黄酮类化合物 (flavanoids).

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1 黄酮类化合物 (flavanoids)

2 取代基：-OH，OCH3，CH3，异戊烯基，糖
第一节 概述 一、黄酮类化合物的定义及编号 两个取代芳香环通过中央三碳链连接而成的一系列化合物 取代基：-OH，OCH3，CH3，异戊烯基，糖

3 二、黄酮类化合物生物合成的基本途径 醋酸-丙二酸—莽草酸复合途径

4 三、黄酮类化合物的分类 依据：中央三碳链的氧化程度、B-环连接位置(2-位或3-位)、以及三碳链是否成环 分类：

5 三、黄酮类化合物的分类 依据：中央三碳链的氧化程度、B-环连接位置(2-位或3-位)、以及三碳链是否成环 分类：

6 四、黄酮苷类化合物 分类：氧苷（3-位黄酮醇苷，芳环羟基苷）、 碳苷 单糖苷、双糖苷 单糖链苷、双糖链苷

7 五、各类黄酮类化合物的生物合成关系

8 六、黄酮类化合物的生物活性 对心血管系统的作用 银杏黄酮 抗肝脏毒作用 抗炎作用 芦丁、二氢槲皮素等

9 六、黄酮类化合物的生物活性 雌性激素样作用 抗菌及抗病毒作用 黄芩苷、木犀草素等 止咳、祛痰、平喘作用

10 六、黄酮类化合物的生物活性 抗氧化作用 抗癌作用

11 第二节 黄酮类化合物的理化性质及显色反应 一、性状 二、溶解性 固体，具旋光(二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷醇、黄酮苷) 黄色、淡黄色、无色
第二节 黄酮类化合物的理化性质及显色反应 一、性状 固体，具旋光(二氢黄酮、二氢黄酮醇、黄烷醇、黄酮苷) 黄色、淡黄色、无色 二、溶解性 苷元：脂溶性(甲醇、乙醇、乙酸乙酯、乙醚、稀碱水等) 水溶性：1. 黄酮、黄酮醇、查耳酮等(平面) < 二氢黄酮、二氢黄酮醇(非平面) 2. 羟基取代黄酮类 > 甲氧基取代黄酮类 黄酮苷：水、甲醇、乙醇

12 三、酸碱性 四、显色反应 酸性：酚羟基 与碱作用而溶于水中（用于提取） 碱性：1-位氧原子 与强酸成盐，表现出特殊颜色（用于鉴别）
1、还原试验 盐酸-镁粉(锌粉)反应：试样乙醇液+镁粉+浓盐酸（橙-紫-蓝） NaBH4还原反应：试样乙醇液+2%NaBH4+浓酸（紫红） 鉴别二氢黄酮

13 四、显色反应 2、金属盐络合反应： AlCl3、Pb(OAc)2、 Mg(OAc)2 3、硼酸显色反应：5-羟基黄酮 或 2’-羟基查耳酮
4、碱性试剂：氨气、Na2CO3 二氢黄酮→查耳酮，亮黄色 黄酮醇→黄色→通空气后棕色 多羟基黄酮→氧化（深红色）

14 第三节 黄酮类化合物的提取与分离 一、提取 苷元：乙酸乙酯、乙醚、氯仿、乙醇、甲醇等有机溶剂 黄酮苷：丙酮、乙酸乙酯、乙醇、水或混合溶剂
第三节 黄酮类化合物的提取与分离 一、提取 苷元：乙酸乙酯、乙醚、氯仿、乙醇、甲醇等有机溶剂 黄酮苷：丙酮、乙酸乙酯、乙醇、水或混合溶剂 注意：水解酶的灭活(提取黄酮苷) 1.植物冷冻处理 2.植物干燥 2.热水提取 3.有机溶剂提取

15 第三节 黄酮类化合物的提取与分离 二、粗提物的精制（除叶绿素、多糖、蛋白质） 1、溶剂萃取法 石油醚脱酯 醇沉除多糖及蛋白 2、碱提酸沉法
第三节 黄酮类化合物的提取与分离 二、粗提物的精制（除叶绿素、多糖、蛋白质） 1、溶剂萃取法 石油醚脱酯 醇沉除多糖及蛋白 2、碱提酸沉法 黄酮苷类碱水提取、酸化后沉淀 注意：碱性过强——破坏黄酮母核 酸性过强——生成氧盐而溶解 3、大孔树脂吸附法 黄酮苷水溶液大孔树脂吸附——水洗杂质——乙醇解吸

16 第三节 黄酮类化合物的提取与分离 三、黄酮类化合物的分离纯化 1、柱色谱法 薄层色谱确定分离条件：固定相及流动相 要求：样品不拖尾
第三节 黄酮类化合物的提取与分离 三、黄酮类化合物的分离纯化 1、柱色谱法 薄层色谱确定分离条件：固定相及流动相 要求：样品不拖尾 Rf值适中

17 第三节 黄酮类化合物的提取与分离 三、黄酮类化合物的分离纯化 1、柱色谱法 (1)硅胶柱色谱： 脂溶性黄酮类：硅胶吸附层析
第三节 黄酮类化合物的提取与分离 三、黄酮类化合物的分离纯化 1、柱色谱法 (1)硅胶柱色谱： 脂溶性黄酮类：硅胶吸附层析 展开剂：乙酸乙酯-石油醚；氯仿-甲醇 多羟基黄酮苷元及黄酮苷：硅胶分配层析 展开剂：氯仿-甲醇-水

18 第三节 黄酮类化合物的提取与分离 三、黄酮类化合物的分离纯化 1、柱色谱法 (2)聚酰胺柱色谱：适于分离黄酮类化合物
第三节 黄酮类化合物的提取与分离 三、黄酮类化合物的分离纯化 1、柱色谱法 (2)聚酰胺柱色谱：适于分离黄酮类化合物 洗脱规律：a羟基多，吸附强，后洗出 b由先至后：异黄酮>二氢黄酮醇>黄酮>黄酮醇 C芳核及共轭双键多易吸附 优点：不脱尾，不可逆吸附鞣质 缺点：弱碱性，破坏黄酮 类化合物母核或使其聚合 聚酰胺的再生：5%NaOH

19 第三节 黄酮类化合物的提取与分离 三、黄酮类化合物的分离纯化 1、柱色谱法
第三节 黄酮类化合物的提取与分离 三、黄酮类化合物的分离纯化 1、柱色谱法 (3)葡聚糖凝胶柱色谱：Sephadex-G 及 Sephadex-LH20(羟丙基葡聚糖凝胶，-OH OCH2CH2CH2OH） Sephadex-G: 排阻色谱，分子量大先流出 Sephadex-LH20：排阻及吸附色谱 分离游离黄酮，吸附作用主导(酚羟基多，吸附强) 分离黄酮苷分子筛作用主导 洗脱剂：甲醇-水

20 第三节 黄酮类化合物的提取与分离 三、黄酮类化合物的分离纯化 2、梯度pH萃取法—分离酸性强弱不同的苷元（酚羟基数目及位置的不同）
第三节 黄酮类化合物的提取与分离 三、黄酮类化合物的分离纯化 2、梯度pH萃取法—分离酸性强弱不同的苷元（酚羟基数目及位置的不同） 提取物溶于有机溶剂后分别用5％NaHCO3、5%Na2CO3、0.2%NaOH、4%NaOH萃取 酸性: 7，4’-OH > 7或4’-OH > 一般酚羟基 > 5-OH 溶于NaHCO 溶于Na2CO 溶于不同浓度NaOH

21 第三节 黄酮类化合物的提取与分离 三、黄酮类化合物的分离纯化 3、铅盐沉淀法： 具邻二酚结构：醋酸铅沉淀 不具邻二酚结构：碱式醋酸铅沉淀
第三节 黄酮类化合物的提取与分离 三、黄酮类化合物的分离纯化 3、铅盐沉淀法： 具邻二酚结构：醋酸铅沉淀 不具邻二酚结构：碱式醋酸铅沉淀 铅盐沉淀的后处理：硫酸盐或磷酸盐；阳离子交换树脂脱铅 4、硼酸络合法 具邻二酚结构：与硼酸的络合物可溶于水中 5、高效液相色谱法 用于较难分开的黄酮类化合物

22 第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 一、色谱法在黄酮类化合物鉴定中的应用 薄层色谱：两个展开体系中，样品与对照品Rf值及颜色相同
第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 一、色谱法在黄酮类化合物鉴定中的应用 薄层色谱：两个展开体系中，样品与对照品Rf值及颜色相同 高效液相色谱：保留时间及紫外光谱相同 二、紫外及可见光谱

23 第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 三、1H NMR的应用 (一）A环质子 (1)、5，7-二羟基黄酮类化合物
第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 三、1H NMR的应用 (一）A环质子 (1)、5，7-二羟基黄酮类化合物 H-6 : 二重峰; H-8 : 二重峰 J值2.5左右 H-6比H-8高场

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25 第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 三、1H NMR的应用 (一）A环质子 2、7-羟基黄酮类化合物
第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 三、1H NMR的应用 (一）A环质子 2、7-羟基黄酮类化合物 H-5：d, J = 9.0Hz δ8.0 H-6：dd, J = 2.5, 9.0Hz, δ H-8：d，J = 2.5Hz, δ

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27 第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 三、1H NMR的应用 (二）B环质子 1、4’-氧取代黄酮类化合物
第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 三、1H NMR的应用 (二）B环质子 1、4’-氧取代黄酮类化合物 H-2’（H-6’）：d, J = 8.5Hz, δ H-3’（H-5’）：d, J = 8.5Hz, δ

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29 第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 三、1H NMR的应用 (二）B环质子 2、3’,4’-二氧取代黄酮类化合物
第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 三、1H NMR的应用 (二）B环质子 2、3’,4’-二氧取代黄酮类化合物 H-2’：d, J = 2.5Hz, δ H-5’：d, J = 8.5Hz, δ H-6’：dd, J = 2.5, 8.5Hz, δ

30 第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 三、1H NMR的应用 (二）B环质子 3、3’,4’,5’-三氧取代黄酮类化合物
第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 三、1H NMR的应用 (二）B环质子 3、3’,4’,5’-三氧取代黄酮类化合物 R = H, H-2’(H-6’)：s, δ R3’= OCH3 or R5’= OCH3：H2’：d, J = 2.0Hz H6’：d, J = 2.0Hz

31 第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 三、1H NMR的应用 (三）C环质子 1、黄酮类 H-3：s, δ6.30 2、异黄酮类
第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 三、1H NMR的应用 (三）C环质子 1、黄酮类 H-3：s, δ6.30 2、异黄酮类 H-2：s, δ

32 第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 (三）C环质子 3、二氢黄酮类 H-2：dd, J = 5.0, 11.0Hz, δ5.2
第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 (三）C环质子 3、二氢黄酮类 H-2：dd, J = 5.0, 11.0Hz, δ5.2 H-3：dd, J = 5.0, 17.0Hz, δ2.8 dd, J = 11.0, 17.0Hz, δ2.8 4、二氢黄酮醇类 H-2：d, J = 11Hz, δ4.9 H-3：d, J = 11Hz, δ4.3 5、查耳酮类 H-α：d, J = 17Hz, δ H-β：d, J = 17Hz, δ

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34 第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 (四)、糖上的质子 端基碳上质子：δ4.0-6.0
第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 (四)、糖上的质子 端基碳上质子：δ 其它碳上质子： δ ，鼠李糖上甲基δ 化合物 糖上H-1’’ 黄酮醇-3-O-葡萄糖苷 黄酮类-7(or 4’ or 5)-O-葡萄糖苷 黄酮类6(or 8)-C-糖苷 二氢黄酮醇-3-O-葡萄糖苷 黄酮醇-3-O-鼠李糖苷 二氢黄酮醇-3-O-鼠李糖苷 5.7－6.0 4.8－5.2 4.1－4.3 5.0－5.1 4.0－4.2

35 第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 三、1H NMR的应用 (五)、6-及8-位碳上的甲基
第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 三、1H NMR的应用 (五)、6-及8-位碳上的甲基 6-CH3比8-CH3高场约0.2ppm，处于 ppm (六)、乙酰氧基质子 黄酮类化合物乙酰化后测氢谱，用以判断糖及酚羟基的数目

36 第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 三、1H NMR的应用 四、13C NMR的应用 (七)、甲氧基上的质子 1、确定分子中C的个数
第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 三、1H NMR的应用 (七)、甲氧基上的质子 四、13C NMR的应用 1、确定分子中C的个数 2、确定分子中C的种类 2、确定分黄酮苷中糖的种类及连接位置

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40 第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 五、质谱 EI-MS: 电子轰击法质谱，样品需要气化，多得到碎片峰
第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 五、质谱 EI-MS: 电子轰击法质谱，样品需要气化，多得到碎片峰 H2O(18); CO(28); CH3(15); CH3O(31); CH3CH2(29) FAB-MS：快速原子轰击电离质谱，直接电离，分子离子峰较强 ESI-MS：电喷雾电离质谱，分级电离 例：黄酮苷类化合物的分析 芦丁（3-芸香糖[葡萄糖-鼠李糖]槲皮素 ）

41 第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 六、黄酮类化合物构型的确定 （一）圆二色谱法 方法：用立体结构相似化合物的谱图与未知化合物的谱图对比
第四节 黄酮类化合物的检识与鉴定 六、黄酮类化合物构型的确定 （一）圆二色谱法 方法：用立体结构相似化合物的谱图与未知化合物的谱图对比 例：二氢槲皮素 （二）X-射线单晶衍射法