项目四 采精与精液品质检查 主讲人：戴乐军

本单元重点 采精的方法与采精前的准备； 各种动物精液品质的质量标准； 精液品质检查的内容； 精液活力估测的方法； 精液密度的比色测定法。

课堂组织 在实训中心进行。 在播放公牛采精录像后，介绍公畜生殖器官组成、采精方法与准备，实施公羊采精实训； 在实验室边介绍精液品质检查项目与方法，边指导学生实施精液品质检查实训。

任务一 人工授精技术概述 是相对于自然交配而言的 。 任务一 人工授精技术概述 是相对于自然交配而言的 。 人工授精是利用器械采集雄性动物的精液，经检查和处理后，再用器械将精液输入到发情雌性动物的生殖道内，使之受孕的技术。

一、人工授精的发展概况 冻精阶段 50年代英国的Smith和Polge研究牛精液的冷冻保存方法，人工授精技术进入了一个新的发展阶段。 实用阶段 冻精阶段 试验阶段 1780年，意大利生理学家Spallanzani，第一次成功地用狗进行了人工授精试验； 上世纪40-60年代，人工授精的应用蓬勃发展成为繁殖改良家畜的重要手段。以乳牛的普及率最高，发展最快，技术水平较高； 50年代英国的Smith和Polge研究牛精液的冷冻保存方法，人工授精技术进入了一个新的发展阶段。

我国人工授精技术发展 50年代 1935年 在江苏句容马场试验成功； 在北方开展马、绵羊人工授精，推动马、细毛羊品种育种； 60-70年代 70-80年代初 1935年 在江苏句容马场试验成功； 在北方开展马、绵羊人工授精，推动马、细毛羊品种育种； 猪人工授精，尤江苏好，并建立良种推广站。 60年代开展牛人工授精，70年代冷冻精液；

优越性 二、人工授精的优越性 加速家畜品种改良，促进育种工作； 防止各种疾病，特别是生殖道传染病的传播； 有利于提高母畜的受胎率； 提高了优良种公畜的配种效能和种用价值，降低了饲养管理费用； 加速家畜品种改良，促进育种工作； 优越性 防止各种疾病，特别是生殖道传染病的传播； 有利于提高母畜的受胎率； 克服地域限制和杂交改良的大小悬殊困难； 为开展胚胎移植、同期发情等繁殖技术研究提供了有效手段。 注意：人工授精操作必须严格规范，否则影响的范围更大。

牛假阴道采精法

任务二 雄性动物生殖生理

雄性动物的生殖器官 公牛生殖器官 公猪生殖器官 尿生殖道 附性腺 输精管 附睾 睾丸 阴茎与 包皮 公羊生殖器官 公马生殖器官

一、睾丸与附睾的组织结构

睾丸的生理功能 产生精子。每天每克睾丸组织可生产精子公牛1300-1900万个，公猪2400-3100个。 分泌雄性激素。 阴囊的作用：通过调控睾丸与腹壁的距离维持睾丸有低于体温的环境，利于精子的生存。

精子的发生 精子在睾丸内形成的全过程称为精子的发生。 包括精细管上皮细胞分裂、增殖、演变和向管腔释放等过程，同时也存在时间和空间的变化规律。 一个精原细胞经4次有丝分裂产 生16个初级精母细胞；再经过二次减数分裂，每个初级精母细胞生成4个精子。

精子的发生过程 精原细胞 不活动的 活动的 15-17d 不活动的 精原细胞 初级精母细胞 15-17d 次级精母细胞 数小时 精细胞

精子与卵子发生的区别 卵母细胞被卵泡细胞包围，卵子发生与卵泡发育有关，精母细胞游离于精细管中； 精子发生是一个连续的过程，卵子发生在减数Ⅰ的双线期开始后不久就停止分裂，进入静止状态； 一个初级卵母细胞最终仅形成一个卵子和1-3个极体，每个初级精母细胞生成4个精子； 卵子发生在受精过程中才最后完成，排卵时尚未完成减数Ⅱ分裂，精子在射精时已完成减数Ⅱ和变形过程；

精细管上皮周期和精子发生周期 精子发生过程中，在精细管任何一个断面上都存在着精子发生系列中不同类型的生精细胞，这些细胞群中的细胞类型是不断变化的、周期性的。

附睾的生理机能 是精子最后成熟的地方； 贮存精子的场所； 吸收作用； 运送精子。

精子在附睾中的成熟和贮存 精子在睾丸产生并在附睾转运过程中发生某些形态与机能的变化，获得受精潜能和运动能力叫成熟。 这些变化包括：形态变化、原生质滴脱落、离子浓度变化、运动方式、代谢方式的变化。 由于附睾内的相对低温、高渗、弱酸性环境抑制了精子在附睾内的运动，使精子能在附睾内贮存30-60d。

各种动物精子发生周期 即饲料对公畜精液质量的影响要延后二个月左右 公畜采精过度的恢复也要二个月左右 动物 精子发生周期(d) 猪 44-45 9-12 牛 60 10 绵羊 49-50 13-15 马 50 8-11 即饲料对公畜精液质量的影响要延后二个月左右 公畜采精过度的恢复也要二个月左右

成熟精子的形态和结构 正常精子的形态和结构 畸形精子和分类

精子的形态和结构 头：家畜精子的头部呈椭圆形。 ① 细胞核 ② 顶体 ③核后帽 ④细胞质膜 头：家畜精子的头部呈椭圆形。 ① 细胞核 ② 顶体 ③核后帽 ④细胞质膜 颈：连接头部和尾部，由近端中心小体，基粒，厚纤维组成。是精子最脆弱的部分，易脱落形成无尾精子。 尾：精子的运动主要靠尾的鞭索状波动，而使精子推向前进，是精子能量代谢的中心。 禽类精子头部比家畜精子更细长。

二、雄性动物副性腺的结构与功能 是精囊腺、前列腺、尿道球腺的总称。 尿道球腺：成对，位于尿生殖道骨盆部的外侧，猪最大，马次之，牛羊最小。 前列腺：位于精囊腺后部，尿生殖道起始部的背侧，为复管状腺。 精囊腺：成对，位于输精管末端的外侧，其排泄管与输精管一同开口于精阜。猪最发达，狗、猫、骆驼没有

各种动物的副性腺 (骨盆内背面观) A.公牛 B.公羊 C.公猪 D.去势公猪 E.公马 各种动物的副性腺 (骨盆内背面观) A.公牛 B.公羊 C.公猪 D.去势公猪 E.公马 1.输精管 2.膀胱 3.壶腹 4.精囊腺 5.前列腺 6.尿生殖道骨盆部 7.尿道球腺 8.坐骨海绵体肌 9.阴茎缩肌 10.球海绵体肌

副性腺的生理机能 冲洗尿生殖道； 加大精液容量； 供给精子营养； 活化精子； 推动和运送精液到体外； 缓冲不良环境对精子的危害； 防止精液倒流。

精液的组成与理化特性 精液的组成 精清的主要化学成分 精清的生理作用

（一）精液的组成 精液由精子和精清组成。 精液中精清85-98%，精子仅占2-15%。 精清主要来自公畜副性腺的分泌物，此外还有少量的睾丸液和副睾液。

（二）精清的主要化学成分 主要化学成分 蛋白质、氨基酸 糖类 脂类 无机离子 维生素和其他有机成分 酶类

（三）精清的生理作用 清洗尿道和防止精液倒流； 稀释来自副睾的浓密精子，扩大精液容量； 调整精液PH值，促进精子运动； 为精子提供营养物质； 对精子保护作用。 www.themegallery.com Company Logo

三、各种雄性动物的龟头 1.公牛的 2.公牛的（刚交配后的形状） 3.公马的 4.公猪的 5.公绵羊的 6.公山羊的

四、公鸡的生殖器官 公禽生殖器官主要由睾丸、附睾、输精管和退化的交配器官构成。 睾丸悬于腹腔肾脏前叶下方，脊柱腹侧； 附睾较短而不发达； 无副性腺，只有输精管末端附近的脉管体及泄殖腔内淋巴褶所分泌的透明液； 输精管一对，与附睾一起是精子成熟和贮藏的场所； 没有阴茎，但有一个勃起的交媾器； 刚孵出的公雏，其生殖隆起比较明显，可用来进行鉴别雌雄。

任务三 采精技术

猪手握法采精

一、采精的方法 适用于各种家畜和部分小动物 是当前公猪采精普遍应用的方法 主要用于禽类和犬类 主要用于野生动物的采精 手握法 按摩法 电剌激法 假阴道法 适用于各种家畜和部分小动物 是当前公猪采精普遍应用的方法 主要用于禽类和犬类 主要用于野生动物的采精

假阴道法 由外胎、内胎、气嘴、集精瓶等组成； 包括调试温度、压力、润滑度。 模拟母畜阴道环境条件的人工阴道，诱导公畜射精而采集精液的方法。 原理 模拟母畜阴道环境条件的人工阴道，诱导公畜射精而采集精液的方法。 结构 由外胎、内胎、气嘴、集精瓶等组成； 准备 包括调试温度、压力、润滑度。

牛假阴道采精法

羊采精 采精前

手握法 适用于猪的采精。 采精员要戴上灭菌胶手套，蹲在假台畜左侧，待公猪爬跨台畜后，当阴茎从包皮内开始伸出时，立即紧握龟头，待其抽送片刻后，锁定公猪的龟头。 待阴茎充分勃起时，顺势牵引向前，就能导致公猪射精另一只手持带有一次过滤网的的集精杯收集精子浓厚部分的精液，其它稀薄精液及颗粒状胶冻分泌物排出时可随时弃掉。

猪手握法采精

分段采精 公猪射精时间长,量多,应弃掉含副性腺分泌物多、精子较少、精液清亮白色的第一段和精液较稀、清亮、精子少的第三段，只收集精液浓、精子多、呈乳白色的第二段。

电剌激法 本法是通过电流剌激公畜引起射精而采集精液的一种方法。适用于各种动物。 电剌激采精器由电子控制器和电极探棒两部分组成。

电剌激法 电剌激采精应将公畜以站立或侧卧姿势保定。保定后，剪去包皮及其周围的被毛，并用生理盐水冲洗拭干，然后将电极探棒经肛门缓慢插入直肠，达到靠近输精管壶腹部的直肠底壁，大家畜插入深度约20-25cm，羊10cm，犬10-15cm，兔5cm。 然后调节控制器，选择好频率，开通电源。调节电压时，由低开始，按一定时间通电及间歇，逐步增高剌激强度和电压，直至公畜伸出阴茎，勃起射精，将精液收集于附有保温装置的集精瓶内。

二、采精的基本要求与条件 对种公畜、对人员必须确保安全； 安全 洁净 能够采集到种公畜全部的精液。 全部 条件：适宜的温度、压力、润滑度。 采集的精液不能受到任何生物和化学污染； 全部 能够采集到种公畜全部的精液。 条件：适宜的温度、压力、润滑度。

三、采精前的准备 场地的准备 台畜的准备 器械及假阴道准备 公畜调教与准备 人员准备 采精前 的准备

牛采精及其准备

采精场地的准备 采精要有固定的场地，以便雄性动物建立起巩固的条件反射。 采精场地应该宽敞、平坦、安静、清洁，场内设有采精架以保定台畜，或设立假台畜，供公畜爬跨进行采精。 采精场应与精液处理室相连,和公畜舍相近。室内采精场的面积一般为10×10米，并附设喷洒消毒和紫外线照射杀菌设备。

公猪采精室

牛采精架

台畜的准备 台畜有真、假台畜之分 真台畜 指使用与公畜同种的母畜、阉畜或另一头种公畜作台畜。 真台畜应健康、体壮、大小适中、性情温顺。 真台畜 指使用与公畜同种的母畜、阉畜或另一头种公畜作台畜。 真台畜应健康、体壮、大小适中、性情温顺。 选发情的母畜比较理想，经过训练的公畜也可作台畜。 假台畜 即采精台，是模仿母畜体型高低大小，选用金属材料或木料做成的一个具有一定支撑力的支架。 台畜采精前应清洗、消毒，防止污染精液。

器械及假阴道的准备 采精所需要的器械要事先准备好，力求清洁、干燥、无菌，在使用之前要严格消毒， 每次使用后必须洗刷干净。

有关器械

假阴道的结构 假阴道由外壳、内胎、集精杯及附件组成。 各种家畜的假阴道结构基本相同，但形状和大小不一。 外壳 为一圆筒，由轻质铁皮或硬塑料制成； 内胎 为弹性强、薄而柔软无毒的橡胶筒，装在外壳内，构成假阴道内壁； 集精杯 由暗色玻璃或塑料制成，装在假阴道的一端； 此外，还有固定内胎的胶圈，保定集精杯用的三角保定带，充气用的活塞和双联球等一些附件。

假阴道的准备 应具备 五个条件 无破损漏洞：假阴道不得漏水或漏气。 无菌：凡接触精液的部分均须经消毒。 适宜温度：假阴道内腔温度38-40℃， 集精杯也应保持34-35℃。 适当压力：借助注入水和空气来调节 假阴道的压力。 适当润滑度：假阴道前段1/3-1/2处 到外口周围涂抹润滑剂。

充气 注温水

牛羊假阴道安装充气后理想的状态 不太理想的状态（但可以用）

测 温

种公畜的调教和准备 利用假台畜采精，要事先对种公畜进行调教，使其建立条件反射。调教的方法有如下几种： 外激素法：在假台畜上涂抹发情母畜的阴道粘液或尿液； 诱情法：诱使公畜进行爬跨发情母畜，但不让交配而把其拉下，待公畜性冲动达到高峰时，令其爬跨假台畜采精； 旁观法：让其目睹另一头已调教好的公畜爬跨假台畜，然后再诱其爬跨。

公畜调教时应注意的事项 调教过程中，要反复进行训练，耐心诱导，切勿施用强迫、恐吓、抽打等不良剌激，以防止性抑制而给调教造成困难； 调教时应注意公畜外生殖器的清洁卫生； 最好选择在早上调教，早上精力充沛，性欲盛； 调教时间、地点要固定，每次调教时间不宜长； 注意调教环境的安静。

采精前种公畜的准备 包括体表的清洁消毒和诱情（性准备）两个方面。 采精前应擦拭公畜下腹部，用0.1%高锰酸钾溶液等洗净其包皮外并抹干，用生理盐水清洗包皮腔内积尿和其他残留物并抹干。 在采精前，需以不同诱情方法使公畜有充分的性兴奋和性欲，一般采取让公畜在台畜附近停留片刻，进行2-3次假爬跨。

人员的准备 采精员应具有熟练的技术，采精时注意人畜的安全； 应有固定的工作服与鞋，并保持整洁； 采精前应剪短指甲，并戴上一次性手套。

四、采精频率 采精频率是指每周对雄性动物的采精次数。 为了既能最大限度地采集精液，又能维持其健康体况和正常生殖机能，必须合理安排采精频率。 牛：每周2天采精，当日采2次 猪：隔日一次，最好3天一次 羊：每周3天，当日采2次。 犬：隔日一次

五、公畜的性成熟和适配年龄 性成熟：是指雄性动物性器官、性机能发育成熟,并具有受精能力的时期。 动物性成熟时间：牛10-18月龄，马18-24月龄，猪3-6月龄，羊5-8月龄，家兔3-4月龄。 适配年龄：是指雄性动物基本上达到生长完成的时期，各种器官组织都已发育完善，是配种的最佳时期。 动物适配年龄一般根据品种、个体发育情况，在性成熟基础上延迟数日（兔）数月（猪羊）甚至1年（牛马）。

采精技术实训 采精前准备 假阴道调试 公羊假阴道采精

任务四 精子的代谢与环境因素影响

一、精子的代谢和运动 精子的代谢 精子的运动

（一）精子的代谢 精子对蛋白质的代谢 精子对酯类的代谢 精子的呼吸 精子的糖酵解

1、精子的糖酵解 是一个无氧分解的糖代谢过程。 1mol果糖酵解为乳酸能获得150.7kj能量。 在体内，家畜生殖器内基本上是无氧环境，精子的活动主要是通过这种酶解来提供能量。

2、精子呼吸 为需氧分解代谢过程。 果糖首先酵解成丙酮酸，然后经过三羧循环转变为CO2和H2O，而获得能量。 1mol果糖在有氧时最终可分解产生2872.1kj能量，是无氧酵解的19倍； 精子呼吸主要在尾部进行。　

3、精子对酯类的代谢 当精子外源呼吸的机制枯竭时，可通过呼吸作用氧化细胞内的磷脂维持生存。 精子先将磷脂分解，产生脂肪酸，再氧化而获得能量。 甘油磷酸胆碱在母畜生殖道内能分解为磷酸甘油，被精子氧化利用。

4、精子对蛋白质和氨基酸的代谢 在正常情况下，精子不从蛋白质的成分中取得能量，精子对蛋白质的分解表明精液已开始变性。

（二）精子的运动 运动形式 运动特性 直线前进运动--正常运动 旋转运动--异常运动 摆动--低温或死亡前的运动 向流性--逆流而上 向触性--向异物边缘运动 向化性—趋向某些化学物质运动 运动特性

二、环境条件对精子的影响 环境条件对精子的影响 电解质 温度 稀释 滲透压 常用化学药物 PH值 光照

（一）温度 37℃时精子活动相当活泼，但只能维持几个小时。 在0-5℃时精子往往停止运动，当温度升高以后，精子又可能恢复运动。 高于体温时，精子运动异常强烈，但很快就死亡； 55℃ 精子很快就会失去活力，往往使精子蛋白质凝固而很快死亡。 低温时，精子的代谢活动受到抑制，当温度恢复时，仍能保持活力，继续进行代谢，这正是精液冷冻和低温保存的主要理论依据。

（二）渗透压 精液的渗透压以冰点下降度表示，一般在-0.6 ℃； 高渗透压容易引起精子细胞内水分的脱出，致使尾部呈锯齿状，头部缩小； 低渗透压则使精子头部膨大，尾部圆形弯曲； 一般来说，低渗比高渗危害更大。

（三）PH值 各种动物精液PH都有一定的范围。 弱酸性环境，精子呼吸作用、糖酵解作用降低，活动受到抑制，利于精子存活； 弱碱性环境，呼吸作用、代谢活动、精子运动都增强，以至容易耗费能量，存活时间不能持久； 在精液保存时，常加入一些缓冲剂，如柠檬酸盐，磷酸盐以维持弱酸性，防止PH值改变。

（四）光照与辐射 日光对精子的有害作用，主要是对精子引起光化学反应，产生过氧化氢引起精子中毒，造成精子死亡。尤其是直射光线。 紫外线不仅降低精子受精能力，而且可杀死精子，所以实验室的日光灯，对精子仍是有不良影响。 X射线也有破坏，杀死精子的作用。 一般要求精液避光保存。

（五）电解质 离子浓度影响精子的代谢和运动。一般阴离子对精子的损害力大于阳离子。 离子浓度还对渗透压和PH有较大影响。 少量的离子浓度能促进呼吸、糖酵解和运动，大量时对精子的代谢和运动有抑制作用。 精液保存中要降低离子浓度。

（六）常用化学药物 一些消毒剂、防腐剂、具有挥发性异味的药物对精子都有破坏作用。 在精液处理中加入一些化学物质，需注意浓度与纯度。

任务五 精液品质检查技术

一、检查的目的 检查精液品质的优劣，判定种公畜的配种能力 检查公畜的繁殖问题 确定精液可稀释的倍数 检查精液的处理方法是否正确

二、精液品质的外观检查 射精量 色泽 气味 云雾状 PH值 美兰退色试验

射精量 射精量是指每次射精的体积。 影响射精量的因素：种类、睾丸大小质地、季节、健康状况。 不同畜种的正常射精量：射精量（ml）牛5-10、猪200-300、羊0.8-1.5、马30-100。 射精量过少：采精过频、性机能衰退、睾丸炎、发育不良； 射精量过多：副性腺发炎、假阴道漏水、尿潴留、采精操作不熟练。

色泽 色泽是指精液的颜色及其浓厚程度，乳白色越浓，密度越好。 正常精液色泽：猪浅灰白至白色、牛羊乳白色或乳黄色。 不正常色泽 鲜红：生殖道下段出血或龟头出血； 暗红：副性腺或生殖道出血； 绿色：副性腺或尿生殖道化脓； 褐色：混有尿液。

气 味 正常的精液：应没有很浓的气味，或略带动物特有的腥膻味。 腥味：有脓液； 臊味：有尿液或包皮液。

云雾状 是指新鲜精液在33-35℃ 温度下，精子成群运动所产生的上下翻卷的现象。 云雾状的明显程度代表高浓度的精液中精子活力的高低。

三、 精液品质的显微镜检查 活力检查 密度测定 畸形率检查 形态检查 顶体检查 其它检查

精子活力检查 概念：37℃下，精液中前进运动精子占总精子数的百分率。 评定方法：用0-1.0的十级评分法。 检查方法 估测法 染色法 GOT测定 各种精液活力标准：原精液0.7-0.8，保存后液态精液0.5-0.6以上，冷冻精液0.3-0.35以上。

牛精子活力估测法检查的程序 用100-400倍观察 活力记录 活力估测 镜检 取样检查 精液稀释 按10级制评分和记录 载玻片预温 将恒温加热板放在载物台上，打开电源并调整控制温度至37℃，然后放在载玻片 用100-400倍观察 活力估测 镜检 取样检查 精液稀释 按10级制评分和记录 载玻片预温 判断视野中前进运动精子占的百分率 取10ul放在预温后载玻片中间，盖上盖玻片 将生理盐水与精液按1:10稀释等温

染色法 原理：伊红或刚果红容易透过死亡精子细胞膜而使其着色，活精子不能着色。 显微镜下计数不着色精子所占百分率即精子活率。

精子死活染色程序 苯胺黑 伊红 精液 与苯胺黑混合后抹片 精液与伊红先混合

GOT法 原理：GOT（谷草转氨酶）存在于精子细胞质中，当精子死亡时则释放到精清中，因此测定同密度的精液精清中GOT含量右间接估计精子活率。

精子密度检查 单位体积精液中所含的精子数。用个/ml 或亿/ml表示。 检查方法 估测法 计数法 比色测定法

密度估测法 密：精子之间看不清间隙 中：精子之间可容纳一个精子宽度 稀：精子之间间隙大于一个精子宽度 密度 羊 牛 猪、马 密 >25亿/ml >10亿/ml >2亿/ml 中 20-25亿/ml 8-10亿/ml 1-2亿/ml 稀 <20亿/ml <8亿/ml <1亿/ml

精子密度的计数板测定法 精子密度计数板(器)简介 精液的稀释 精液注入计数室 精子计数 精子密度计算

精子密度计数板(器)简介 精子计数室长宽各1mm，面积1mm2高度0.1mm，体积0.1mm3； 由双线或三线组成25个(5X5)中方格； 共计400个小方格。

精子计数室及一个中方格

精液的稀释 将精液注入计数室前必须对精液进行稀释，以便于计数。 稀释液为3%氯化钠溶液，用以杀死精子，便于计数。 稀释的比例根据动物精液的密度范围确定。 用5-25ul移液器和100-1000 ul移液器，在小试管中进行组合不同的稀释。如牛精液稀释100倍，为5ul原精+500ul稀释液。 也可用血细胞稀释管稀释。

各种家畜精液建议稀释比例 畜种 牛 羊 猪 马 鸡 稀释倍数 100 200 40 400 原精液 ul 5 3%氯化钠ul 500 1000 2000

精液注入计数室 将洁净的计数板放在载物台上固定好，盖上干净的盖玻片。 取25ul稀释后的精液，将吸咀放于盖玻片与计数板的接缝处。 缓慢注入精液，使精液依靠毛细作用吸入计数室，不要过多。

注意：让稀释后的精液通过毛细作用自行吸入！ 共有两个对称的计数室 用吸管稀释后精液注入计数室 注意：让稀释后的精液通过毛细作用自行吸入！

用移液器注入精液

精子计数 计数板固定在显微镜的推进器内，用100倍放大找到计数室，再用400倍找到计数室的第一个中方格。 计数左上角至右下角五个中方格的总精子数，以精子的头部为准，依数上不数下，数左右不数右的原则进行计数格线上的精子。

进行精子计数的中方格数可以是四角一中心共5个中方格 也可以是从左角到右下角五个中方格

以图示次序计数，精子的头部为准，依数上不数下，数左右不数右的原则进行计数格线上的精子。白色精子不计数

计算精子密度 精子密度=5个中方格总精子数 ×5×10×1000 × 稀释倍数

例：牛精子密度测定程序 密度计算 精子计数 计数板和盖玻片一定要清洁 镜检 精液注入 取样稀 计数室 释精液 放计数板 于载物台上 = 5个中方格总精子数×5×10×1000 × 100 取25ul小心地从计数板与盖玻片的接缝中加入,使其自行吸入计数室中 密度计算 精子计数 计数板和盖玻片一定要清洁 镜检 精液注入 计数室 取样稀 释精液 放计数板 于载物台上 计数五个中方格的总精子数，计数以头部为准，在格线上的数上不数下，数左不数右 先低倍后高倍用100-400倍观察 取500ul 3%氯化钠于小试管中，加入5ul原精液，混合均匀 例：牛精子密度测定程序

比色测定法 原理：精子密度越大，透光率越低。 用光电比色计测定精液样品540nm波长光线透光率，再与标准曲线比较确定。 初次测定时要先计数法测定密度，再建立标准曲线。

1.光源 2.透镜 3.聚光孔 4.样本 5.电流表 6.放大器 7.光电管 8.基准控制 光电比色计图示

畸形率检查 畸形率检查可用龙胆紫酒精染色法进行，也可用美兰、纯兰或红墨水染色。 染色前原精液要用0.9%NaCl适当稀释，一般牛：1:10 、羊:1:20、猪: 1:2倍稀释。 检查过程包括抹片→固定→染色→镜检→计数等步骤。 牛不超过18％；水牛15％；猪15％；羊14％；马12％。

畸形率种类 头部膨大、头部小于正常、双头、头部不完整 尾部折回、尾部卷曲、尾部套索、双尾、断尾 有近端原生质小滴

双头和双尾精子

抹片 左手食指和拇指向上捏住载玻片两端，使载玻片处于水平状态，取10ul稀释后的精液滴至载玻片右侧。右手拿一载玻片或盖玻片，使其与左手拿的载玻片呈向右的45度角，并使其接触面在精液滴的左侧。将载玻片向右拉至精液刚好进入两载（盖）玻片形成的角缝中，然后平稳地向左推至左边。 抹片后，使其自然风干。

固定与染色 在抹片上滴95%的酒精数滴，固定4min，甩去多余的酒精。

检查计数畸形率 将载玻片放在400倍的显微镜下进行观察，共记录若干个视野100-200个左右的精子。 计算所查精子中畸形精子所占百分率。

只有前进运动，且顶体完整的精子才有受精能力。 可用姬姆萨染色法检查顶体完整性。 顶体畸形率检查 录象链接 只有前进运动，且顶体完整的精子才有受精能力。 可用姬姆萨染色法检查顶体完整性。 染色方法：抹片—干燥—10%甲醛固定10分钟—水洗干燥—姬姆萨染色1-2小时—水洗干燥—树脂封装—1000倍显微镜检查—计数完整顶体百分率。 原精液牛不高于14.1％、猪4.3％、冻精牛60％。

精子存活时间和存活指数检查 在进行精液保存方法试验时必须的检查。 精子存活时间：精子的绝对存活时间。 精子存活指数：相邻二次检查的平均活力×检查间隔时间的累加总和。

精液的微生物学检查 平板培养法，37℃24h。 解冻后牛精液应无病原微生物； 每毫升中菌落数少于1000个、不得检出病原菌。

全自动精子分析仪 法国IMV卡苏公司 可检测密度、活力、畸形、精子运动轨迹、储存、输出检测数据等

精液品质检查实验 精液品质颜色、气味、云雾状运动检查 精液活力、密度的估测 精液活力的死活染色检查 精液密度的计数与比色测定 精子畸形率染色检查

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