等温滴定量热法(ITC) 美国通用电气公司 英国马尔文公司 报告人:宾艳南(安徽大学健康院)
等温滴定量热法(Isothermal Titration Calorimetry,简称ITC) 什么是等温滴定量热法? 等温滴定量热法(Isothermal Titration Calorimetry,简称ITC) 定义: 将反应物逐次滴定到含有反应所必须的另一反应物的样品溶液中,ITC测量每次滴定后反应所放出或吸收的热量的一门技术。 等温滴定量热法所测得的 曲线称为ITC曲线 横坐标:时间t,单位为s 纵坐标:热量Q, 单位通常为μcal/s Q=f(t)
ITC重要概念 重要概念 滴定溶液(injectant):反应所需的一种反应物 样品溶液(sample):反应所需的另一种反应物 反应过程的热量的检测: 通过测量使样品池和 参比物池达到等温状 态(ΔT~0)所需的功率 变化来实现。
ITC的工作原理
ITC检测实验 “配体”放在进样针中,“大分子”放于样品池,测量反应热 引起结合反应的可能作用包括: 范德华作用 疏水作用 氢键 …… 亲和常数(KD) 反应引起的焓变(ΔH) 结合位点的数目(N) 反应引起的熵变(ΔS)
进行ITC实验
进行ITC实验
进行ITC实验
进行ITC实验
进行ITC实验
进行ITC实验
进行ITC实验
进行ITC实验
ITC实验解析 反应完成前:每次滴加会产生一个ITC峰;随着反应进行,被测分子逐步被配体饱和,ITC峰减小。 逐次,等量滴加 通过将原始ITC曲线积分,可计算: 解离常数(KD) 反应的化学计量比(N) 反应焓变(ΔH) 反应吉布斯自由能(ΔG) 反应熵变(ΔS)
ITC实验解析 通过将原始ITC曲线积分,可计算: 解离常数(KD) 反应的化学计量比(N) 反应焓变(ΔH) 反应吉布斯自由能(ΔG) 反应熵变(ΔS)
ITC实验解析 Wiseman c-parameter 解离常数与ITC实验设计的关系
ITC的应用范围
ITC实验解析:结合机制的探索 疏水作用 氢键和范德华力
ITC实验举例 促凋亡多肽BAD-like比BAX强接近6倍。
ITC实验举例
ITC实验举例
ITC实验举例
ITC实验举例
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