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蛋白质等电点的应用 化学系化学专业2班 罗佳
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蛋白质等电点的应用 等电点 等电点时蛋白质的特殊性质 主要应用 等电点沉淀与分离 电泳分离 等电聚焦电泳 目前研究应用情况 等电点的测定
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等电点 以氨基乙酸为例,离解平衡为: 氨基乙酸 Ka1 双极离子 Ka2 氨基乙酸 阳离子 pI=1/2(pKa1+pKa2) 阴离子
当氨基酸的各种带电离子所带正电荷数与负电荷数相等时,此时溶液的pH就是这种氨基酸的等电点(pI). 蛋白质是由氨基酸组成的,除了有末端-NH3+和末端-COO-外,参与其组成的氨基酸残基侧链上还有酸、碱性基团,因此蛋白质是两性物质,也有等电点.
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原因:在等电点时,蛋白质分子以双极离子存在,总净电荷为零,颗粒无电荷间的排斥作用,易凝集成大颗粒,因而最不稳定,溶解度最小,易沉淀析出。
等电点时蛋白质的特殊性质 电泳分离 pH<pI pH>pI 阳 极 阴 极 pH=pI 带正电荷 净电荷为零 带负电荷 导电率 渗透压 溶解度 粘度 …… 沉淀分离 达到最低 原因:在等电点时,蛋白质分子以双极离子存在,总净电荷为零,颗粒无电荷间的排斥作用,易凝集成大颗粒,因而最不稳定,溶解度最小,易沉淀析出。
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等电点的测定 影响蛋白质等电点的因素有很多
从理论上讲,一种蛋白质只有一个等电点 ,但等电点测定结果受实验方法和条件 (溶剂性质、离子强度等)影响较大, 一种蛋白质也可能具有多个等电点。 在《抗HBsAg 单链抗体的等电点测定和结构模拟》这篇文章中,作者指出:“很多学者发现,经过各种色谱均证实为纯品的重组蛋白在等电聚焦时表现为多条带,这种现象的出现可能与蛋白质空间构象的差异有关.” 影响蛋白质等电点的因素有很多 熊盛,王一飞,钱垂文,罗勇,陈文吟,饶桂荣,粟宽源,余宙耀,抗HBsAg 单链抗体的等电点测定和结构模拟,华南理工大学学报( 自然科学版),第31 卷第11 期,73-76,
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