实验十二 血糖浓度的测定 生物化学与分子生物学教研室
【实验目的】 1.巩固复习血糖的相关知识。 2.掌握分光光度计的原理及使用。 3.掌握测定血糖浓度的方法。
血糖及血糖水平的概念 * 血糖，指血液中的葡萄糖。 * 血糖水平，即血糖浓度。 正常血糖浓度 ：3.89-6.11mmol/L
血糖 血糖来源和去路 食 物 糖 氧化分解 CO2 + H2O 消化，吸收 糖原合成 肝（肌）糖原 分解 肝糖原 磷酸戊糖途径等 其它糖 非糖物质 糖异生 脂类、氨基酸合成代谢 脂肪、氨基酸
【实验原理】 1.分光光度技术 （Absorption Photometry） 利用物质的光吸收特性进行含量分析与性质鉴定的技术
颜 色 浓 度 用颜色进行定量分析 颜色如何量化？
溶液的颜色：由于物质的结构不同，会选择性吸收特定波长的单色光 同种溶液颜色越深，吸光能力越强
颜 色 浓 度 吸光能力 浓 度 用吸光能力进行定量分析 如何检测吸光能力？
分光光度计工作示意图
朗伯-比尔定律 A — 吸光度(Absorbance) C — 溶液浓度 L — 液层厚度 K — 吸光系数 无色溶液适用吗？
定性 物质的光吸收曲线（吸收光谱） 最大吸收光 直接反映物质对各单色光的吸收情况 间接反映物质的结构特点
未知浓度的测定 标准溶液法 标准溶液与待测溶液的吸光度进行比较 标准曲线 标准曲线法 测出不同浓度标准溶液的吸光度，绘制标准曲线 例：
样品池 (比色杯) 检测系统 光源 单色器 国产721型分光光度计
【实验原理】 2. 血糖浓度测定的原理 葡萄糖的醛基与邻甲苯胺在热醋酸溶液中缩合成葡萄糖基胺，再脱水生成希夫氏（Schiff）碱，然后经分子重排，生成一组蓝绿色化合物， 在630nm处有一吸收峰，吸光度大小与血糖浓度成正比。
【试剂与器材】 【试剂】 1．邻甲苯胺试剂：新配试剂应放置24小时后（待老化）使用。此试剂腐蚀性极强，应避免与皮肤接触而造成灼伤。 2．葡萄糖标准应用液（5mmol/L）准确吸取葡萄糖标准贮存液5.0ml，置于100ml容量瓶中，再以12mmol/L苯甲酸溶液稀释至刻度。 【器材】 水浴箱，分光光度计，试管，烧杯，容量瓶。
【步骤】 1.选试管3支，分别标以“测定”、“标准”和“空白”，然后按下表操作。 加入物（ml） 测定管 标准管 空白管 血清 葡萄糖标准应用液 蒸馏水 邻甲苯胺试剂 0.1 — 5.0 2.将上述各管分别混匀后，置沸水浴中煮沸12分钟，取出用自来水流水冷却5分钟。 3.用分光光度计，在波长630nm下，以空白管调零，读取各管吸光度。 【参考值】 3.89～6.11mmol/L（70～110mg/dl）
【临床意义】 1．饭后1～2小时、摄入高糖食物后、情绪紧张导致肾上腺素分泌增加时，均可出现高血糖。此为生理性高血糖。 2．饥饿或剧烈运动后可出现生理性低血糖。 3．糖尿病、对抗胰岛素的激素分泌过多、颅内压增加时可出现病理性高血糖。 4．胰岛β细胞增生或癌瘤、对抗胰岛素的激素分泌不足、严重肝病患者可出现病理性低血糖。
实验十三 尿葡萄糖定性实验 生物化学与分子生物学教研室
【实验目的】 掌握尿糖的检测方法。 【实验原理】 【试剂与器材】 葡萄糖在葡萄糖氧化酶的催化作用下形成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化氢酶的催化作用下形成水和氧，氧可将某种无色化合物氧化成有色的化合物，将上述两种酶和无色化合物固定在纸条上，制成测试尿糖含量的酶试纸。这种酶试纸与尿液相遇时，很快会因为尿液中葡萄糖的含量的少到多而依次呈现浅蓝、浅绿、棕或深棕色。 【试剂与器材】 目测尿糖试纸、尿杯
【步骤】 1.将试纸带浸入尿液中(中段尿液最佳),湿透(约1-2秒钟)后取出; 2.在30-60秒内观察试纸带颜色并与比色板对照,测得结果； 3.结果判断：（试纸由浅蓝到棕红色变化来表示检测结果）浅蓝色表示没有糖尿病，用“-”表示；颜色愈深“+”号愈多,尿糖愈高。 【参考值】 正常应为阴性。 【注意事项】 1．尿液应新鲜，如放置后细菌生长。可分解糖而使结果偏低； 2．不要在尿样中加入防腐剂，尿样不可离心。 【临床意义】 尿糖阳性见于糖尿病、肾性糖尿、甲亢等。内服、注射大量葡萄糖及精神激动等也可致阳性反应。
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