1 国内原发性肝癌的中医药动物实验采用 的组方和方法 小组成员：成高雅 葛程 顾婷婷 金文玉 司嘉琪 奚善君 许贇姣

2 教师提出的问题 国内原发性肝癌的中医药动物实验采用了哪些组方或方 法，与临床报道异同，为什么？ 我们发现的问题 我们的分工 成高雅 葛程 金文玉 — 国内原发性肝癌的中医药动物实验采用了的组方或方法 顾婷婷 司嘉琪 奚善君 许贇姣 — 这些实验中采用的方法与临床报道异同

3 文献检索所采用的具体方法 我们采用以下关键词在 CNKI 以及 VIP 等数据库进行了大 量文献检索 原发性肝癌、辨证论治、证候 大鼠、小鼠、证候动物模型、动物实验 同时，我们还参阅了《中医内科学》等课本进行参照进 一步分析讨论

4 中草药 中成药 国内原发性肝癌的中医药动物实验采用 的组方和方法 清热解毒 活血化瘀 软坚散结 收敛固涩 健脾理气 补益气血 滋养肝阴 活血化瘀 健脾理气 清热解毒 消癥散结 祛邪： 扶正：

5 1. 祛邪： 清热解毒： 半枝莲、白花蛇舌草、蒲公英、冬凌草等 活血化瘀： 桃仁、丹参、赤芍、八月札、茵陈、郁金、 柴胡、莪术等 软坚散结： 鳖甲、牡蛎、山慈菇等 收敛固涩 : 椿皮、乌梅、山茱萸等 中草药

6 2. 扶正： 健脾理气： 黄芪、白芍、白术、薏苡仁、神曲、法夏、 云苓等； 补益气血： 黄芪、肉桂、红参、茯苓、白术、甘草、 熟地、白芍、川芎、当归 滋养肝阴： 生地、鳖甲、牡蛎、女贞子

7 常用方剂：健脾理气方 （党参、白术、茯苓、八月札、甘草等）； 补脾益气方 （四君子汤加黄芪）； 十全大补汤 （黄芪、肉桂、红参、茯苓、白术、甘草、 熟地、白芍、川芎、当归）； 扶正抑瘤方 （黄芪、灵芝、女贞子、山药）； 养阴柔肝方 （由北沙参、麦冬、鳖甲、当归等 18 味中药组成）； 百合地黄汤 （百合、地黄） 。 2. 扶正：

8 3. 扶正祛邪合用： 温阳散结 ： 人参、附子、黄芪、白术、川椒、 莪术、青皮、白芍、甘草等 解毒消癥饮 : 白花蛇舌草、山慈姑、夏枯草、苦参 复肝春六号 : 黄芪、女贞子、牡蛎、鳖甲、莪术、 白花蛇舌草、薏苡仁、半枝莲、桔梗等

9 3. 扶正祛邪合用： 扶正化瘀 319 方 : 由虫草菌丝、桃仁、丹参等 6 味中药组成 扶正抗癌方 : 西洋参、白术、鳌甲、穿山甲、急性子、 石见穿、龙葵、漏芦、核桃树枝等 养阴解毒方 : 北沙参、虫草菌丝、七叶一枝花和莪术等

10 中成药 活血化瘀： 大黄螫虫丸、鳖甲煎丸 健脾理气： 益气免疫冲剂（四君子汤加减） 清热解毒，消癥散结： 清肝消癥丹（成分：蟾蜍、蟑螂等） 解毒散结、活血化瘀： 鳖甲煎丸和大黄蛰虫丸联合蟾蜍制剂 疏肝理气，化瘀通络，健脾和胃： 肝康宁 （成分：螺旋藻粉、菊花、陈皮、山楂） 解毒，消肿，止痛： 华蟾素（成分：干蟾皮提取物 ）

11 国内原发性肝癌中医药动物实验采用方法举例 不同治则对 DEN 诱发大鼠肝癌作用的比较研究 动物造模及分组： Wistar 大鼠，雄性，体重 100—120g ，自由饮用 60 — 80ppm DEN 水溶液，直到 24 周末实验结束。将 70 只大鼠 随机分为 7 组，每组 10 只，分别为正常组、模型组、西药组、 全方组、清热组、活血组、健脾组。西药组加用西药 FT- 207 ； 全方组加用清热解毒、活血健脾理气中药，全方由清热、活血、 健脾方合并而成；清热组用清热解毒中药，清热方由半枝莲、 白花蛇舌草等组成；活血组用活血化癖中药，活血方由桃仁、 丹参等组成；健脾组用健脾理气中药，健脾方由黄芪、白术等 组成。 中药的制备与给药方法：中药水煎剂按 2 ： 3 比例兑入乙醇， 4°C 静置 48h ，过滤，浓缩至 1ml 含 2g 生药， 4°C 存放。 FT- 207 用双 蒸水溶解， 4°C 存放。各组药物均于下午 19 时加入饮水中给药。 剂量均为成人单位体重的 10 倍量。 不同治法对大鼠肝癌相关基因转录作用的研究

12 肝癌动物模型 二乙基亚硝胺（ DEN ）诱发大鼠肝癌： 取体重 250g 左右的封闭群大白鼠，雌雄不拘。按性别 分笼饲养。除给普通食物外，饲以致癌物，即用 0.25 轓水溶液灌胃，剂量为 10mg/kg ，每周一次， 其余 5 天用 轓水溶液放入水瓶中，任其自由饮 用。 共约 4 个月可诱发成肝癌。或单用 0.005% 掺入饮水中 口吸服 8 个月诱发肝癌。 4-2 甲基氨基氮苯（ DBA ）诱发大鼠肝癌： 2- 乙酰氨基酸（ 2AAF ）诱发大鼠肝癌： 亚胺基偶氮甲苯（ OAAT ）诱发小鼠肝癌：

13 国内原发性肝癌中医药动物实验采用方法举例 大黄螫虫丸对荷瘤小鼠免疫作用的研究 药物制备：取大黄螫虫丸 ( 上海雷允上药业有限公司提供，生产批 号 :040501) 置煎煮容器内，加适量的冷水浸泡 1 ～ 2h ，煮沸 30 min ，过滤。药渣加 3 ～ 5 倍量水继续煎煮，煮沸 20 min ，过滤。 合并两次滤液，于水浴上浓缩成相当于原生药材 1g/mL 的药液， 冷却装人灭菌药瓶，置 4 ℃冰箱备用。 实验方法 造模方法：无菌条件下取生长 7 ～ 9 d 传代接种的 H 22 细胞株，将细 胞 5x10 6 接种于每只小鼠右侧腋窝皮下。 动物分组及给药方法：小鼠 30 只， 10 只作为正常组，其余均按上 法造模。小鼠接种肿瘤 5d 后，随机分成对照组和实验组，每组 10 只，对照组予以生理盐水处理，实验组给予大黄蛰虫丸水煎 液 1g/mL 该剂量通过 LD 50 确定，均灌胃 0. 2 mL/ 只，连续给药 15 d 。

14 国内原发性肝癌中医药动物实验采用方法举例 清热解毒和补益中药对小鼠腹水肝癌 H 22 细胞的作用及 免疫学机制 选择冬凌草、半枝莲为清热解毒中药代表药，并与补益 代表药黄芪进行比较 将 50 只 KM 小鼠随机分为模型组、冬凌草组、半枝莲组、 黄芪组和热休克处理对照组 ( 热休克组 ) 。在活体肝癌 H 22 腹水细胞腹腔接种后当天，冬凌草组、半枝莲组和 黄芪组分别以 30 、 15 、 15 g·k g -1 ·d -1 的剂量灌胃给药， 连续 12 d ；热休克组小鼠以 43 ℃热处理 20m i n ，每 4 天 1 次，共 3 次；模型组不予任何处理。 12 d 后处死小 鼠．分别抽取腹水制片，光镜下观察细胞形态，并采 用免疫组化法检测腹水 CD4 + 、 CD8 + T 细胞表达。

15  这些实验研究中存在的异同 肝癌小鼠造模的不同 给药方式的不同 抑癌扶正行气活血方 ( 半枝莲、白花蛇舌草、桃仁、丹 参、黄芪、白术等 ), 清热方 ( 半枝莲、白花蛇舌草等 ) 、 活血方 ( 桃仁、丹参等 ) 、健脾方 ( 黄芪、白术等 ) 。采用 标准的水煎醇沉工艺制备的中药及西药加工混合于喂 养大鼠的颗粒饲料中，作为一种治疗方式。 用清热解毒、活血化安和健脾益气方药治疗时，将中 药水煎剂提醉、过滤、浓缩后加入饮水中给药。 大黄螫虫丸对荷瘤小鼠免疫作用的研究中，水煎液 1g/mL 该剂量通过 LD50 确定，均灌胃 0. 2 mL/ 只，连续 给药 15 d 。用清热解毒、疏肝理气、活血化瘀治法组 方时，可以通过采用灌胃的给药方式。 肝康宁和华蟾素可用局部注射的给药途径。

16 国内原发性肝癌的中医药动物实验研究的治法与临床异同 动物实验临床试验 同①清热解毒：半枝莲、白花蛇舌草、蒲公英、冬凌草 ②活血化瘀：大黄螫虫丸，莪术、三棱、郁金、赤芍、桃仁 ③健脾理气：以四君子汤为基础方，如益气免疫冲剂（四君子汤加 减），健脾理气方（党参、白术、茯苓、八月札、甘草等），补 脾益气方（四君子汤加黄芪） ④滋补肝阴肝血：生地、女贞子、鳖甲、当归 ⑤所用的经方：四君子汤、小柴胡汤、四君子汤加减 ⑥选用华蟾素注射液 异①滋阴凉血、清热润肺的百合 地黄汤 ②自拟方剂如扶正化瘀 319 方、 扶正抑瘤方等 ③收涩类中药 ①化湿 ②以毒攻毒 ③疏肝理气 ④滋补肝阴肝血 选用的方剂范围更大，使用的中 药更多更复杂

17 临床用药与实验研究药物的异同及其可能原因 临床上，治疗原发性肝癌以经方、名方偏多, 出现 频次最多的前 20 种依次排列如下 : 一贯煎、逍遥散、茵陈蒿汤、四君子汤、龙胆泻肝 汤、膈下逐瘀汤、柴胡疏肝散、补中益气汤、小柴 胡汤、香砂六君子汤、参苓白术散、茵陈五苓散、 六君子汤、血府逐瘀汤、知柏地黄汤。 而在已有实验中，我们确实可以看到对于四君子汤、 小柴胡汤等的实验研究，但是对于临床上的常用方 的研究并不全面。

18 临床用药与实验研究药物的异同及其可能原因 而我们所查找到的文献中，有相当数量的文献进行 动物实验研究的是一些上市成药如复肝春 6 号、木 回春片、自制中药复方等。 我们小组讨论认为可能与以下原因有关： a) 新药的研发与推广需要 b) 研究的难易度（实验设计的难度、结果获取难易度、 成效的预期等因素） c) 科研的一些其他软硬件问题（如经费、科研设施、 研究人员等）

19 在中医药动物实验研究中应注意的问题 中医动物实验研究应以中医理论为指导 中医动物实验研究应从中医临床出发 中医动物实验研究应突出中医治疗原则 中医动物模型不能照搬西医动物模型

20 中医药动物实验研究的发展趋势 随着现代医学的发展，实验研究越来越受到人们的重 视。经过近几十年的不懈努力，我国目前已建立中医 动物模型 150 余种，这仅仅是初步的探索，还有待于 进一步研究。 中医药只有通过大量实验研究，借用现代医学先进技 术和方法，才能使中医药逐渐发扬光大，逐步走向世 界，为人类健康事业做出更大贡献。

21 参考文献 1. 包素珍等. 中国中医药科技 [J]. 百合地黄汤对肝癌 H 22 荷瘤小鼠抑瘤作用的实验研 究 （ 5 ） : 管冬元等. 上海中医药大学学报 [J]. 不同治法对大鼠肝癌相关基因转录作用的究 （ 15 ） : 王洪涛等. 河北中医 [J]. 原发性肝癌中医辨治体会.2009 ， 31 （ 8 ） : 张军民，张会民，贾红敬，现代医药卫生 [J]. 中西医结合治疗原发性肝癌 51 例疗效观 察.2007 ， 23 （ 10 ） : 闫建国等. 中西医结合肝病杂志 [J]. 中医对原发性肝癌的辨证研究及治疗.2010 ； 20 （ 3 ） : 李大鹏等. 今日药学 [J]. 原发性肝癌的中医药治疗研究新进展 临床研究.2008 ， 18 （ 3 ） : 刘庆等. 中西医结合学报 [J]. 原发性肝癌的中医治法与方药.2005 ， 3 （ 4 ） : 姜胜攀. 中医杂志 [J]. 原发性肝癌的中医治则治法与方药刍议.2010 ，（ 51 ） :93~ 王洪琦等. 广州中医药大学学报 [J]. 清热解毒和补益中药对小鼠腹水肝癌 H 22 细胞的 作用及免疫学机制比较.2006 ， 3 （ 23 ） : 孙 静. 中药新药与临床药理 [J]. 收涩类中药对小鼠肝癌血道及淋巴道转移的影 响 （ 19 ） : 周阿高等，中成药 [J]. 大黄蛰虫丸对荷瘤小鼠免疫作用的研究 （ 18 ） : 孙保国等. 中药材 [J]. 复方中药对裸鼠肝癌模型的抗癌作用研究 （ 30 ） :

22 Thank you