第三节 动物细胞工程 细胞融合和单克隆抗体 南京中华中学 生物组 张萍
1970年，有两位科学家做了人—鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜上的蛋白质分子是运动的。 那么，如何实现动物细胞的融合，以及动物细胞融合后还有什么用途呢？
三.细胞融合与单克隆抗体 （一）动物细胞融合 1、概念 在一定条件下将2个或多个细胞融合为一个细胞的过程。 2、促融方法 物理法、化学法、生物法
3、应用 制备单克隆抗体
植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 原理 融合 前提 诱导 手段 用 途 相同 植物 体细胞 杂交 动物 细胞
植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 原理 融合 前提 诱导 手段 用 途 相同 植物 体细胞 杂交 细胞膜的流动性 细胞的 全能性 去除 细胞壁 电场法 聚乙二醇法 获得 杂种植株 克服远源杂交不亲和 都有 杂种 细胞 形成 动物 免疫 处理 正常 小鼠 同上， 灭活 病毒 杂种细胞 制备 单克隆抗体
1.植物体细胞杂交和动物细胞融合比较，正确的是（ ） 诱导融合的方法完全相同 B. 所用的技术手段基本相同 C. 所采用的原理完全相同 D. 都能形成杂种细胞 D
2.下图可表示细胞融合技术的一些过程，请据图回答： （1）若A、B细胞为动物细胞，从A和B到C的过程中，常用 ____来诱导融合。A、B融合为C的过程说明了细胞膜具有 。 （2）若A、B细胞为植物细胞，那么这样的细胞已经用酶解法去除了 。这种酶可能_______酶，由此生成的A和B细胞称为 。形成的D细胞还要应用_______________技术把D培养成植株. A C D B 灭活的病毒 流动性 细胞壁 纤维素 原生质体 植物组织培养
（二）单克隆抗体 背景知识： 抗体 B淋巴细胞 免疫过程 B淋巴细胞(B lymphocytes)： 接受抗原刺激后，能分泌针对该抗原的特异性抗体，在体液免疫中具有重要功能。 B淋巴细胞本身是一种高度分化细胞，通常不再进行细胞分裂，存活一段时间后便会死亡
肿瘤细胞（癌细胞） 骨髓瘤细胞 (myeloma cells): 恶性增殖的转化细胞，只要营养条件适合可无限增殖和存活。 经筛选与驯化，现已建立多种骨髓瘤细胞系。
科学家的发现 阿根廷科学家米尔斯坦（Cesar Milstein，1926—）和德国科学家柯勒（Georges Kih1er，1946—）在前人工作的基础上，继续探索和尝试，并且充分发挥想象力，设计了一个极富创造性的实验方案。他们想到，如果用一种能在体外培养条件下大量增殖的细胞，如小鼠骨髓瘤细胞，与某一种B淋巴细胞融合，所得到的融合细胞就能大量增殖，产生足够数量的特定抗体。
阅读思考： 在单克隆抗体的制备过程中，有几次筛选？ 每次筛选的目的是为了获得什么样的细胞？ 提取单克隆抗体的方法有几种？
1、单克隆抗体制备过程 细胞融合 杂交瘤细胞 杂交细胞是否产生特异性抗体 产生特异性抗体的杂交细胞 得到单克隆抗体（有两种方法） 培养基选择 第一次筛选 杂交瘤细胞 第二次筛选 检验 杂交细胞是否产生特异性抗体 克隆 产生特异性抗体的杂交细胞 得到单克隆抗体（有两种方法）
优点：特异性强、纯度高、灵敏度高、产量大、容易标准化生产等 2、单克隆抗体的优点及应用 由单一克隆的杂交瘤细胞分泌的抗体，只针对于一个抗原决定簇——单克隆抗体(monoclonal antibody, MAb) 优点：特异性强、纯度高、灵敏度高、产量大、容易标准化生产等 应用： 用于治疗各种肿瘤； 用于治疗由于免疫系统紊乱导致的疾病； 用于运载药物（生物导弹） “生物导弹”＝单克隆抗体＋药物
科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） 科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（ ） A.经过免疫的B淋巴细胞 B.没经过免疫的T淋巴细胞 C.经过免疫的T淋巴细胞 D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞 A
动物免疫 细胞融合 混合细胞的HAT筛选) 分泌X抗体 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 X抗原 瘤的突变株 培养数天后细胞死亡 无限生长细胞 分泌 X抗体 只有杂交瘤细胞可长期存活下来 BALB/c 培养上清中X抗体的检测 克隆化培养 单克隆杂交瘤细胞培养上清中X抗体的检测 杂交瘤细胞可持续分泌单克隆抗体 规模化培养 获得大量单克隆抗体
小结:本章知识体系 课后练习