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第五章 精液检查.

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1 第五章 精液检查

2 学习目标 1. 熟悉精液检查的目的和标本送检的 注意事项 2. 学会精液一般性状检验的方法 3. 能进行精液显微镜检验
4. 掌握精液正常参考值及临床意义 返 回

3 精液检查 一、标本收集和送检 二、一般性状检查 三、显微镜检查 四、精子功能检查 五、计算机辅助精子分析 六、练习题 返 回

4 概 述 精液主要由精子和精浆两部分组成 精子是男性的生殖细胞,约占精液的5% 精浆是运送精子的载体,约占精液的95% 返 回

5 概 述 精浆是由精囊液、前列腺液、尿道球腺及尿道旁腺等多种腺体分泌的混合液体。
概 述 精浆是由精囊液、前列腺液、尿道球腺及尿道旁腺等多种腺体分泌的混合液体。 精囊液中含有大量维持精子生命活动的物质,其中果糖为精子提供营养及活动能量, 凝固酶可维持精液的粘稠度。 前列腺液为弱碱性乳白色液体,含多种营养物质,其中纤溶酶(液化因子)可使精液在短时间内液化为稀薄的液体,有利于精子运动。 返 回

6 精液检验的目的 ①评估男性生育功能,为不育症的诊断和疗效观察提供依据; ②协助诊断男性生殖系统疾病; ③输精管结扎术后疗效观察;
④计划生育科研; ⑤为体外受精和精子库筛选优质精子; ⑥法医学鉴定。 返 回

7 精液标本送检的注意事项: ①采样前禁欲3~5天; ②采样后立即送检; ③送检时间不超过1h; ④传送时注意保温;
⑤精液标本按照潜在生物危害物质处理。 返 回

8 精液检查项目 精液常规检查(简便实用的传统项目) 精子功能检查 精浆生化分析 免疫学检查 微生物学检查 遗传基因检查
计算机辅助精子分析系统。 (其他检验项目目前多只在专门的男性实验室中进行) 返 回

9 精液检查项目 { 一般性状检查 精液常规检验的内容包括 显微镜检查 一般性状检查主要包括精液外观、量、粘稠度、液化时间、酸碱度;
显微镜检查主要有精子活率、精子活动力、精子计数、精子形态观察、精液细胞学检查等。 显微镜检查 返 回

10 精液一般性状检查 (一)精液外观 正常人刚排出的精液呈胶冻状有高度的粘稠性;外观呈灰白色或乳白色不透明的液体;自行液化后为较稀薄的半透明乳白色;久未排精者可略带灰黄色。 血性精液见于生殖系统急性炎症、结核、肿瘤等。 脓性精液见于精囊炎或前列腺炎时。 返 回

11 精液一般性状检查 (二)精液量 将液化的精液用小量筒或移液管测定全部精液量,以毫升数报告。
正常人一次排出精液约为2~5ml,精液量<1ml或>8ml,即可视为异常。 返 回

12 精液一般性状检查 精液量减少:占男性不孕症的22%。见于前列腺和精囊病变、射精管阻塞,先天性精囊缺如等。
精液量增多:占男性不育症的5%。此可因垂体前叶促性腺素的分泌功能亢进,使雄激素的水平升高所致。 返 回

13 精液一般性状检查 指排精后精液自行从胶冻状转变为流动状所需的时间。 液化时间观察标本应放在37℃,每10min观察一次。 (三)精液液化时间
返 回

14 精液一般性状检查 (三)精液液化时间 正常精液是一种均匀粘稠的液体,射精后立即凝固,5~10min后开始液化,30min完全液化。
超过60分钟不液化,视为异常;24小时不液化者,为不育原因之一,可直接报告24小时不液化。 返 回

15 精液一般性状检查 (三)精液液化时间 前列腺炎症时,因炎症破坏纤溶酶,可导致精液不液化或液化不完全,抑制精子活力,从而减少受孕机会。 返 回

16 精液一般性状检查 (四) 精液粘稠度 指完全液化后的粘度。
在精液全部液化后,可用直接玻璃棒法测定:用玻璃棒提拉粘液丝,正常粘丝长度不超过2cm。粘稠度增加时,精液悬滴可形成长于2cm的长丝。 返 回

17 精液一般性状检查 粘稠度测定可分为3级: Ⅰ级,为30min基本液化,用玻璃棒提拉精液呈细丝状粘液丝;
Ⅲ级,为24h仍不液化,无法用玻棒提拉起,粘稠度高,涂片困难。 返 回

18 精液一般性状检查 精液粘稠度增高见于前列腺炎症,常伴有不液化,可阻抑精子活动力。 粘稠度减低见于先天性无精囊腺及精子浓度太低或无精子症。
返 回

19 精液一般性状检查 (五)精液酸碱度 用精密pH试纸测定精液的pH值。正常为弱碱性,pH为7.2~8.0。
返 回

20 精液一般性状检查 返 回

21 精液显微镜检查 (一)精子存活率 (二)精子活动力 (三)精子计数 (四)精子形态观察 (五)精液细胞检查 返 回

22 精液显微镜检查 方法: 待精液完全液化、充分混匀后,取适量标本涂于载玻片上,直接湿片观察。 通常先在低倍镜下粗略观察有无精子。
如果镜下未见精子,应将全部精液离心,取管底沉淀物再涂片观察,如仍无精子,则报告“查无精子”,可判定为无精子症,不必继续镜检。 返 回

23 精液显微镜检查 直接涂片观察有无精子,可判断输精管结扎术是否成功,一般于手术后第6周开始检查,每周1~2次,连续观察3次,查无精子则手术成功。 返 回

24 精液显微镜检查 (一)精子存活率 以活精子所占精子总数的百分率来表示。 返 回

25 精液显微镜检查 (一)精子存活率 检查方法 1.直接涂片法 -湿片法:
1.直接涂片法 -湿片法: 取液化精液一滴涂于载玻片上,高倍镜下直接观察5~10个视野, 计数活动精子百分率 返 回

26 精液显微镜检查 (一)精子存活率 检查方法 2.伊红染色法 -干片法
2.伊红染色法 -干片法 在载玻片上加新鲜精液和5g/L伊红Y染色液各1滴,混匀,30s后推成薄片高倍镜下直接观察。 活精子不着色,死精子染成红色。 (精子死亡后,细胞膜的完整性受损,失去屏障功能,易于着色) 返 回

27 精液显微镜检查 (一)精子存活率 参考值 精子活率≥75%(伊红染色法) 临床意义 主要用于男性不育症的检查 返 回

28 精液显微镜检查 (二)精子活动力 是指精子向前运动的能力。 WHO把精子活力分为a、b、c、d四级 返 回

29 精液显微镜检查 (二)精子活动力 结果判断 a级:快速向前运动 b级:慢速或呆滞的向前运动 c级:非前向运动 d级:不动 返 回

30 精液显微镜检查 方 法 (二)精子活动力 取10l标本涂片,连续观察至少5个视野,计数同一视野内各级精子数量。
(至少对200个精子进行分级) 返 回

31 精液显微镜检查 (二)精子活动力 参考值 a级精子≥25% 或a级+b级精子之和≥50% (正常精液采集后60min内) 返 回

32 精液显微镜检查 (二)精子活动力 临床意义 主要用于男性不育症的检查。 返 回

33 精液显微镜检查 (三)精子计数 是指每升精液中的精子数量,即精子浓度。 返 回

34 精液显微镜检查 (三)精子计数 原理 用碳酸氢钠破坏精液的粘稠性,以甲醛固定精子,稀释后充入计数池内计数。 返 回

35 精液显微镜检查 (三)精子计数 试 剂 精子稀释液:碳酸氢钠5g,40%甲醛溶液1ml, 蒸馏水加至100ml,待完全溶解过滤后使用。
试 剂 精子稀释液:碳酸氢钠5g,40%甲醛溶液1ml, 蒸馏水加至100ml,待完全溶解过滤后使用。 返 回

36 精液显微镜检查 (三)精子计数 操 作 1. 取精子稀释液0.38ml, 2. 加液化并充分混匀的精液20l,摇匀。
操 作 1. 取精子稀释液0.38ml, 2. 加液化并充分混匀的精液20l,摇匀。 3. 充池,静置1~2min, 4. 在高倍镜下以精子头部做为基准计数。 (计数区域一般为中央大方格内的5个中方格) 返 回

37 精液显微镜检查 (三)精子计数 计 算 精子数/L =5个中方格所数精子数×5×10×20×106/L =5个中方格内精子数×109 返 回

38 精液显微镜检查 第3版《全国临床检验操作规程》规定: 如每个中央中方格内﹥40个精子, 应计数5个中方格
每个中央中方格内10~40个精子,计数10个中方格 每个中央中方格内﹤10个精子,计数25个中方格 返 回

39 精液显微镜检查 (三)精子计数 参考值 正常精子浓度≥20×109/L 返 回

40 精液显微镜检查 (三)精子计数 临床意义 精子计数<20×109/L为精子数量减少,可影响受孕。
注意 正常人精子数变化较大,出现一次异常结果,应隔1周后复查,反复查2~3次方能得出比较正确的结果。在临床实践中少数计数偏低者,仍有生育能力,故判断一个男性的生育能力应经多次检验后,结合精液检验的其他指标综合分析。 返 回

41 精液显微镜检查 精子数量减少的原因: ①精索静脉曲张;②先天性或后天性睾丸疾病,如睾丸畸形、萎缩、结核、淋病、炎症等;③输精管或精囊缺如;④重金属损害,如铅、镉中毒或放射性损害;⑤某些药物,如抗癌药等;⑥50岁以上男性精子数逐年减少。 返 回

42 精液显微镜检查 (四)精子形态检查 方法一:直接涂片高倍镜下观察(湿片法) 方法二:瑞-姬染色法(常用的染色法)
方法三:改良巴氏染色法(男性实验室常采用) 返 回

43 精液显微镜检查 (四)精子形态检查 方法 1.瑞-姬染色法:
取液化混匀的精液1滴涂片,干燥后行瑞-姬氏 染色,油镜下观察并计数100~200个精子, 报告正常或异常精子百分率(%)。 返 回

44 精液常规检查 精液显微镜检查 精子形态 正常精子形似蝌蚪状,分头、体、尾三部分,头部呈卵圆形或梨形,体部轮廓直而规则, 尾部细长约50~60m。 返 回

45 精液显微镜检查 异常精子包括头部异常、体部异常、尾部异常及混合异常。 头部异常如大头、小头、双头、不规则头、头部边缘不齐等;
体部异常如双体、体分支、体部短小、体消失等; 返 回

46 精液显微镜检查 2.改良巴氏染色法 (四)精子形态检查
在载玻片上滴1滴精液,约5~20l制片,待干后,用95%乙醇和乙醚等量混合液固定5~15min;行改良巴氏染色,在油镜下观察100~200个精子。 返 回

47 精液显微镜检查 (四)精子形态检查 参考值 正常形态精子为82%~94% 临床意义
正常精液中异常精子应<20%,如超过20%为不正常。感染、外伤、高温、放射线、酒精中毒、药物、精索静脉曲张均可造成畸形精子数量增加。 返 回

48 精液显微镜检查 (五)精液细胞检查 1.未成熟生殖细胞 是指各阶段发育不完全的生精细胞,
包括精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞及 发育不全的精子细胞。 这些细胞的形态、大小及核的形态、大小均不规则。 返 回

49 精液显微镜检查 (五)精液细胞检查 参考值 未成熟生精细胞<1% 临床意义
正常人成熟精细胞>99%,在病理情况下,当曲细精管受损(药物或他因素),精液中可出现较多的未成熟生精细胞。 返 回

50 精液显微镜检查 返 回

51 精液显微镜检查 2.红细胞、白细胞 正常精液中可存在少量的红细胞、白细胞。精液中白细胞主要是中性粒细胞,在直接涂片镜检时易将生精细胞与白细胞混淆,可用过氧化物酶染色法加以鉴别,前者为阴性,后者为阳性。 返 回

52 精液显微镜检查 (五)精液细胞检查 参考值 正常精液中红细胞偶见、白细胞<5/HP。 临床意义
精液中红细胞、白细胞增高,可见于生殖道炎症、结核、恶性肿瘤等。 (按WHO标准,精液中白细胞>1×109/L的不育症患者称为白细胞精子症) 返 回

53 精液显微镜检查 返 回

54 精液常规检查参考值及异常情况归纳表 检查项目 参考值 异常情况 外观 精液量 液化时间 粘稠度 酸碱度 精子活率 精子活动力
(60min内) 精子计数 精子形态 红、白细胞 灰白色或乳白色 脓性或血性 2~5 ml/1次 <1ml或>8ml 30min完全液化 >60min不液化 Ⅰ级、粘丝长度<2cm Ⅱ级或Ⅲ级、粘丝长度>2cm pH值7.2~7.8 pH<7.0或pH>7.8 ≥75%(伊红染色法) <60% a级精子≥25%, 或a级+b级精子之和≥50% a级<25%; 或a级+b级精子<50% ≥20×109/L <20×109/L 正常形态精子82%~94% 异常精子>20% <5/HP >5/HP 返 回

55 四、精子功能检查 (一)体内穿透试验 在排卵期或近排卵期性交后数小时,检查宫颈口粘液活精子数量、活率及活动力,从而评价精子穿透宫颈粘液的能力。本试验标本的采集时间必须是女方排卵期或近排卵期。 【正常参考区间】 性交4~6h后,可见正常活动度精子数>25 / HPF;6~8h后,>70 / HPF。 返 回

56 四、精子功能检查 (一)体内穿透试验 【临床意义】
结果取决于精子与宫颈粘液的相互关系。其中任何一方异常均可影响实验结果。①宫颈粘液中如存在抗精子抗体或精子表面结合有抗精子抗体,精子将出现凝集现象;②精子本身若有遗传或代谢障碍、逆行射精等,精子亦不能穿透宫颈粘液;③宫颈粘液异常,如宫颈疾病(炎症、粘连、囊肿等)所致、或粘液粘滞度大、酸性粘液、脓性粘液等,均可导致本试验异常。 返 回

57 四、精子功能检查 (二)体外穿透试验 1.精子-宫颈粘液玻片穿透试验 【操作】
在一块洁净的玻片上相距约 4mm 处,分别滴排卵期宫颈粘液和液化精液 1 滴,轻轻加上盖玻片,使两液滴慢慢接触而形成交界面,然后置 37℃孵育10~15min,取出镜检。以紧邻界面的第一个高倍视野设为 Fl ,靠近 Fl 的第二视野为 F2 ,分别记录 Fl 和 F2 中活动的精子数。 返 回

58 四、精子功能检查 (二)体外穿透试验 1.精子-宫颈粘液玻片穿透试验 【结果判断】
①正常:精子穿透粘液,并90%以上精子呈直线运动;②较差:精子能穿透粘液,但运动距离小,离开粘液与精液界面<500m;③异常:精子穿透粘液后.很快失去活力或仅有摆动;或精子不能穿透以上界面或于界面精液侧出现凝集。 返 回

59 四、精子功能检查 (二)体外穿透试验 1.精子-宫颈粘液玻片穿透试验 【参考区间】 精子穿透粘液,且90%以上精子呈直线运动。 【临床意义】
由于精子-宫颈粘液玻片穿透试验操作尚未完全标准化,所以常有一定的主观性。如试验结果异常,应结合精液其他检查结果综合分析。 返 回

60 四、精子功能检查 2.精子-宫颈粘液接触试验 【操作】
取精液及近排卵期宫颈粘液等量混合,室温下静置30min ,观察并计数非正常运动(摆动)精子的出现率,以未与宫颈粘液混合的精液作对照,求出摆动精子的出现率(%)。摆动精子越多,意味着精子运动功能受损越严重。此外,可用其他供者的精液或宫颈粘液分别进行交叉试验,以确定抗精子抗体是来自精液或宫颈粘液。 返 回

61 四、精子功能检查 2.精子-宫颈粘液接触试验 【参考区间】 阴性(精子摆动出现率0~25%) 【临床意义】
试验结果阳性(﹥25%),提示精液或宫颈粘液中存在抗精子抗体。 返 回

62 四、精子功能检查 3.仓鼠卵-精子穿透试验 又称为精子穿透试验 (SPT ) ,是评价精子功能最常用的试验。 SPT 是测定精子获能、顶体反应和结合卵子能力的一种技术复杂而严格的生物学试验。试验结果用相差显微镜观察,计算卵子受精率和受精指数。 计算公式:受精率(%)=受精卵数/卵细胞总数×100%; 受精指数=穿透卵细胞的精子数/卵细胞总数 返 回

63 四、精子功能检查 3.仓鼠卵-精子穿透试验 【参考区间】 受精率≥10 %;受精指数≥5 。 【临床意义】
受精指数<5 ,示生育力下降。 SPT 试验结果与体内、外穿透实验结果有良好的相关性,对不育症的诊断符合率达 90 % ,可作为测定精子功能的基础试验。SPT不仅可用于原因不明不育男子的诊断依据,而且可作为评价人工授精试验的依据.但试验影响因素较多,必须加强质量控制。 返 回

64 四、精子功能检查 4.精子低渗肿胀试验(HOS) 【试剂】
膨胀液:枸橼酸钠0.735g,果糖1.351g,加蒸馏水至100ml。分装,-20℃冷冻保存,使用前解冻,并充分混匀。 返 回

65 四、精子功能检查 4.精子低渗肿胀试验(HOS) 【结果判断】 a 型,未出现肿胀; b 型,尾尖肿胀; c 型,尾尖弯曲肿胀;
d 型,尾尖肿胀伴弯曲肿胀; e型,尾弯曲肿胀; f 型,尾粗短肿胀; g 型,全尾部肿胀。 返 回

66 四、精子功能检查 4.精子低渗肿胀试验(HOS) 【参考区间】 尾部肿胀精子 >60%。 【临床意义】
HOS 试验可以预测精子膜有无损害,由于操作简便、快速,且与其他精子功能试验有良好的相关性,常用来判断精液中是否存在 AsAb 。 返 回

67 五、计算机辅助精子分析 计算机辅助精子分析(CASA)技术是通过一台高分辨率的显微摄像系统,采集精子形态图象和精子运动图象,用计算机和专用精液分析软件对图象进行处理和分析,能自动测试近20项精液分析指标,包括精子浓度、精子活率、活力、精子运动速度、精子运动方式、精子头运动轨迹图和力度等一系列“运动学”参数,有些仪器还可以检查精子形态学参数等。特别是对精子运动的分析有快速、直观、准确的特点。 返 回

68 总结 精液常规检查包括一般性状检验及显微镜检验两大方面。
具体内容:①精液外观;②精液量;③精液粘稠度;④精液液化时间;⑤精液酸碱度;⑥精子活动率;⑦精子活动力;⑧精子计数;⑨精子形态观察;⑩精液细胞学检查 返 回

69 总结 正常精液常规检查报告示例: 灰白色;3 ml;液化时间30min;粘稠度Ⅰ级;pH值7.5;精子活率80%;精子活动力a级+b级精子占70%;精子计数60×109/L;正常形态精子85%;红细胞1~2/HP 、白细胞3~5/HP 返 回

70 练习题 返 回

71 单项选择题 1.精液标本采集禁欲时间为 A.1d B.2d C.3~5d D.8d E.10d 返 回

72 单项选择题 2.精液标本送检时间不能超过 A.10min B.30min C.40min D.1h E.2h 返 回

73 单项选择题 3.精液液化延缓或不液化常见于 A.前列腺炎 B.精囊炎 C.睾丸结核 D.睾丸炎 E.附睾炎 返 回

74 单项选择题 4.精液中为精子提供能量的主要物质是 A.果糖 B.葡萄糖 C.麦芽糖 D.蔗糖 E.糖原 返 回

75 单项选择题 5.b级精子活动是指精子呈 A.快速前向运动 B.慢速或呆滞前向运动 C.原地打转 D.非前向运动 E.不动状态 返 回

76 √ 6.正常精液pH为 单项选择题 A.4.0~5.0 B.5.5~9.0 C.6.3~6.5 D.6.5~7.0 E.7.2~8.0
返 回

77 7.刚排出的精液具有高度的粘稠性,这种粘稠性与哪种物质的存在有关
单项选择题 7.刚排出的精液具有高度的粘稠性,这种粘稠性与哪种物质的存在有关 A.维生素C B.纤溶酶 C.酸性磷酸酶 D.果糖 E.凝固酶 返 回

78 8.正常精液排出体外可自行液化,主要与 哪种物质的存在有关
单项选择题 8.正常精液排出体外可自行液化,主要与 哪种物质的存在有关 A.纤溶酶 B.凝固酶 C.酸性磷酸酶 D. 果糖 E.精子顶体酶 返 回

79 单项选择题 9.观察精液液化时间标本应放置在 A.20℃ B.25℃ C.28℃ D.37℃ E.2-8℃ 返 回

80 10.精液液化时间超过多少可报 不液化或液化不完全
单项选择题 10.精液液化时间超过多少可报 不液化或液化不完全 A.20min B.25min C.60min D.80min E.120min 返 回

81 单项选择题 11.正常精液液化时间一般不超过 A.10min B.20min C.30min D.40min E.60min 返 回

82 12.判断结扎手术是否成功,一般于术后第6周开始检查,每周1~2次,连续多少次查不到精子则手术成功
单项选择题 12.判断结扎手术是否成功,一般于术后第6周开始检查,每周1~2次,连续多少次查不到精子则手术成功 A.1次 B.2次 C.3次 D.4次 E.5次 返 回

83 √ 13.关于精子的说法下列哪项不正确 单项选择题 A.精液主要由精子和精浆两部分组成 B.精液量2~5ml
C.精液液化时间不得超过30min D.正常精子活率≥75% E.WHO将精子活动力分为5级 返 回

84 14.精子原地打转、活动迟钝 应属于精子活力哪一级
单项选择题 14.精子原地打转、活动迟钝 应属于精子活力哪一级 A.a级 B.b级 C.c级 D.d级 E.e级 返 回

85 1.正常刚排出的精液具有高度的_______性, 30min后可自行_______。 粘稠 液化
填空题 1.正常刚排出的精液具有高度的_______性, 30min后可自行_______。 粘稠 液化 返 回

86 2.正常精液量约_______ml,少于____ml或大于____ml视为异常。 2~5 1 8
填空题 2.正常精液量约_______ml,少于____ml或大于____ml视为异常。 2~5 1 8 返 回

87 3.观察精液液化时间标本应放在______℃,每______min观察一次。正常精液液化时间不超过_____min。 10 30
填空题 37 3.观察精液液化时间标本应放在______℃,每______min观察一次。正常精液液化时间不超过_____min。 10 30 返 回

88 4.正常精液采集后60min内精子活率_____%, 精子活动力 _______________________________
填空题 ≥75 4.正常精液采集后60min内精子活率_____%, 精子活动力 _______________________________ a级精子≥25%或a级﹢b级精子≥50% 返 回

89 5.正常精液精子浓度_____________,异常精子应少于______% ≥20×109/L
填空题 5.正常精液精子浓度_____________,异常精子应少于______% ≥20×109/L 20 返 回

90 指新排出的精液从胶冻状转变为流动状所需的时间.
名词解释 1.精液液化时间 指新排出的精液从胶冻状转变为流动状所需的时间. 返 回

91 名词解释 2.精子活动力 是指精子向前运动的能力。 WHO将其分为a、b、c、d四级。 返 回

92 名词解释 3.精子活率 是指活精子占精子总数的比例. 返 回

93 1.简述精液检查的目的 ①评估男性生育功能,为不生育症诊断和疗效观察的提供依据 ②辅助诊断男性生殖系统疾病 ③输精管结扎术疗效观察
问答题 1.简述精液检查的目的 ①评估男性生育功能,为不生育症诊断和疗效观察的提供依据 ②辅助诊断男性生殖系统疾病 ③输精管结扎术疗效观察 ④计划生育科研 ⑤为体外授精和精子库筛选优质精子 ⑥法医学鉴定 返 回

94 问答题 2.试述精子计数的原理 用碳酸氢钠破坏精液的粘稠性,以甲醛固定精子,稀释后充入计数池内计数。 返 回

95 3.试述精子计数的方法 ①于小试管内加精子稀释液0.38ml,吸取 液化后并充分混匀的精液20μl,摇匀;
问答题 3.试述精子计数的方法 ①于小试管内加精子稀释液0.38ml,吸取 液化后并充分混匀的精液20μl,摇匀; ②充分摇匀后,充入计数池内,静置1~2min,以精子头部做为基准进行计数; ③在高倍镜下计数中央大方格内5个中方格 (RBC计数区)内的精子数。 返 回

96 问答题 4.试述精子计数的结果计算 精子数/L=5个中方格所数精子数 ×5×10×20×106/L 返 回

97 问答题 5.试述精子计数的参考值 精子计数≥20×109/L 返 回

98 再 见!


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