实验一 显微镜油镜的使用和细菌形态的观察 目的要求 显微镜油镜使用的原理 实验材料 实验程序 思考题

目 的 要 求 学习并掌握显微镜油镜的使用技术及维护的基本知识 使用油镜观察细菌的几种基本形态 用悬滴法在高倍镜或油镜下观察细菌的运动

显微镜油镜使用的原理 普通光学显微镜 欧林巴斯（OLYMPUS）生物显微镜 欧林巴斯（OLYMPUS）相差显微镜

普通光学显微镜Ⅰ 显微镜的构造 1.光学部分:接目镜 、 接物镜 、 照明装置(聚光镜、 虹彩光圈、 反光镜等). 它使检视物放大,造成物象. 2.机械部分:镜座、镜臂、镜筒、物镜转换器、载物台、载物台转移器、粗调节器、细调节器等部件.它起着支持 调节 固定等作用.

普通光学显微镜Ⅱ 显微镜的放大倍数和分辨率 1.放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率 是表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力，可用公式表示为： D=λ/2n·sin(α/2 ) 式中D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。 ：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折射率。 ：镜口角（即入射角）。

普通光学显微镜Ⅲ 油镜使用的原理 油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。

实 验 材 料 显微镜（显微镜灯）、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸等。 细菌三种形态的染色标本。 实 验 材 料 显微镜（显微镜灯）、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸等。 细菌三种形态的染色标本。 培养12—18h的枯草杆菌（B.subtilis) 盖玻片、凹玻片、接种环、酒精灯。

实验程序Ⅰ（显微镜的使用） 主要是油镜的使用 1.用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。 2.调节光亮度 3.低倍镜观察：粗调、细调 4.依次再进行中倍、高倍观察 5.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。 6.换片：另换新片，必须从第三条开始操作。 7.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。

实验程序Ⅱ（显微镜的使用） 显微镜保养和使用中的注意事项： 1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。 5.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单手拿，更不可倾斜拿。 6.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀镜片。

实验程序III 细菌三种基本形态的观察： 菌落形态观察和个体形态观察，这里主要指个体形态的观察。 1. 结合油镜的使用，观察三张细菌染色片（球状菌、杆状菌、和螺旋状菌），边观察边绘图。 2. 看示范镜：观察双球菌、四联球菌，并绘图。

实验程序Ⅲ 细菌运动性的观察（示范）： 一般采用水浸片法、悬滴法、半固体培养法，常用水浸法和悬滴法来观察细菌的运动性。 1. 水浸片法 细菌运动性的观察（示范）： 一般采用水浸片法、悬滴法、半固体培养法，常用水浸法和悬滴法来观察细菌的运动性。 1. 水浸片法 2. 悬滴法

欧林巴斯（OLYMPUS）生物显微镜Ⅰ OLYMPUS生物显微镜是由日本进口的一种双筒光学显微镜，它使用方便，分辨率高，并且有立体感。是目前研究微生物的良好工具。 显微镜的结构

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欧林巴斯（OLYMPUS）生物显微镜Ⅱ （显微镜的使用方法 ） 1. 接通电源。 2. 打开主开关。 3. 移动电压调整旋，使亮度适中。 4. 把标本固定在再物台上。 5. 放松粗调锁挡。 6. 用低倍物镜，旋转粗调和微控制钮来进行对焦。 7. 调节双目镜筒间距和视度差。 8. 再适当调节照明度。 9. 使焦点正确地对准标本。 10. 锁紧粗调锁挡。 11. 调节孔径光栏。 12. 依次用低、中、高倍镜观察。 13. 油镜观察：与普通光学显微镜方法一致。 14. 观察完毕，复原：先将电压调节旋钮复原，关闭主开关，切断电源，放开粗调锁挡。油镜的处理与普通光学显微镜方法一致。 15. 放入保存箱中。

欧林巴斯（OLYMPUS）相差显微镜Ⅰ 相差显微镜的装置 1. 环状光圈 2. 相差物镜（具有环状相板） 3. 定中心望远镜（亦称辅助目镜） 4. 辅助固定扳手 5. 绿色滤光片 相差显微镜的工作原理 相差显微镜具有一个特殊的由环状光圈与聚光镜组合的转盘聚光镜，通过这个特殊的装置，就可把光波的相位差异变为振幅差异，从而使人们肉眼即能观察到活细胞的细微结构，并有立体感。常用来观察活细胞结构，鞭毛的运动等。

欧林巴斯（OLYMPUS）相差显微镜Ⅱ 相差显微镜的使用方法 1. 相差装置的安装 ：转盘聚光镜 绿色滤光片 2. 相差物镜的安装 3. 安放标本 4. 对光 5. 调焦：用粗调控制钮和微调控制钮调节焦，看清物象时为止 6. 旋转相差转盘 7. 中心调节 8. 相差观察

思 考 题 油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？应特别注意些什么？ 使用油镜时，为什么必须用镜头油？ 镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是直接用高倍镜或油镜观察？

实 验 一 结 束