第13章 生物药物分析概论 中国药科大学药物分析教研室

生物药物理化测定法：HPLC法、酶法、电泳法 本章主要内容 生物药物种类与特点 生物药物质量检验的基本程序与方法 生物药物理化测定法：HPLC法、酶法、电泳法 中国药科大学药物分析教研室

一、概述 生化药物 生物制品 （生物技术药物） 分类没有严格的界限 生物药物（biopharmaceuticals）：利用生物体、生物组织和器官制得的天然活性物质及其类似物 生物制品 （生物技术药物） 分类没有严格的界限 中国药科大学药物分析教研室

生化药物biochemical drugs 动植物及微生物提取、分离的天然生物活性物质及半合成得到生命基本物质及其衍生物等 人纤维蛋白原 氨基酸、Pr类 凝血酶、胰蛋白酶 酶、辅酶类 肝素、玻璃酸 多糖类 脂类 核酸类 中国药科大学药物分析教研室

生物制品biological products 应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备的药品 菌苗、疫苗、类毒素 免疫血清 其他（血液制品、组织制品等） 自动免疫制品 诊断制品 中国药科大学药物分析教研室

基因工程药物 biotechnology drugs 利用重组DNA等生物技术生产的药物 分离纯化 受体细胞表达该Pr 将该基因导入受体细胞 分离或合成控制该Pr合成的基因 发现并确定有治疗作用的Pr 中国药科大学药物分析教研室

重组胰岛素原的合成 胰脏 (A)n 胰岛素原mRNA cDNA 重组质粒 转化细菌 mRNA 反转录酶 胰岛素原基因 与质粒连接 感染E.coli 胰岛素原 中国药科大学药物分析教研室

基因工程药物主要类别 蛋白质多肽类： 激素类及神经递质类 细胞因子类 酶及凝血因子类 核酸类： 反义寡核苷酸 等 人生长激素释放抑制因子（Human Somatotin） 干扰素（Human Interferons） 链激酶（Streptokinase） 中国药科大学药物分析教研室

3）全过程的质量控制：从原料、菌种到生产设备、中间体、产品 4）生物活性检查 5. 生化药物和基因工程药物特点 1）共同特点：活性强，毒副作用小 2）分子量大，结构确证难 3）全过程的质量控制：从原料、菌种到生产设备、中间体、产品 4）生物活性检查 5）安全性检查：异常毒性检查、过敏物质检查、外源性DNA残留量、宿主菌蛋白残留量等 6）效价（含量）测定 中国药科大学药物分析教研室

二、检验的程序和方法 收录于《中国药典》和《中国生物制品规程》 杂质检查 安全性检查 含量（效价）测定 鉴别 中国药科大学药物分析教研室

1.鉴别 反应序列信息 RP-HPLC法分析重组人胰高血糖素类多肽－1（7－36）肽图谱 标准品 1）理化鉴别法：UV、肽图等 RP-HPLC法分析重组人胰高血糖素类多肽－1（7－36）肽图谱 《药物分析杂志》2005，25(1)24-26 标准品 样品 胰蛋白酶酶解 V8蛋白酶酶解 rhGLP-1(7-36)由30个氨基酸组成，结构中含2Lys、1Arg、1Asp、3Glu 中国药科大学药物分析教研室

免疫双扩散法 专属性强，应用广泛 2）生化鉴别法：免疫法、酶法、电泳法等 3）生物鉴别法：动物试验等 SDS-PAGE Marker Sample 116.0k 66.2k 45.0k 35.0k 25.0k 18.4k 14.4k 免疫双扩散法 3）生物鉴别法：动物试验等 中国药科大学药物分析教研室

高效凝胶过滤色谱法(High Performance Gel Filter ，HPGFC）、RP-HPLC 2. 杂质检查 1）一般杂质：氯化物、重金属、水分等 2）特殊杂质：有关物质等 高效凝胶过滤色谱法(High Performance Gel Filter ，HPGFC）、RP-HPLC 萄聚糖凝胶 立体网状结构图 中国药科大学药物分析教研室

1.右旋糖酐蓝 2.醛缩酶 3.血清白蛋白 4.碳酸酐酶 5.抑蛋白酶肽 6.酪氨酸 标准蛋白色谱图 时间(min) 4 8 12 1 6 5 3 2 1.右旋糖酐蓝 2.醛缩酶 3.血清白蛋白 4.碳酸酐酶 5.抑蛋白酶肽 6.酪氨酸 中国药科大学药物分析教研室

《药物分析杂志》2005，25（3）253-257 Synmetry 300 C18柱（3.9×150mm） 重组人肿瘤坏死因子相关调亡诱导配体（rhTRAIL）质控方法和质量标准的研究 《药物分析杂志》2005，25（3）253-257 Synmetry 300 C18柱（3.9×150mm） 中国药科大学药物分析教研室

3. 安全性检查 1）热原检查 家兔法、鲎试剂法 2）降压物质检查 3）过敏试验 4）异常毒性试验 豚鼠、大鼠存活试验 5）无菌试验 1）热原检查 家兔法、鲎试剂法 2）降压物质检查 3）过敏试验 4）异常毒性试验 豚鼠、大鼠存活试验 5）无菌试验 6）宿主细胞蛋白残留、DNA残留 ELISA法 中国药科大学药物分析教研室

4. 含量（效价）测定 例：蛋白质含量测定（ChP2005三部） 凯氏定氮法 Lowry法 双缩脲法 1）理化分析法： 重量法、滴定法、 电化学法、光谱法 色谱法（HPLC法） 例：蛋白质含量测定（ChP2005三部） 凯氏定氮法 Lowry法 双缩脲法 中国药科大学药物分析教研室

2）生化分析法 酶法： 免疫分析法 酶活力测定法 以酶为分析对象进行分析 酶分析法 以酶为分析工具或分析试剂 的分析方法 酶活力测定法 以酶为分析对象进行分析 酶分析法 以酶为分析工具或分析试剂 的分析方法 中国药科大学药物分析教研室

测定效价时采用参考品，体内、体外方法测定活性，计算效价IU 同时测定蛋白含量，计算特异比（比活性，IU/mg） 3）生物检定法 药物对生物体或离体器官所起的生物活性 测定效价时采用参考品，体内、体外方法测定活性，计算效价IU 同时测定蛋白含量，计算特异比（比活性，IU/mg） 中国药科大学药物分析教研室

例：冻干基因工程α1b干扰素制造及检定规程 本品系用从健康人白细胞中获得的α1b干扰素基因重组质粒，传染大肠杆菌，使之高效表达人α1b干扰素，经高度纯化后冻干制成。用于治疗慢性乙型肝炎、丙型肝炎和毛细胞白血病等疾病。　 主要包括以下内容： 1 菌种 2 发酵 3 收菌 4 菌体裂解与粗制干扰素制备 5 浓缩与纯化 6 稀释、除菌过滤 7 半成品检定 8 除菌半成品检定 9 成品检定 10规格 11保存与效期 12 冻干基因工程α1b干扰素使用说明书 中国药科大学药物分析教研室

半成品和成品的检验项目包括： 鉴别： 检查： 分子量测定 纯度： 1电泳纯度 肽图测定 等电聚集 2高效液相色谱纯度 紫外光谱扫描 pH值 外观 检查： 纯度： 1电泳纯度 2高效液相色谱纯度 pH值 水分 中国药科大学药物分析教研室

含量： 安全性检查： 效价测定：细胞病变抑制法 残余外源性DNA含量 残余IgG含量 蛋白含量 残余工程菌蛋白含量 比活性 抗生素活性 无菌试验 热原质试验 异常毒性 中国药科大学药物分析教研室