体外扩增的 DC 和 CIK 细胞 在恶性实体瘤中的临床应用 湖南省肿瘤医院大内科主任 罗 以. 前 言㈠ 生物治疗是现代生物技术与临床医学等多学科交 叉融合而形成的针对人类重大疾病进行治疗研究 的新兴领域，在现代分子生物学和基因工程技术 飞速发展的推动下，肿瘤生物治疗迅速发展，成 为肿瘤治疗的第四模式，以调动人体天然防御机.

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1 体外扩增的 DC 和 CIK 细胞 在恶性实体瘤中的临床应用 湖南省肿瘤医院大内科主任 罗 以

2 前 言㈠ 生物治疗是现代生物技术与临床医学等多学科交 叉融合而形成的针对人类重大疾病进行治疗研究 的新兴领域，在现代分子生物学和基因工程技术 飞速发展的推动下，肿瘤生物治疗迅速发展，成 为肿瘤治疗的第四模式，以调动人体天然防御机 制、激发抗肿瘤免疫反应、抑制肿瘤生长或杀伤 肿瘤细胞、防止肿瘤转移复发的独到优势，美国 国际肿瘤生物治疗年会为此宣布：生物治疗是目 前知道的唯一一种有望完全消灭癌细胞的治疗手 段，并已显示出良好的应用前景。 生物治疗是现代生物技术与临床医学等多学科交 叉融合而形成的针对人类重大疾病进行治疗研究 的新兴领域，在现代分子生物学和基因工程技术 飞速发展的推动下，肿瘤生物治疗迅速发展，成 为肿瘤治疗的第四模式，以调动人体天然防御机 制、激发抗肿瘤免疫反应、抑制肿瘤生长或杀伤 肿瘤细胞、防止肿瘤转移复发的独到优势，美国 国际肿瘤生物治疗年会为此宣布：生物治疗是目 前知道的唯一一种有望完全消灭癌细胞的治疗手 段，并已显示出良好的应用前景。

3 肿瘤生物治疗定义 生物治疗（ Biotherapy ），顾名思义，根据肿 瘤生物学特性利用分子生物学技术开发生物药物， 应用于肿瘤防治的全新治疗模式。这种模式以前 曾被称之为 “ 免疫治疗 ” ，但随着分子生物学在肿 瘤防治研究的多层次全方位渗透，尤其是分子生 物学和分子靶向治疗在肿瘤诊断，治疗和预后上 的应用，许多原来归属免疫学范畴的治疗方法已 无法通用于所有生物学治疗技术和方法，故以生 物治疗更能准确概括包括免疫治疗、基因治疗、 分子靶向治疗造血干细胞定向分化扩增和移植等 各种新疗法。 生物治疗（ Biotherapy ），顾名思义，根据肿 瘤生物学特性利用分子生物学技术开发生物药物， 应用于肿瘤防治的全新治疗模式。这种模式以前 曾被称之为 “ 免疫治疗 ” ，但随着分子生物学在肿 瘤防治研究的多层次全方位渗透，尤其是分子生 物学和分子靶向治疗在肿瘤诊断，治疗和预后上 的应用，许多原来归属免疫学范畴的治疗方法已 无法通用于所有生物学治疗技术和方法，故以生 物治疗更能准确概括包括免疫治疗、基因治疗、 分子靶向治疗造血干细胞定向分化扩增和移植等 各种新疗法。

4 生物治疗 恶性肿瘤 先天性遗传疾病 传染性疾病 心血管疾病 风湿免疫性疾病 基因治疗 抗血管生成治疗 干细胞治疗 诱导分化及凋亡 内分泌治疗 免疫治疗 细胞因子治疗 抗体治疗 疫苗治疗 过继免疫治疗 1

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6 肿瘤免疫治疗的基础 肿瘤具有抗原性并能引起 机体的免疫应答是生物治 疗的基础。 肿瘤具有抗原性并能引起 机体的免疫应答是生物治 疗的基础。

7 机体抗癌的免疫机制 细胞免疫和体液免疫，细胞免疫 为主。 细胞免疫和体液免疫，细胞免疫 为主。

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9 生物免疫治疗的种类

10 非特异性免疫治疗 无针对性，对多种肿瘤有抑制作用。 无针对性，对多种肿瘤有抑制作用。 免疫调节剂：细菌类制剂、左旋咪 唑等。 免疫调节剂：细菌类制剂、左旋咪 唑等。 细胞因子： interluekin-2 IL-2 、 interferon IFN 等。 细胞因子： interluekin-2 IL-2 、 interferon IFN 等。

11 特异性免疫治疗 特异性免疫治疗 对某一肿瘤有一定针对性的免疫治疗 对某一肿瘤有一定针对性的免疫治疗 肿瘤疫苗：用肿瘤细胞或经各种基因 修饰后的肿瘤细胞在体外制成瘤苗。 肿瘤疫苗：用肿瘤细胞或经各种基因 修饰后的肿瘤细胞在体外制成瘤苗。 抗体：用肿瘤细胞或抗原免疫所获得 的抗血清治疗病人。 抗体：用肿瘤细胞或抗原免疫所获得 的抗血清治疗病人。

12 继承性免疫治疗 用预先致敏的淋巴细胞及其产物治疗 病人。也称过继性免疫治疗。 LAK 细胞， IL2 LAK 细胞， IL2 转移因子（ TF) 、免疫核糖核酸 （ iRNA) 。 转移因子（ TF) 、免疫核糖核酸 （ iRNA) 。

13 生物治疗的适应症 1 ）实体肿瘤手术、化（放）疗以后 辅助治疗； 1 ）实体肿瘤手术、化（放）疗以后 辅助治疗； 2 ）术后不能耐受化（放）疗的肿瘤 患者； 2 ）术后不能耐受化（放）疗的肿瘤 患者； 3 ）不能接受手术治疗的晚期肿瘤患 者； 3 ）不能接受手术治疗的晚期肿瘤患 者； 4 ）肿瘤复发患者。 4 ）肿瘤复发患者。

14 What are the contraindications of CIK immunotherapy? a. Pregnancy and lactation b. Uncontrolled severe infection c. Severe allergic constitution d. T-cell lymphoma e. Epilepsy f. AIDS a. Pregnancy and lactation b. Uncontrolled severe infection c. Severe allergic constitution d. T-cell lymphoma e. Epilepsy f. AIDS

15 DC 细胞 树突状细胞 (dendritic cells, DCs) 是人体内最 有效的抗原提呈细胞，成为当今肿瘤生物治疗领 域备受关注的热点之一，越来越多的证据表明由 DC 激活的细胞免疫, 特别是细胞毒性 T 淋巴细胞 (CTL) 介导的免疫反应，在机体抵御恶性肿瘤和 传染性疾病中发挥着十分重要的作用，而且最近 DC 疫苗的临床Ⅰ、Ⅱ、 III 期试验也取得了令人 鼓舞的结果，显示出 DC 疫苗在恶性肿瘤治疗中的 巨大前景。 树突状细胞 (dendritic cells, DCs) 是人体内最 有效的抗原提呈细胞，成为当今肿瘤生物治疗领 域备受关注的热点之一，越来越多的证据表明由 DC 激活的细胞免疫, 特别是细胞毒性 T 淋巴细胞 (CTL) 介导的免疫反应，在机体抵御恶性肿瘤和 传染性疾病中发挥着十分重要的作用，而且最近 DC 疫苗的临床Ⅰ、Ⅱ、 III 期试验也取得了令人 鼓舞的结果，显示出 DC 疫苗在恶性肿瘤治疗中的 巨大前景。

16 What are CIK cells? Cytokine-induced killer (CIK) cells are immune cells that can seek and kill tumor cells. CIK cells were discovered in 1991 by Lanier and Schmidt-Wolf*. Further in-depth research was later conducted at the Stanford University Medical Center Cytokine-induced killer (CIK) cells are immune cells that can seek and kill tumor cells. CIK cells were discovered in 1991 by Lanier and Schmidt-Wolf*. Further in-depth research was later conducted at the Stanford University Medical Center

17 What are CIK cells? CIK cells are generated in vitro from single peripheral blood mononuclear cell (PBMC) by addition of interferon-gamma (IFN- γ), interleukin (IL)-2, IL-1 and antibody against CD3 (anti-CD3 mAb), with surface markers for both T-cell (TCR-α/β, CD3) and NK cell (CD56). CIK cells are generated in vitro from single peripheral blood mononuclear cell (PBMC) by addition of interferon-gamma (IFN- γ), interleukin (IL)-2, IL-1 and antibody against CD3 (anti-CD3 mAb), with surface markers for both T-cell (TCR-α/β, CD3) and NK cell (CD56). Compared to the lymphokine-activated killer (LAK) and tumor- infiltrating lymphocytes (TIL) used in the former adoptive immunotherapy, CIK has an enhanced proliferation and ability to kill tumors, with low toxicity and few side effects. Compared to the lymphokine-activated killer (LAK) and tumor- infiltrating lymphocytes (TIL) used in the former adoptive immunotherapy, CIK has an enhanced proliferation and ability to kill tumors, with low toxicity and few side effects. CIK biotherapy can kill cancerous cells directly, regulate and strengthen the immunity, and restore to the maximum extent the normal cell growth regulator, without any damage to immune system and function. It provides a thorough new method to treat tumors. CIK biotherapy can kill cancerous cells directly, regulate and strengthen the immunity, and restore to the maximum extent the normal cell growth regulator, without any damage to immune system and function. It provides a thorough new method to treat tumors.

18 How do CIK cells kill tumor cells? a. CIK cells are non-major histocompatibility complex (MHC). Thus CIK cells are capable of recognizing and killing different types of tumor cells though different mechanisms. The cytolytic activity of CIK cells makes themselves fuse with tumor cells and release cytoplasmic granules that dissolve the tumor. b. CIK cells, after induced and transfected by dendritic cells, have a strengthened ability to proliferate and kill tumors, and a greater precision to target and kill tumor cells by inducing apoptosis. a. CIK cells are non-major histocompatibility complex (MHC). Thus CIK cells are capable of recognizing and killing different types of tumor cells though different mechanisms. The cytolytic activity of CIK cells makes themselves fuse with tumor cells and release cytoplasmic granules that dissolve the tumor. b. CIK cells, after induced and transfected by dendritic cells, have a strengthened ability to proliferate and kill tumors, and a greater precision to target and kill tumor cells by inducing apoptosis. c. CIK cells produce IL-2, IL-6, IFN-r and other anti-tumor cytokines c. CIK cells produce IL-2, IL-6, IFN-r and other anti-tumor cytokines d. CIK cells injected back into humans can reactivate the immune system and enhance the immune functions d. CIK cells injected back into humans can reactivate the immune system and enhance the immune functions

19 技术路线 ① 手术肿瘤组织或活检组织；外周血样本的采集、运输与保存；② 免疫源制备与保存；③ DCs 的诱导与培养；④ 抗原致敏：肿瘤抗 原的负载；⑤ DC 疫苗的质量检测；⑥ DC 疫苗的临床注射；⑦ 疗 效评估；

20 生物治疗在肿瘤综合治疗中的地位 1. 外科手术治疗仍是当前根治早期恶性肿 瘤最有效、最重要的治疗方法，但是恶性 肿瘤早期发现和诊断目前情况尚不理想， 能进行早期恶性肿瘤根治术的患者较少； 1. 外科手术治疗仍是当前根治早期恶性肿 瘤最有效、最重要的治疗方法，但是恶性 肿瘤早期发现和诊断目前情况尚不理想， 能进行早期恶性肿瘤根治术的患者较少； 2. 即使是早期病变，一些肿瘤仍有较高的 转移率。因此单一的治疗手段的疗效有限， 故需多种治疗方案联合应用； 2. 即使是早期病变，一些肿瘤仍有较高的 转移率。因此单一的治疗手段的疗效有限， 故需多种治疗方案联合应用；

21 生物治疗在肿瘤综合治疗中的地位 3. 放射治疗和化疗对多种晚期恶性肿瘤均 有较高的近期有效率, 但对长期生存改善不 满意，生物治疗的长期疗效有明显的优势 ; 3. 放射治疗和化疗对多种晚期恶性肿瘤均 有较高的近期有效率, 但对长期生存改善不 满意，生物治疗的长期疗效有明显的优势 ; 4. 生物治疗联合手术、放疗和化疗可提高 部分肿瘤治愈率、延长存活、改善 QOL 。 4. 生物治疗联合手术、放疗和化疗可提高 部分肿瘤治愈率、延长存活、改善 QOL 。

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43 问题 文献少 文献少 （万方数据库、知网数据库 1993-2012 ） 单中心、样本少、样本科学性不强 单中心、样本少、样本科学性不强 缺乏随机临床双盲试验数据 缺乏随机临床双盲试验数据 缺乏多中心的临床数据 缺乏多中心的临床数据 缺乏疗效的评价标准 缺乏疗效的评价标准

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46 评价标淮

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53 讨 论

54 化疗联合 Cik 细胞治疗晚期肺癌一例分析 男性、易某某、 83 岁。因发现肺内肿块 30 天入院。细胞学：低中分化磷状细胞癌。 临床分期‖期、由于肺功能差不能手术。拒 绝放疗。 男性、易某某、 83 岁。因发现肺内肿块 30 天入院。细胞学：低中分化磷状细胞癌。 临床分期‖期、由于肺功能差不能手术。拒 绝放疗。 先期用特罗凯 2 月余，效果差。改用单药白 旦白紫杉醇 200mg ，严重心功能障碍，后 经枪救心功能恢复至代偿期。采用生物体 外扩增 cik 细胞回输后，病情明显改善。 先期用特罗凯 2 月余，效果差。改用单药白 旦白紫杉醇 200mg ，严重心功能障碍，后 经枪救心功能恢复至代偿期。采用生物体 外扩增 cik 细胞回输后，病情明显改善。

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56 总结 DC 和 CIK 细胞是有免疫活性的杀伤性细胞 DC 和 CIK 细胞是有免疫活性的杀伤性细胞 它的效应是 Non-MHC ，因此它有广谱的抗癌谱 它的效应是 Non-MHC ，因此它有广谱的抗癌谱 单用或联合并协同化、放、手术等治疗手段有互 补作用。 单用或联合并协同化、放、手术等治疗手段有互 补作用。 DC 和 CIK 细胞直接作用是提高患者的免疫力或杀 伤性机制 DC 和 CIK 细胞直接作用是提高患者的免疫力或杀 伤性机制 DC 和 CIK 细胞间接作用減轻化放疗的毒副作用提 高病人的生活质量。 DC 和 CIK 细胞间接作用減轻化放疗的毒副作用提 高病人的生活质量。