The construction of cells

Presentation on theme: "The construction of cells"— Presentation transcript:

1 The construction of cells
06.1 The construction of cells DNA or RNA Protein Carbohydrates Lipid etc.

2

3

4

5

6

7

8

9 Isoelectric point of protein
pH < pI Protein is positive charge. pH > pI Protein is negative charge.

10

11 Amino Acid Sequences of Cytochromes c from 38 species

12 A phylogenetic tree of cytochrome c

13 Bioprocess Engineering
04.1 養菌&bioreactor Bioprocess Engineering 基因重組﹝PCR, host selection﹞ 或微生物篩選﹝plasmid selection﹞ Lab. 生產 工廠生產 前處理﹝殺菌等﹞ 生化反應器 破碎細胞 分離及純化 Recombinant protein metabolites 細胞固定化﹝酵素固定化﹞

14 蛋白質的沈澱作用 能使蛋白質發生沈澱作用的因素有： 酸 酸性試劑 單寧酸 重金屬離子（汞離子、鉛離子等） 咖啡因 嗎啡 中性鹽 有機溶媒 熱
06.2 蛋白質的沈澱作用 能使蛋白質發生沈澱作用的因素有： 酸 酸性試劑 單寧酸 重金屬離子（汞離子、鉛離子等） 咖啡因 嗎啡 中性鹽 有機溶媒 熱

15 ﹝五﹞蛋白質純化 Salting out﹝鹽析﹞ Ammonium sulfate

16

17

18

19

20

21 ﹝五﹞蛋白質純化 等電點沉澱

22 蛋白質的溶解度 pH值：當pH值在其等電點（pI）時，溶解度最小。
鹽濃度：當在低濃度時，蛋白質的溶解度隨著鹽濃度的增加而增加，稱為Salting-in。當鹽濃度高至某一濃度時，蛋白質的溶解度隨著鹽濃度的增加而減少，稱為Salting-out。 溶媒的介電常數（Dielectric contant）：酒精、丙酮的常數較水小，使蛋白質分子在此溶媒中的斥力較小，溶解度較低。 4. 溫度：在一限定的溫度（約0~40℃）下，大部份的蛋白質溶解度隨溫度的上升而增加。

23 Ion exchange chromatography
R+A- + B R+B- + A-

24 Gel filtration chromatography

25 Gel filtration chromatography
V0：void volume Ve：elution volume

26 Affinity chromatography

27 fusion protein: 6-histidine tag 27

28 Dialysis Cellophane nitrocellulose collodion