲溶液冲洗2 min．

99

100 第三节：苯丙胺类药物的分析 基本结构与主要性质 ACE抑制剂

101 2005版中国药典收载的代表药物 马来酸依那普利 盐酸贝那普利

102 西那普利 赖诺普利

103 主要性质 1、酸碱性：分子中含有-COOH，显酸性；含有烃氨链，显弱碱性 2、氨基酸特性：结构是脯氨酸的衍生物 3、光学活性：分子中含有不对称中心，具有旋光性 4、水解特性：本类药物大多是Pre-drug，在体内转化为活性代谢物

104 二、鉴别试验 一、物理与化学鉴别法 1、熔点测定法－BP(马来酸依那普利） 2、高锰酸钾反应－红色消失（氧化还原反应）
3、溴－间苯二酚反应：先进行溴代反应，使溴颜色消失，再与间苯二酚反应，显棕红色 4、羟胺－三氯化铁反应：先进行羟胺的生成（羟胺甲醇液＋KOH乙醇液）→FeCl3 →显棕红色

105 二、旋光法

106 三、光谱与色谱法鉴别

107 三、特殊杂质的检查 1、马赖酸依那普利有关物质的检查：依那普利那＋依那普利双酮－采用HPLC法检查
2、西那普利中有关物质的检查：A、B、C、D四个主要杂质 杂质A-TLC法检查（硅胶G板，目视比较），不得超过0.1％－BP 杂质B、C、D及其它杂质－HPLC法，分别不得超过0.5％、0.1％、0.2％和0.1％－BP

108

109 TLC法检查A杂质 制备样品液：供试品溶液（40 mg/ml）、对照品溶液a（40 μg/ml)、对照溶液b（0.5 mg/ml）
点样与展开：硅胶G板，HAc-H2O-n-Hex-MeOH-EtOAc (1: 1: 3: 3: 12) 显色：KBiI4-HAc (1: 10) 比较：供试品如显杂质A斑点，颜色≤对照液a的主斑点。要求对照液b显示两个清晰分开的斑点时，结果有效。

110 HPLC法检查B、C、D和其它杂质 样品测定液配制：供试品溶液（0.5 mg/ml)、对照溶液a (2.5 μg/ml）、对照溶液b（杂质D对照品0.5 mg/ml） 色谱条件：ODS 色谱柱，四氢呋喃－三乙胺为流动相，流速1.0ml/min，检测波长：214nm 色谱系统适用性：分别进样对照溶液a和b，使对照溶液a的主成分峰为满量程的50％，在对照溶液b中西那普利与杂质D的分离度不得低于2.5。

111 测定与评判： 1、色普图记录至峰A被洗脱为止 2、杂质B、C、D与西那普利的相对保留时间分别为0.6、1.6、0.9 3、峰面积杂质B≤0.5％（对照液a的主峰面积） 峰面积杂质C≤0.1％（对照液a的主峰面积） 峰面积杂质D≤0.2％（对照液a的主峰面积） 峰面积其它≤0.1％（对照液a的主峰面积）

112 Injection tem.: 200℃,detector tem.:250℃,
（三）残留溶剂的测定 1、马赖酸乙那普利中残留溶剂乙腈的检查－ capillary GC法≤0.041％ 样品溶液的制备：本品加二甲基甲酰胺溶解100mg/ml 对照溶液的制备：取乙腈加二甲基甲酰胺溶解40μg/ml 分析方法：PEG-20M为固定液的毛细管柱，FID检测器，程序升温洗脱： Injection tem.: 200℃,detector tem.:250℃, injection volume: 1μl

113 2、盐酸喹那普利中丙酮、乙腈、二氯甲烷、甲苯的检-GC法 色谱系统适用性试验 测定 结果计算：
制备标准溶液所取某溶剂的重量 供试品溶液的色谱峰面积 标准溶液色谱峰面积 乙腈和丙酮≤0.25％ 二氯甲烷≤0.1％ 供试品量

114 四、含量测定 一、酸碱滴定法：利用本类药物结构中的-COOH和氮原子氨基，可进行酸碱滴定法进行含量分析 1、非水滴定法
马赖酸依那普利－非水碱量法滴定，以冰醋酸和无水二氧六环为溶剂，结晶紫为指示剂，高氯酸为滴定液

115 2、水溶液中的滴定 马赖酸依那普利：供试品→新沸过的冷水溶解→NaOH滴定→电位法指示终点 3、在醇水混合溶液中滴定 供试品→甲醇和水溶解后进行碱液滴定（雷米普利和西拉普利）

116 二、HPLC法 举例说明：马赖酸依那普利片的含量测定 色谱条件：C8柱，乙腈和磷酸盐缓冲液为流动相，检测波长215 nm，柱温50℃
色谱系统适用性：n≥300，T≤2.0,主峰与其它杂质峰的R>4.0 进样与计算：20 μl，外标法定量

117 盐酸喹那普利的含量测定 色谱条件：CN柱＋guard column (3 cm ×4.6 mm, 5 μm)，乙腈－水－甲磺酸为流动相，流速1.5 ml/min，检测波长214 nm 色谱系统适用性：主峰与A的R≥1.75，主峰与B的R≥3.5，n≥550，RSD≤2.0% (n=5)

118 三、体内药物分析

119 Mass spectra were obtained using a Finnigan TSQ Quantum
discovery mass spectrometer (USA) and operating fitted with the electrospray ionization (ESI) condition. The positiveion selected reaction monitoring (SRM) mode was chosen for the quantification. The electrospray voltage was fixed at 3500 eV and the HPLC fluid was nebulized using N2 and capillary temperature was 300 ◦C. The sheath and auxiliary gas pressure were 35 and 10 eV, respectively. The peak areas of the LC–MS/MS transition from m/z [M+H]+ ion, to a product ion at m/z 234.3 by SRM with collision energy of 28 eV was measured for ramipril. Ramiprilat and the internal standard were monitored using the transitions from m/z 389.3→m/z 206.2, and m/z →m/z 234.2, respectively. The data acquisition was ascertained by Xcalibur software.

120

121

122 练习与思考 [A型题] 1．盐酸普鲁卡因注射液中检查的特殊杂质是 A.水杨醛 B. 间氨基酚 C.水杨酸 D.对氨基苯甲酸 E. 氨基酚
2．对乙酰氨基酚中检查的特殊杂质是 A.水杨醛 B. 间氨基酚 C. 对氨基酚 D.苯甲酸 E.苯酚 3．肾上腺素和盐酸去氧肾上腺素中检查的特殊杂质是 D.酮体 E. 苯甲酸

123 [B型题] A。硫酸铜反应 B.氧化反应 C. 还原反应 D.水解后重氮化-偶合反应 E. 重氮化-偶合反应 1. 盐酸利多卡因
2. 肾上腺素 3. 盐酸普鲁卡因 4．对乙酰氨基酚 A B E D

124 A。溴量法 B. 紫外分光光度法 C. 亚硝酸钠滴定法 D. RP-HPLC法 E. 非水滴定法 5. 盐酸去氧肾上腺素 6

125 [X型题] 1. 直接能与FeCl3产生颜色反应的药物有 A。盐酸普鲁卡因 B. 盐酸去氧肾上腺素 C. 对乙酰氨基酚 D. 盐酸利多卡因
2. 直接和水解后能发生重氮化-偶合反应的药物有 A。盐酸丁卡因 B. 盐酸普鲁卡因 C. 对乙酰氨基酚 D. 对氨基酚 E. 盐酸肾上腺素 返 回

126 简答题： 1、简述亚硝酸钠法的滴定原理和应注意的实验条件？ 2、简述氨基苯甲酸类药物的基本理化性质和鉴别法？