p73基因在急性白血病的表达及临床意义 学生：李茜汝 导师：苏丽萍 教授 山西省肿瘤医院血液科 2010.4

研究背景 研究目的 实验结果及讨论 结 论 研究方法 1 研究背景 研究目的 2 3 实验结果及讨论 4 结 论 5 研究方法

研究背景 白血病（leukemia）是一类造血干细胞的恶性克隆性疾病。目前，白血病的确切病因尚不明了，但肿瘤的发生均与肿瘤相关基因的异常表达密切相关，异常表达的肿瘤相关基因所产生的蛋白质由于不适当地模拟正常蛋白的生长作用方式及细胞生长、分化紊乱，而导致肿瘤发生。如何提高白血病诊断及治疗水平，提高患者生存质量，一直是医生十分关注的问题。

研究背景 P53抑癌机制 抑癌基因 p53 p73基因 一些肿瘤中，则有 其它的因素改变阻 断p53的功能以促进 肿瘤的发生—— 代谢 过程 细胞 增殖 DNA 转录 生长

研究背景 p73基因是1997年Kaghad等在筛选介导胰岛素信号传递因子(IRS21)时偶然发现的，定位于人类1号染色体1p36.33。测序发现其序列与p53基因有高度同源性。 1p36是多种人类肿瘤基因缺失热点区域，且认为该区存在多个抑癌基因。由于其特殊定位及其与p53基因结构和功能的高度同源性，p73基因被认为可能是抑癌基因。 但有学者提出p73基因在肝癌、结肠癌、膀胱癌组织中表达明显增高，其表达水平与肿瘤恶性程度明显相关。而且p73基因在不同肿瘤中表达水平差异很大，显示了抑癌基因和癌基因的双重特性。

cancer 研究背景-p73的作用机制 低水平或 失表达 过度表达 抑癌基因作用 癌基因 作用 c2Abl 酪氨酸激酶可使P73 蛋白的半衰期延长或蛋白磷酸化导致P73 蛋白过表达。发挥对细胞生长的抑制和凋亡作用。 p73基因由于高甲基化而表达缺失。可能是高甲基化改变了基因构型，影响DNA特异序列与转录因子结合，使基因不能转录。 p73基因的缺失：p73基因存在杂合性缺失（LOH）。

在恶性肿瘤中，p73基因在不同类型细胞的肿瘤中有不同的生物学行为， 研究背景-相关肿瘤研究 在恶性肿瘤中，p73基因在不同类型细胞的肿瘤中有不同的生物学行为， 软组织 肉瘤 血液系统 恶性肿瘤 乳腺癌 宫颈癌 膀胱癌 前列腺癌 p73 肺癌

研究目的 检测成人急性白血病（AL）患者p73基因mRNA的表达情况,从而探讨p73基因与白血病发病、复发及预后的关系，为成人AL的临床治疗提供更有意义的指导作用。

研究方法及实验技术 选取2008年6月-2009年3月期间在山西医科大学第二医院及山西省肿瘤医院血液科住院的初治及复发或难治急性白血病患者100例，经临床及骨髓涂片细胞形态学、细胞化学检查，按张之南主编《血液病诊断及疗效标准》确诊。 包括初发未治64例，复发或难治36例，按FAB分型，急性髓细胞白血病(AML)80例(M2 ,12例；M3 ,35例；M4 ,18例；M5 ,9例；M6 ,6例)，急性淋巴细胞白血病(ALL)20例。其中男60例，女40例，中位年龄40岁(9～65岁)。对照组为20例非白血病(NL)且骨髓象正常者。

研究方法及实验技术 AML疗效标准

研究方法及实验技术 TRizol一步法提取总RNA RT反转录 确诊AL患者100例及正常对照者20例骨髓标本2ml TRizol一步法提取总RNA RT反转录 琼脂糖凝胶电泳 随机引物逆转录合成cDNA； AMV逆转录酶系合成 计算p73 mRNA在AL细胞及不同细胞类型中表达的阳性率及强度，结合临床分型、治疗 效果及预后进行统计学分析

研究方法及实验技术 采用SPSS13.0统计软件对结果进行统计学分析。 对p73 mRNA在AL细胞及不同细胞类型中表达的阳性病例组与正常对照组阈值进行t检验，不同类型AL阳性率比较进行X2检验，阳性表达强度进行单因素方差分析。 P<0.05时说明差异具有统计学意义。

实验结果及讨论 M 1 2 3 4 5 6 M 注：M（marker）；1（阴性对照）；2~6（AL中p73 mRNA的表达）； p73扩增产物长度为390bp 图3 RT-PCR检测p73 mRNA表达

表2 不同类型AL及对照组细胞中p73 mRNA的表达 实验结果及讨论 表2 不同类型AL及对照组细胞中p73 mRNA的表达 组别 总例数 阳性例数 p73表达阳性率(%) p73/β-actin AL 100 49 49.0 0.63±0.65 ALL 20 4 20.0 0.42±0.12 AML 80 45 56.3 1.22±0.93 M2 12 6 50.0 0.46±0.22 M3 35 18 51.4 0.73±0.46 M4 10 55.6 0.53±0.44 M5 9 7 77.8 1.44±1.13 M6 66.7 0.62±0.48 NL 0.43±0.26 一般预后 56 22 39.3 1.19±0.52 不良预后 28 71.4 1.82±0.48

实验结果及讨论

实验结果及讨论 在AML中，p73基因表现为过度表达，起着癌基因样作用。 1. p73基因的失表达在ALL中是高频率发生事件，在其形成中起着抑癌基因作用。 在AML中，p73基因表现为过度表达，起着癌基因样作用。 AML细胞p73 mRNA表达 阳性率56.3% 两组差异显著,有统计学意义 ALL细胞p73 mRNA表达 阳性率20.0%

2.分别比较ALL及AML患者一般预后组与不良预后组p73 mRNA表达率及强度的差异，均具有统计学意义(P<0.05) 。 实验结果及讨论 2.分别比较ALL及AML患者一般预后组与不良预后组p73 mRNA表达率及强度的差异，均具有统计学意义(P<0.05) 。 这说明了p73基因是AL中一个新的生物学预后因子 这也证实了尽管ALL组与AML组患者初诊时及治疗后p73基因的表达情况不同，但都与其预后有密切关系

结 论 p73基因在不同类型白血病发病及预后中起的作用不同： p73基因在ALL患者初诊时有较高的阴性表达率，并在病情缓解后转为阳性表达，起着抑癌基因样作用；与之相反，在AML患者中p73基因高水平表达，且其表达水平随病情的缓解而降低，表现为癌基因样作用。

结 论 p73基因的表达在急性白血病的发病中均起着重要作用，且多与较差的预后特征、对化疗反应差、早期治疗失败、较短的生存期有关。 结 论 p73基因的表达在急性白血病的发病中均起着重要作用，且多与较差的预后特征、对化疗反应差、早期治疗失败、较短的生存期有关。 通过动态检测AL患者p73基因的表达情况，从而尽早决定是否需要使用更有效的治疗手段(如骨髓移植BMT)或针对p73基因进行基因治疗，有希望提高急性白血病的治愈率。

参考文献 [1]李陕区,崔大祥,刘变英等.结肠癌中P73基因改变的意义[J].第四军医大学学报,2000; 21:314-316. [2] Liu M,Taketani T,Li R ,et al.Loss of p73 gene expression in lymphoid leukemia cell lines is associated with hypermethylation[J].Leuk Res,2001,25(6):443. [3] Roman Gomez J,Jimenez-Velasco A,Castillejo JA,et al.Promoter hypermethylation of Related genes: a strong independent prognostic factor in acute lymphoblastic leukemia[J]. Blood,2004,104(8):2492-2498. [4] Bell HS,Dufes C,O′Prey J,et al.A p53-derived apoptotic peptide derepresses p73 to cause tumor regression in vivo.[J].J Clin Invest,2007,117(4):1008-1018. [5] Chi SG,Chang SG,Lee SJ,et al.Elevated and biallelic expression of p73 is associated with progression of human bladder cancer[J].Cancer Res,1999;59:2791-2793. [6] Mendrysa,S. M.,K. A. O’Leary, M. K. McElwee, et al. Tumor suppression and normal aging in mice with constitutively high p53 activity[J].Genes Dev.2006.20:16-21. [7]何勇,童玲,范士志,等.p73基因与人类肿瘤的研究进展[J].肿瘤防治杂志,2005,12 (7):551-554.

参考文献 [8]刘明利,李蓉生,林泰秀,等. 儿童急性淋巴细胞白血病患者p73基因表达的研究[J].中华血液学杂志,2000,23(5):242. [9]殷小成,曹励之. p73基因失活在儿童急性淋巴细胞白血病发病和预后的意义[J].实用癌症杂志,2003,18(3):240-244. [10] Mingli liu.Taketani Loss of p73 gene exp ression in lymphoid leukemia cell lines is associated with hypermethylation[J].Leukemia Research,2000,25(6):441-447. [11]殷小成,曹励之. p73mRNA在急性淋巴细胞白血病细胞中的表达及其临床意义[J].中华儿科杂志,2004,42(7):529. [12] Corn PG,Kuerbiitz SI,Van NoeselMM,et al.Transcriptioral silencing of yhe p73 gene in acute lymphoblastic leukemia and Burkitt’s lymphoma is associated with 5’CpG island methylation[J].Cancer Res,1999,59(14):3352-3356. [13]张之南,主编.血液病诊断及疗效标准[M].第三版 北京:科学出版社,1998,214-218.

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