基 因 工 程 （一轮复习） 佛山市第一中学　黄广慧.

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1 基 因 工 程 （一轮复习） 佛山市第一中学　黄广慧

2 传统育种方法 杂交育种 单倍体育种 多倍体育种 诱变育种

3 A.杂交育种 B.单倍体育种 C.多倍体育种 D.诱变育种 由普通青霉菌培育出高产青霉素的菌种
由高产易病和低产抗病的水稻培育出高产抗病的品种 C.多倍体育种 D.诱变育种 由普通西瓜培育出无子西瓜

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6 合成蓝色素的酶基因（B）

7 基因工程的优势— 突破种间的生殖隔离， 实现种间的基因重组， 定向改造生物性状。

8 基 因 工 程 _________的获取 “剪刀” _________ 构建___________ 基本工具 操作程序 植物 “针线”
①人工合成 ②从__________中获取 ③用_____技术扩增 方 法 目的基因 _________的获取 基因文库 PCR ①目的基因 ②________ ③________ ④终 止 子 “剪刀” _________ 元 件 标记基因 构建___________ 基因表达载体 限制性核 酸内切酶 启动子 基 因 工 程 ①__________法 ② 基 因 枪 法 ③花粉管通道法 农杆菌转化 基本工具 操作程序 方 法 植物 “针线” _________ 将目的基因 导入______ 类 型 DNA连接酶 受体细胞 方 法 动物 __________技术 显微注射 方 法 微生物 基因表达载体与______细胞混合 感受态 “运输车” _________ 目的基因的 检测和鉴定 层次 检测目标 鉴定方法 分子水平 是否导入 是否转录 是否翻译 个体水平 是否具有 目标性状 质粒、 病毒… DNA分子杂交法 RNA-DNA杂交法 抗原-抗体杂交法 接种实验

9 基因工程的基本工具

10 1.基因“剪刀”—— 限制性核酸内切酶

11 限制性 核酸 内切 酶 DNA ------C C C ------G G G ------G ------C T T A A
EcoRⅠ的识别序列和切割位点 SmaⅠ的识别序列和切割位点 ------C C C ------G G G ------G ------C T T A A A A T T C------ G------ G G G------ C C C------ 限制性 核酸 内切 酶 DNA 外切

12 2.基因“运输车”—— 质粒 噬菌体 动植物病毒 ……

13 拟核DNA 细菌 质粒 限制酶识别序列 抗生素抗性基因 （标记基因） 复制原点

14 ------G ------CTTAA AATTC G G CTTAA AATTC------ G------

15 3.基因“针线”—— DNA连接酶

16 ② ① ② 磷酸二酯键 ② 磷酸二酯键 限制酶切割的部位是〔 〕____________？
G A T C ① 限制酶切割的部位是〔 〕____________？ DNA连接酶连接的部位是〔 〕____________ ？ ② 磷酸二酯键 ② 磷酸二酯键

17 矮牵牛的B基因 白玫瑰 蓝玫瑰

18 ① ③ ② ④ ⑤ ⑧ ⑥ 矮牵牛含B基因 的染色体DNA PCR 质粒 EcoR Hind EcoR 含B基因的 DNA片段 （B基因）
酶切 Pst Sma ② 酶切 ④ 连接 重组 质粒 ⑤ 玫瑰 ⑥ ⑧ ⑦将目的基因 插入Ti质粒 大肠杆菌 筛选，扩增 细菌X

19 ①②③④⑤⑥⑦⑧ 目的基因的检测和鉴定 获取目的基因 构建基因表达载体 将目的基因导入受体细胞

20 1. 选择质粒 质 粒 M N 〔注〕amp：青霉素抗性基因 tet：四环素抗性基因

21 2. 选择限制酶 Hind EcoR Pst Sma AAGCTT TTCGAA GAATTC CTTAAG CTGCAG GACGTC
识别序列 切割位点 AAGCTT TTCGAA GAATTC CTTAAG CTGCAG GACGTC CCCGGG GGGCCC

22 3. 选择DNA连接酶 Pst Sma CTGCAG GACGTC CCCGGG GGGCCC 编号 类型 连接的末端类型 ①
E·coli DNA连接酶 黏性末端 ② T4 DNA连接酶 黏性末端 & 平末端

23 4. 选择抗生素 tet 抗生素 青霉素 四环素 〔注〕amp：青霉素抗性基因 tet：四环素抗性基因

24 下图四种质粒含有E1和E2两种限制酶的识别位点，Ap表示抗青霉素的抗性基因，Tc表示抗四环素的抗性基因。
（1）将两端用E1切开的Tc基因与用E1切开的质粒A混合连接， 连接后获得的质粒类型有＿＿＿＿（A、B、C、D）。 （2）若将上图所示A、B、C、D四种质粒导入大肠杆菌，然后 分别涂布在含有青霉素或四环素的两种培养基上。在这 两种培养上均不能生长的大肠杆菌细胞类型是＿＿＿。

25 ① ③ ② ④ ⑤ ⑧ ⑥ 矮牵牛含B基因 的染色体DNA PCR 质粒 EcoR Hind EcoR 含B基因的 DNA片段 （B基因）
酶切 Pst Sma ② 酶切 ④ 连接 重组 质粒 ⑤ 玫瑰 ⑥ ⑧ ⑦将目的基因 插入Ti质粒 大肠杆菌 筛选，扩增 细菌X

26 Thank you.