细胞系的生命期.

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1 细胞系的生命期

2 原代培养 Primary culture

3 原代培养 Primary culture 概念 从体内取出组织细胞开始培养到 第一次进行传代之前的时期，一个特征性的必然的生长阶段。
完成了从体内环境到体外环境的过渡和适应过程，恢复了分裂增殖与生长发育 的能力

4 含义:包含 ①原代培养实质是初次培养，即培养物接种到培养器皿 中就不再分割，任其生长繁殖 ②原代培养中的“代” 并不是指细胞繁殖的“代”数 ③原代培养过程中不分割培养物 不等于不更换培养液
建立方法: 组织块法,分散(细胞悬液）法 时间: 一般1~4周

5 特点 (1)性质 ①性状似体内 可表达某些形态、结构、功能,更能 代表活体细胞最接近在体时的情况 ②细胞异质性 细胞成分混杂，除目的细胞之外， 其它各种细胞还存在 ③细胞活跃移动，分裂不旺盛 ④相互依赖性强 独立生存能力差,不易单个培养

6 特点 (2)发展过程:调整组成 原代培养的产生- -选择 结果:形成相对均一的细胞系 选择第一步:形成原代培养的基础 组织块:能迁移出的 消化分散:操作中能生存、附着 能悬浮生存

7 特点-发展过程 选择第二步: 时间：数小时后至铺满 (汇合confluence) 变化：数小时后至进一步选择中 种情况:能增殖 能存活 不能存活 细胞类型,继续改变,至铺满

8 特点-发展过程 选择第三步: 时间：铺满后 (可用于生长区域已被利用) 变化：通过密度抑制 密度依赖性敏感的细胞(如正常细胞) 密度依赖性敏感低的细胞(如永生性细胞)---

9 特点-发展过程 需及时传代 传不传代及何时传代 根据： 接种的细胞数量 培养瓶皿的大小 培养条件 在一定程度上具有可人为操作的特征

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11 传代期- -细胞系 Subculture - - Cell line

12 传代期- -细胞系 Cell line 概述 将原代培养物经过分割，重新接种 到两个或两个以上 的器皿内进行培养， 进入传代培养期 整个培养过程的主要时期 原代培养物 要经过反复传代 传代培养期 并不单指原代培养物经首次传代后 的“第一代”培养过程 而是指由首次传代开始经 反复传代一直到培养物 开始衰退之前的全部时间

13 经过传代即称为细胞系 细胞系可以继续传代 传代培养期就是 维持细胞系增殖、生长的培养过程 传代培养期的长短： 培养的细胞种类 供体年龄大小 一般是有限细胞系

14 特点 细胞分裂增殖活动旺盛，细胞生长活跃 细胞群体在调整：每次传代,调整 因增殖能力、耐受力差异 原本成分混杂的培养物中， 增殖能力较强的细胞渐处于优势 其它逐渐淘汰 传代培养早期，细胞尚能保持二倍体核型 随着传代次数增加 细胞发生转化的概率增大

15 能维持的代数 一般是有限细胞系 种族(主要):成纤维细胞 人,50; 猴,40; 鸡,37;鼠, 部位:人: 胚肺 50±10; 肾8~ 猴: 肺 5; 肾 20; 耳 40 条件:如表皮细胞 +EGF 从50代 增加至150 年龄

16 传代的频率 原则上 贴壁生长将长满培养罪皿的生长面(器皿的底壁) 悬浮培养下细胞密度足够大 具体时间并没有定时， 根据 具体情况，但提前或过晚 (尤以后者)都不合适 一般:数天~ 一周 因素: 接种细胞数量:量大- 快 接种细胞性质:细胞系比原代- 快 培养液:高血清- 快

17 意义 生物学意义:形成较均一的细胞 实际意义: 优点:可传代,有特征,数目多,均一性, 可冻存 缺点:遗传学可改变,失去分化

18 衰退期Senescence phase

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20 衰退期 Senescence phase 概述 仍生存,但基本不增殖- - -衰退,死亡 传代培养到一定的代数时， 细胞的生命活动明显减弱。 细胞虽然生存，但生长缓慢、 很少分裂增殖甚或不再分裂， 即使及时换液也无效 表明培养物已经进入衰退期， 再向前发展，只有退化、死亡

21 特点: 细胞系的生命期--归宿 有限细胞系: 一般 衰退、死亡 转化:永生化: 连续细胞系 自发性转化 诱导转化

22 自发性转化:偶而,个别通过危机- -转化 培养的细胞，由于尚不明确的原因 使培养的细胞发生自发的转化 转化细胞的性状可传递给予代细胞 来源细胞:2种可能 转化因素:种族来源 正常细胞:人 0; 鸡 0; 鼠较易 9/11 诱导转化 诱导因素:化学、幅射、病毒等

23 诱发培养细胞的转化因素 凡能改变DNA (基因)结构的因素 都可能成为诱发细胞转化因素。如 ①化学因素：如MNNG（甲基硝基亚硝基胍） ②物理因素：射线，包括放射性核素等. ③病毒: SV40,逆转录病毒等. ④癌基因: 大多癌基团均有使细胞发生转化的 能力, 但癌基因的转 化必须借助载体和转导辅助因素 如诱发细细发生恶性转化,单个癌基因尚不足(如ras癌基因等), 常 需一两个以上才能产生这种效应

24 衰退期不同于每一代培养细胞的停滞期 处于衰退期的细胞以任何方法都不能阻 止 其向死亡方向发展。 可见细胞轮廓增强，细胞质内出现暗的颗粒样结构及空泡状结构胞质 突起回缩,有时可脱落