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酵素产品酶活性的检测方法 齐鲁工业大学 生物工程学院 岳秋林 博士
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主要内容 酶催化反应原理 酵素产品部分酶活性的检测
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一、酶催化反应原理
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把催化反应转化成可测量的模式 Juang RH (2005) EPA
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测量酶催化活性应注意的事项 酶活性的检测通常是指催化活性的检测，建立活性检测步骤时，应注意：
1.测定生成物的产生量比测定反应物的消失量更方便，且灵敏。 2.复杂的反应，可能生成意外的生成物（或pH改变），回馈抑制酶反应。 3.反应条件应有利于指定反应方向的进行，可以移除生成物，或接上耦合反应。
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二、酶活性的检测方法 直接测定生成物 光谱学检测法 HPLC检测法 耦合反应法 （可耦合脱氢酶反应） 化学测定法 电极检测法
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酶活性检测的具体方法 （一） 光谱学检测法 生成物有特定的紫外或荧光吸收
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木聚糖酶、纤维素酶活性检测： 木聚糖酶 木聚糖 DNS 还原糖 显色反应 比色法 纤维素酶 羧甲基纤维素
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蔗糖转化酶的活性检测： 光谱学检测
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蛋白酶活性的检测： BBA - Proteins and Proteomics, 1864 (1), 2016,
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酶活性的检测方法 （二） HPLC检测法
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植酸酶的活性检测方法： （植酸酶催化的脱磷酸反应的探针）
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Soil Biology & Biochemistry 41 (2009) 192-200
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酶活性的检测方法 （三） 化学测定法 如果生成物不具有光谱学特性，可以通过化学反应使之转化成具有特定光谱吸收的物质，进而进行测定。
葡萄糖醛酸酶(GUS)
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酶活性的检测方法 （四） 电极检测法
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淀粉酶的活性检测 Biosensors and Bioelectronics 20 (2004)
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酶活性的检测方法
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酶活性的检测方法 （五） 耦合反应法（可耦合脱氢酶反应） 脱氢酶以NADH/NADPH为辅酶
NADH/NADPH的转换可耦合340nm吸光度变化：
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酶活性的检测方法 葡萄糖激酶的活性检测：
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