病 毒 学 第一节 核型多角体病 第一节 核型多角体病 第二节 质型多角体病 第二节 质型多角体病 第三节 浓核病 第三节 浓核病 第四节 病毒病的发病规律 第四节 病毒病的发病规律 第五节 病毒病的防治 第五节 病毒病的防治

病毒的发现？ 19 世纪末，钱伯伦创制细菌过滤器后，发现了 许多毒素和过滤性因子。 1892 年，苏联学者伊万诺夫斯基证明存在过滤 性病毒（发现患花叶病的烟草叶汁通过过滤器 后仍有侵染性）。 19 世纪末 20 世纪初，已经找到许多过滤性病毒。 1915 年， Twort 首先发现细菌病毒。 1935 年，美国生化学家 W.M.Stanleg 获得了烟 草花叶病毒结晶。（第一位） 开始了对病毒本质 的认识，促进病毒 学的发展，而且成 为分子生物学发展 的里程碑。

超显微的，可以通过细菌过滤器。 病毒粒子只含一种核酸。 病毒粒子不能生长，也不能二等分裂。 无细胞结构。 。 病毒只能利用宿主细胞的核糖体进行 Pr 合成。 病毒的主要特征：

家蚕病毒病的研究历史 1149 年陈敷所著《农书》中关于家蚕脓病病症 “ 高节 ” 、 “ 脚肿 ” 的描述。 1639 年徐光启的《农政全书》中，有病蚕 “ 游走 而不安箔 ” 的描述。 1874 年汪日桢《湖蚕述》记有病蚕 “ 高节而足流 白水 ” 。 1912 年 Acqua 发现了第一个昆虫病毒 BmNPV 。 迄今已发现 12 目 1600 余种昆虫，可被 16 个科的 病毒所感染。

家蚕病毒病的种类 1 核型多角体病 由杆状病毒科的家蚕核型多角体病毒（ BmNPV ） 寄生血细胞和体腔内各种组织的细胞核，并形成 多角体。核型多角体病毒 2 质型多角体病 由呼肠病毒科的家蚕质型多角体病毒（ BmCPV ） 寄生中肠圆筒形细胞，并在胞质中形成多角体。家蚕质型多角体病毒 复习内容：家蚕幼虫中肠上皮细胞的类型？

家蚕病毒病的种类 3 浓核病 由细小病毒科的家蚕浓核病病毒（ BmDNV ）寄 生中肠圆筒形细胞的细胞核，不形成多角体。家蚕浓核病病毒 4 病毒性软化病 由小 RNA 病毒科的家蚕软化病病毒（ BmFV ）寄 生中肠杯形细胞胞质中，不形成多角体，但形成 类似多角体的包涵体（封入体）。

家蚕病毒病的危害情况 病毒病是目前蚕茧生产中最为常见、危害最重 的一类病害，给蚕茧生产造成的损失约占蚕病 造成损失的 80% 。 上述四种病毒病在我国都有不同程度的发生， 其危害也因各个蚕区而不同。南方蚕区以中肠 型脓病为主；而北方蚕区则以血液型脓病造成 的损失最大。浓核病常与 CPV 并发；病毒性软 化病目前已很少发生。 因此，本章重点讲解 NPV 、 CPV ，并介绍 DNV.

第一节 核型多角体病 核型多角体病也称血液型脓病，农民常称之 为脓病或脓肿。 一 病原 家蚕核型多角体病毒（ Bombyx mori Nuclear Polyhedrosis Virus NPV ）。存在形式有两种： NPV 与 NPB （多角体）。 （一） NPV NPV 属杆状病毒科，核型多角体病毒属，病毒粒子 杆状， 330×80 nm ； dsDNA;Tm 为 87.5 ℃；

NPV 病毒粒子的超微结构 NPV 膜 髓核（ dsDNA ） 囊膜 胶粘层 衣壳 核衣壳 一个囊膜内 只含一个核 衣壳 一个囊膜内 包含两个以 上核衣壳 模式图 单粒包埋型（ SEV ）与多粒包埋型（ MEV ） 寄生部位 血体壁气管上皮 脑脂肪卵巢皮膜 丝腺精巢皮膜 SEV （ % ） 97~98 72~89 63 MEV （ % ） 2~3 11~28 37 环境温度： 25 ℃ ~28 ℃多形成 SEV ， 33 ℃ ~35 ℃多形成 MEV 。

（二） NPB （多角体） 1 构成 多角体多角体 多角体蛋白 3%~5% 病毒粒子 核糖核酸聚合酶 0.3%Si ；微量 Fe 、 Mg 与宿主细胞 Pr 和病毒 Pr 均不同，分子量 ，由 245 个 AA 残 基组成。 2 理化特性 多为整齐六角形十八面体（偶有四方、三角或 不正形）； 2~6 μ m （平均 3.2 ）；光镜下易观察到； 淡绿色，折光性强；比水重；不溶于水及有机溶 剂；对浓酸不稳定；易溶于碱性溶液；苏丹 Ⅲ 不 能使其着色。

扫描电镜照片 NPB 的形态 光镜照片 N.b NPB

NPB 形态

NPB 形态受下列因素影响 1 寄生部位：血细胞、气管上皮、体壁上皮、 脂肪体中均六角形。而丝腺腺细胞中则巨型三 角形。多角体且较其他组织大 2 倍左右。睾丸、 精室内膜上寄生则四方形。 2 宿主： BmNPV 接种二化螟后： 1 代六角形， 7 代后四方形，再将四角形 NPB 反接种于 B.m. ， 则：第一代少量六角形，第四代达 70%~80% ， 第六代全部为六角形。

3 与环境（温度）有关： BmNPV 接种蛹体。接 种后 —— 28 ℃ 24hr 后，再经 35 ℃则产生四角形 NPB 28 ℃下 48~96hr 后, 再经 35 ℃则产生六角形。 35 ℃下 24~48hr 后, 再经 28 ℃则产生六角形。 35 ℃下 72~96hr 后, 再经 28 ℃则产生四角形。 NPB 形态受下列因素影响

3 NPB 的稳定性 处理 浓度 温度℃ 失活时间 (min) 日光 40 20h 干热 湿热 甲醛 2% 漂白粉 0.3% 25 3 石灰浆 1% 25 3 石灰水 清 25 >24h 盐酸 比重

二 病症 1 典型病症（共同症状）

2 不同时期发病 不眠蚕：在蚕的催眠期间，蚕群体大部分快入 眠时， NPV 病蚕体壁紧张发亮，呈乳白色，行 动活泼，不能入眠，终于体皮破裂，流脓而死。 起节蚕：在起蚕时发病。病蚕生长停滞，体色 乳白而不见转青。体壁松弛多皱，体躯缩小。前 节的节间膜向后套叠，终于出现典型的病征而死。 高节蚕：又称 “ 竹节蚕 ” 。源于病蚕各环节节间 膜或环节后半部（靠近节间膜处）隆起，就象 竹节。多在 4 、 5 龄蚕盛食期发病。

2 不同时期发病 脓蚕：多发生于 5 龄后期至上簇前。环节肿胀拱起， 呈算盘珠状，体壁紧张发亮，体色乳白，病重时， 爬行缓慢，终因腹足失去把持力，从蚕匾或蔟中坠 下，流脓而死。发病迟者死于蔟中或结薄皮茧而死 亡，生产上比较常见。 斑蚕：在生产上较少见，与蚕品种有关，现行品 种少发生。发生时出现对称性的病斑，如黑褐色的 焦脚、黑色气门及大的斑块等。 蛹期病症：在 5 龄后期、熟蚕、初蛹期感染可造成 蛹期发病。病蛹体色暗褐或乳白，体壁易破，一经 震动即流出浓汁而死，造成茧层污染，即内印茧或 死茏茧。

2 不同时期发病 高节 狂躁爬行

2 不同时期发病 腹足基部乳白 气门周围水 渍状病斑

2 不同时期发病

三 病变 NPV 及其包涵体是在寄主细胞核内增殖和形 成的，因而受感染的细胞核便发生一系列的病 变过程。随着多角体的不断增多，使细胞核逐 渐膨胀，随后细胞亦膨大破裂，这样多角体、 病毒及细胞碎片就游离于血液中。 血细胞、气管上皮、脂肪组织及真皮细胞 易形成多角体。在生殖腺和神经细胞中只能形 成少量多角体，而蜕皮脱、唾腺和马氏管等则 很难形成，在丝腺中除前部丝腺不能形成多角 体，中、后部丝腺细胞核均能形成大量多角体。 目前已发现 NPV 可在中肠圆筒形细胞中增殖, 但 不能形成多角体.

病 变

四 致病机理 1 感染入侵 NPB 蚕食下 放出 NPV 污染桑叶碱液溶解肠腔 灭活 排出 RFP 围食膜 中肠上 皮细胞 复制 胞核定位 血液 NPV 创伤 NPV 细胞间隙 血细胞核定位

2 病毒复制 dsDNA S tRNA rRNA 病毒 Pr 衣壳 Pr NPB Pr ssDNA mRNA 胞质胞质 NPV NPB 细胞核 细胞质 E 3 装配 4 释放

5 病毒增殖 NPV 的增殖曲线 隐潜期隐潜期 缓慢增殖期缓慢增殖期 高速增殖期高速增殖期 稳定增殖期稳定增殖期

五 发病特点 1 本病以食下传染为主（ NPB ），也可经 伤口感染（ NPV ）。 2 主要传染源为病蚕血液（脓汁）。 3 本病主要发生在 3 龄 ~ 老熟（蛹期），尤以 5 龄中期 ~ 老熟前后最为严重。 4 本病属于亚急性传染病，小蚕感染后经 3 ~ 4 天发病死亡，大蚕经 4 ~ 6 天发病；外温高时， 病程加快。

5 病蚕体壁破裂流脓之前，蚕座二次感 染的可能性较小。 6 由于 NPB 对自然环境有强的抵抗力， 故该病除具有水平传播外，尚具有较强 的垂直传播能力。 7 恶劣的环境条件及一些理化因素刺激 可诱发本病。 8 不同蚕品种对本病抗性不同。

六 诊 断 1 肉眼鉴别

2 显微镜检查 此病在发病初期，外观病症往往不明显， 但发育迟缓，有时迟眠。取可疑蚕剪断尾角 或腹足，滴一滴血液于载玻片上，加盖片与 400~600 倍显微镜下观察。 如有折光性较强，大小较整齐的六角形 多角体，即可确诊。如病蚕处于感染中期， 可观察血细胞核内有无折光性强、大小不等 的颗粒，据此确诊。 镜检时，脂肪球与多角体的区别方法： （ 1 ） Sudan Ⅲ 染色法；（ 2 ）有机溶剂溶解法； 六 诊 断

2 显微镜检查 3 PCR 检测与血清学方法 以已知的抗体检查蚕体 内是否存在相对应的抗 原，从而做出蚕是否被 某种病毒感染。

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